荔枝核离子交换树脂分离物对肝癌细胞体外增殖及凋亡的影响

为探讨荔枝核提取物对人肝癌细胞HepG-2增殖的影响,采用MTT法检测样品对HepG-2细胞的增殖抑制活性,选取活性最好的组分进行Hoechest 33258染色,检测其对HepG-2细胞的致凋亡能力;细胞凋亡率及细胞周期的改变采用PI染色和流式细胞术进行测定。结果表明,荔枝核提取物及纯化后的多个组分都显示出对HepG-2细胞的增殖抑制活性,其中组分L2．3效果最好,对HepG-2细胞有明显的剂量依赖性增殖抑制作用（P〈0．05）;倒置显微镜下可见经也．3处理72h后细胞形态明显变小变圆,正常存活的细胞随药物浓度增加而减少;Hoechest 33258染色后处理组HepG-2细胞染色质固缩,出现呈致密浓染蓝白色颗粒状荧光的凋亡小体;在100、50μg／mL浓度时,L2．3处理48h后HepG-2细胞凋亡率显著增高（P〈0．05）,G0／G1期细胞减少（P〈0．05）,S期细胞增多（P〈0．01）,G2／M期细胞减少。以上结果证明荔枝核提取物可通过诱导细胞凋亡,影响细胞周期分布抑制HepG-2细胞增殖。     

神经肽样物质在两栖类胚胎发育过程中的定位研究(英文)

本工作以东方蝾螈为实验材料,选用时期为：卵裂期,神经胚早、中、晚期,尾芽早、中、晚期,及蝌蚪期等８个时期。各期胚胎经过固定、ＯＣＴ包埋、切片后,分别做抗胰岛素、抗胆囊收缩素、抗生长素和抗β内啡肽等免疫反应,ＡＢＣ法染色处理并观察。结果发现：一、在胚胎发育的一定时期,阳性细胞出现在胚胎的一定部位。最早于尾芽早期出现在内胚层,此时,个别细胞呈阳性反应。尾芽中期阳性细胞明显增多（Ｆｉｇ．１）。到蝌蚪期,在成形的肠道外缘可以看到阳性细胞（Ｆｉｇｓ．２＆３）,躯干部内胚层的外缘也有呈阳性反应的细胞（Ｆｉｇ．４）。可以认为：胚胎发育过程中,神经肽物质出现的时空程序与神经系统发育不相平行。从卵裂期到神经胚期,神经管从出现到闭合的管内外,都找不到阳性物质的存在。直到尾芽早期才发现神经肽样物质,而且分布在内胚层。到尾芽中期,可在表皮中发现。而神经系统则到了尾芽晚期,也就是神经管闭合后８６小时,在眼杯后才出现阳性细胞。到蝌蚪期,神经肽样物质仅存在于周边神经系统。二、在神经系统,阳性细胞最早出现在尾芽晚期,在眼杯后方可以观察到成群的阳性细胞。该位置很可能是脑神经节（Ｆｉｇ．５）。蝌蚪期,神经系统从前端往后都可观察到阳性细胞,它     

蛇胸腺胚胎发育的组织学研究

该文应用光镜、电镜和细胞计数技术对胚胎发育期虎斑颈槽蛇胸腺的发育分化进行了研究。在胚胎发育１１期,胸腺原基内出现前淋巴细胞。从胚胎发育１２期至出生前（１６期）,淋巴细胞不断增殖分化,小淋巴细胞逐渐增多,而淋巴母细胞和中淋巴细胞逐渐减少。胸腺皮质和髓质形成于１６期。巨噬细胞以及肌样细胞和胸腺ＡＰＵＤ细胞分别形成于胚胎发育１４期和１５期,随后数量有所增加,分别分布于胸腺皮质和髓质。     

白藜芦醇对人子宫内膜癌细胞系AN3CA增殖和凋亡效应及其机制探讨

目的：探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）对人子宫内膜癌细胞AN3CA的增殖抑制和凋亡诱导效应及可能存在的机制。方法：应用噻唑蓝（MTT）法检测Res对AN3CA的增殖影响;流式细胞术检测Res对细胞周期分布和凋亡影响：荧光实时定量PCR检测Res对细胞Bcl-2、Bax和MMP-9mRNA表达水平的影响;WesternBlot方法检测Res对PCNA、Bcl-2、Bax及ERK1／2、P—ERK1／2蛋白表达水平的影响。结果：Res对子宫内膜癌细胞AN3CA具有显著的生长抑制作用（P〈0．01）,呈时间-剂量依赖性;不同浓度Res处理细胞G0／G1期比例显著增加伴随S期细胞数的减少;细胞凋亡率明显增高,200Dmol／lRes处理48h凋亡率可达30．96％±2．041％（P〈0．01）。与对照组相比,Res能抑制PCNA的蛋白表达量,增加Bax和降低Bcl-2转录和蛋白水平的表达量。Res在短时间内（0．5—1h）激活ERK1／2的磷酸化表达但随着作用时间延长（4—48h）其表现为抑制效应。结论：Res具有抑制AN3CA细胞增殖,诱导细胞G0／G1期阻滞和凋亡的效应。Res诱导凋亡可能是通过上调Bax,下调Bcl-2发挥作用,其抗癌作用机制可能与ERK1／2通路失调相关。     

小鼠生精细胞增殖与凋亡的年龄变化

为研究雄性小鼠睾丸在发生,发育过程生精细胞增殖与凋亡的年龄变化,本研究采用了免疫细胞化学,凋亡细胞原位检测,电镜及体视学图象分析等方法,对胚胎15天到生后10月后发育阶段生精细胞的超微结构,PCNA表达,凋亡情况进行了较深入地研究,结果：（1）精原细胞PCNA反应在胚胎15天为阳性,从胚胎18天到生后5天,降为弱阳性,而阳性的精原细胞在生后7天重新出现,一直到生后6月,仍可见部分精原细胞呈阳性反应;（2）生后3天,可见凋亡的精原细胞染色质浓缩,核膜出现明显的核周隙,核碎裂,凋亡细胞数从生后1天到生后第3周有增加的趋势,于生后第3周出现峰值,之后降低,之后降低,结论：（1）PCNA阳性细胞而密度到生后第2周出现峰值,而凋亡细胞数于生后3周出现峰值,生精细胞凋亡的高峰要滞后其增殖峰1周左右,而且与其所处生精周期的特定阶段有关;（2）精原细胞在胚胎发育过程中向曲细精管周边迁移,其排列由无序到有序;（3）在生后各发育 ,精原细胞始终保持DNA复制的能力。     

小鼠植入前胚胎GCN5和HDAC1表达模式及体外培养对其表达的影响

为探讨小鼠植入前胚胎组蛋白乙酰化酶GCN5（general control of nucleotide synthesis,GCN5）和组蛋白去乙酰化酶1（histone deacetylasel,HDAC1）的表达模式及常规体外培养对它们表达的影响,应用荧光免疫细胞化学技术,检测了体内和体外培养的小鼠2、4、8细胞期卵裂胚胎、桑葚胚和囊胚GCN5和HDAC1的表达。结果显示,GCN5在体内组各细胞期卵裂胚胎和桑葚胚的细胞浆内均呈高表达,细胞核内未见明显表达,而囊胚细胞的细胞浆和细胞核内均无表达：HDACl在体内组小鼠2细胞期胚胎中以细胞浆内表达为主,在其他各期胚胎均以细胞核内表达为主。囊胚期内细胞团部分细胞的细胞核内未见HDAC1表达。GCN5在体外组小鼠植入前各期胚胎均不表达。而HDAC1的表达强度明显低于体内组的。提示体外培养抑制小鼠植入前胚胎GCN5和明显降低HDAC1的表达,影响胚胎基因的正确性表达。     

水飞蓟宾诱导肺腺癌Anip973细胞凋亡的分子机制研究

目的：探讨水飞蓟宾诱导肺腺癌Anip973细胞系细胞凋亡的分子机制。方法：采用MTT法、倒置显微镜和电子显微镜等形态学检测以及流式细胞仪（FCM）技术检测、DNALadder分析、凋亡分子PARP的表达检测细胞凋亡,同时进行凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9表达活性分析。结果：（1）水飞蓟宾对人肺腺癌Anip973细胞系细胞的增殖有显著抑制作用;（2）水飞蓟宾作用Anip973细胞48h后,随着浓度的增加,倒置显微镜下可见细胞数目减少,胞体变小、变圆,到高浓度时出现较多的死亡细胞;（3）扫描电镜观察发现,随着水飞蓟宾作用浓度的增加,Anip973细胞中出现增多的凋亡细胞,凋亡细胞表现出典型的超微结构特征;（4）流式细胞仪检测的结果发现,随着药物作用时间的延长,Anip973细胞的G1期细胞比例增多,S期细胞明显减少,G2期细胞略有减少,并出现明显的凋亡峰。（5）水飞蓟宾作用后的Anip973细胞出现明显的DNALadder和PARP降解增加等凋亡特征;（6）水飞蓟宾作用后,Anip973细胞中的凋亡相关蛋白Bax表达增加、caspase-3和caspase-9酶活性增加,而Bcl-2表达降低。结论：水飞蓟宾在体外有抑制人肺腺癌细胞Anip973的增殖作用,并通过激活线粒体依赖的caspase凋亡通路,诱导其凋亡。     

蛹虫草对人胃癌细胞BGC-823生长抑制与诱导凋亡作用研究

目的研究蛹虫草水提物（the aqueous extract of Cordycep Militaris,AEoCM）对人胃癌细胞（BGC-823）生长抑制与凋亡诱导作用。方法采用不同浓度的AEoCM分别作用于胃癌BGC-823细胞,24、48和72h后,应用倒置相差显微镜观察胃癌细胞的形态变化,四氮甲基唑蓝（MTT）测定细胞生长抑制效应,流式细胞仪（FCM）检测细胞周期变化及凋亡率,免疫组化方法测定NK-k BP65的表达。结果AEoCM能显著抑制BGC-823细胞增殖,且在一定的浓度范围内呈时问和浓度依赖性。形态学观察发现,细胞变暗、皱缩,形状不规则;FCM检测结果显示,G2期的细胞于作用72h后分布显著增加,使细胞阻滞于G2期。0．5g／L AEoCM在24、48和72h凋亡率分别为4．655％、11．039％和19．368％,其凋亡程度与时间呈正相关,免疫组化方法测定NK-k BP65的表达下调。结论AEoCM能明显抑制BGC-823细胞的生长,诱导其细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的机制可能与下调NK—k BP65的表达有关。     

食蟹猴和恒河猴卵母细胞及早期胚胎玻璃化冻存

为了节省经费和使转基因模型动物品种资源得到妥善保存,该研究利用自制的梯度浓度冷冻液和解冻液结合玻璃化方式分别冷冻和解冻了非人灵长类动物的183个卵母细胞（GV期、MI期和MII期）、114个卵裂期胚胎（2-细胞期、4-细胞期和8-细胞期）及25个桑椹期胚胎。其中食蟹猴卵母细胞67个,卵裂期胚胎45个,桑椹期胚胎11个;恒河猴卵母细胞116个,卵裂期胚胎69个,桑椹期胚胎14个。复苏后存活率分别为56/67（83.58%）、36/45（80.00%）、9/11（81.82%）、102/116（87.93%）、55/69（79.71%）和11/14（78.57%）。结果表明,快速玻璃化冷冻法简便且胚胎存活率高,是一种较好的冷冻食蟹猴和恒河猴卵母细胞及胚胎的方法。     

氧化诱导K_(562)细胞凋亡机制的初步探讨

以过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）诱导人慢性髓细胞白血病（Ｋ５６２）细胞为凋亡模型,采用流式细胞仪（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ,ＦＣＭ）和激光共聚焦扫描显微镜（ｌａｓｅｒｃｏｎｆｏｃａｌｓｃａｎｎｉｎｇｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ,ＬＣＳＭ）研究细胞凋亡,形态观察出现核固缩,核碎裂及凋亡小体等典型凋亡特征．ＤＮＡ电泳图谱出现“Ｌａｄｄｅｒ”．ＦＣＭ检测在Ｇ０／Ｇ１峰前出现一低ＤＮＡ含量的凋亡峰．ＬＣＳＭ显示凋亡细胞ｃ－Ｆｏｓ．ｃ－Ｊｕｎ和ＮＦκＢ表达量均有不同程度的增加．该结果提示上述三种转录因子可能参与氧化诱导凋亡过程中基因的调控作用．     

4-PA对BEL-7402细胞的生长调控和诱导凋亡作用的研究

应用ＭＴＴ、流式细胞术研究了新型肿瘤诱导分化剂４－ ＰＡ 对人肝癌细胞系ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞的生长调控、诱导凋亡作用。结果表明： ４ － ＰＡ 对ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞增殖抑制的ＩＣ５０ 为４ －９ｍ ｍｏｌ／Ｌ,随着作用时间的增加,ＩＣ５０ 增加。作用效果迅速,在０ ．５ 小时就有效地抑制了细胞增殖,抑制率随４－ ＰＡ 浓度的增加和作用时间的延长而增加,在达到最大抑制率后出现饱和。流式细胞仪对细胞周期和细胞凋亡的分析发现：４ － ＰＡ 对细胞增殖期（Ｓ期、Ｇ２ 期） 有较强的抑制和逆转作用,使细胞群截止在Ｇ１ 期。随着作用时间的延长和４ － ＰＡ 浓度的增加,细胞凋亡的比例增加,凋亡细胞多来自于细胞增殖期（Ｓ 期、Ｇ２ 期） 。诱导凋亡和使细胞截止于细胞静息期是４ － ＰＡ 抑制细胞增殖的主要途径。     

绍兴家鸭腺胃生长抑素免疫反应细胞的年龄变化

用ＡＢＣ免疫组织化学方法,标记０—２２周龄期绍鸭腺胃生长抑素免疫反应细胞（Ｄ细胞）。观察细胞形态、分布,计数腺胃内Ｄ细胞数目及其与体重、胃重的关系。结果表明;１．腺胃内Ｄ细胞形态多为圆形、卵圆形,单个散在分布。主要位于腺胃腺叶的内侧区和中间区。２．腺胃内Ｄ细胞数随周龄增加而渐增多,至１８周龄达顶峰,２２周龄开始减少。此变化规律用二次曲线方程Ｙ＝０．１０２＋４．４５２Ｘ—０．１４２Ｘ～２反映, Ｒ～２＝０．９５（Ｐ＜０．０１）。３．Ｄ细胞数与体重在６周龄后开始出现负相关,至１８周龄达显著负相关,ｒ＝－０．８２９（Ｐ＜０．０５）。Ｄ细胞数与胃重在各周龄期均未见明显相关。     

生命过程的相似性--从着床部位母体细胞的凋亡谈起

胚胎着床受许多因素的精确调控,其中着床部位母体细胞的凋亡在围植入期执行着重要的生理任务。但它自身的发生机制尚不完全清楚,在胚胎着床中的调节机制就更远远落后于凋亡在其他系统领域中的相知程度。因此,对细胞凋亡在着床部位母体细胞中出现的深入研究,将进一步完善我们对着床机制的理解,同时,因为肿瘤和胚胎对机体作用相似性也使这个领域的研究具有特殊的意义。     

地塞米松诱导红系细胞凋亡的观察(英文)

正常机体内,红细胞生成素（ＥＰＯ）诱导红系细胞分化,并阻止其凋亡,使其维持机体所需足够的数量。本文采用诱发贫血病毒（ＦＶＡ）诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞所形成的红细胞为实验系统,研究了外界因子？？地塞米松（Ｄｅｘ）对ＥＰＯ作用的影响。取６８周雌性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,尾部静脉注射含ＦＶＡ的小鼠血清。１５天后,断颈处死。取脾于ＩＭＤＭ中漂洗、剪碎、过滤、离心、制成单细胞悬液,在ＥＰＯ存在下,于平皿中培养至不同的时期后,进行不同浓度、不同时间的Ｄｅｘ处理。取细胞进行：（１）台盼蓝染色计数死细胞数;（２）观察ＤＮＡ电泳图谱;（３）电镜检察细胞学变化。Ｆｉｇ．１表明：随着Ｄｅｘ处理浓度和时间的增加,细胞死亡率也增加。Ｆｉｇ．２表明：１０－４浓度Ｄｅｘ处理,即可使早（１２ｈ）、中（２４ｈ）幼期红细胞凋亡,ＤＮＡ断裂成多聚核小体,产生明显ＤＮＡ梯形带。Ｆｉｇ．３表明：高浓度Ｄｅｘ可以使早幼期红细胞凋亡。电镜观察表明：与对照（Ｆｉｇ．４）比较,Ｄｅｘ处理后,细胞核固缩,染色质沿核膜内面周边凝聚,核周间隙扩张,胞质内出现空泡（Ｆｉｇ．５）;随后细胞破碎,出现大量凋亡小体（Ｆｉｇ．６）。Ｄｅｘ拮抗ＥＰＯ,诱导红系细胞凋亡的现象此     

血清及BSA对牛体外受精胚胎发育过程超微结构影响的研究

本研究将牛IVF胚胎分别在SOF FCS、SOF BSA和SOF PVA三种培养系统内进行培养,然后分别取三个系统中发育到原核期、2细胞、4细胞、8细胞、桑椹胚和囊胚阶段的胚胎进行透射电镜的观察,了解培养系统中血清和BSA的添加与否对胚胎发育过程中细胞内脂滴、细胞连接、细胞凋亡和微绒毛发育的影响。观察结果表明：各培养系统胚胎的细胞质中均存在大量的脂滴,表明外培养系统是造成脂滴积累的主要原因;血清的添加不会进一步促进脂滴的大量积累,反而可以避免多个脂滴聚合成更大的脂滴。三种培养系统条件下胚胎细胞连接无显著差异。培养系统中添加FCS或BSA时,桑椹胚期以后的胚胎细胞中存在凋亡小体,表明血清成分是引起细胞凋亡的重要原因。培养系统中血清成分的缺乏会影响胚胎表面微绒毛的发育。     

一种抗凋亡蛋白——存活素的研究

存活素(survivin)是一种新近发现的16．5kD细胞内蛋白,属于抗细胞凋亡蛋白家族。在胚胎和各类肿瘤中均表达,但在除胸腺和睾丸以外的成人组织中未被发现。阐明survivin在细胞凋亡和增生中的分子机制及其作用,在抗癌治疗和抑制对机体有害的细胞凋亡方面具有重要意义。     

顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型的建立

目的：建立常见凋亡诱导剂顺铂（Cisplatin）诱导非洲绿猴肾细胞（Vero）凋亡的模型,为进一步研究抗凋亡基因在细胞凋亡中的分子机理打下基础。方法：分别以不同浓度的顺铂处理Veto细胞48h,用噻唑蓝（MTT）比色法、Gimesa染色、流式细胞术检测,观察处理后细胞的生长活力和凋亡情况。结果：以未处理的细胞作为对照组,1、2、3、4,5μg／mL的顺铂处理的Vero细胞生存率分别为（79．02±6．10）％、（68．84±4．42）％、（56．66±4．07）％、（46．83±3．76）％、（29．04±5．93）％（P〈0．01）;经顺铂诱导后细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征;流式细胞仪检测,0、1、2、3、4、5μg／mL的顺铂处理的Vero细胞后凋亡率分别为1．66％±0．19％、16．65％±1．26％、24．82％±1．03％、36．22％±1．04％、48．49％±1．24％、43．34％±1．17％（P〈0．01）。结论：本实验成功建立顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。     

小鼠电融合四倍体胚胎早期发育的研究

多倍体发育现象在低等动物,尤其是在无脊椎动物中比较普遍,在哺乳动物中多倍体往往发育到胚胎早期就死亡,因而在自然界中不能存活。探讨哺乳类四倍体不能存活的原因是当今生物学研究的热点问题之一。目前,电融合技术是大量获得四倍体胚胎的主要手段。本以8－12周龄昆明小白鼠为实验对象,取其2－细胞胚胎于Whitten氏液中进行电融合,再移入CZB液中培养。电刺激的条件分别为：1．0kv/cm,40μs,和0．8kv/cm,80μs。对融合胚发育的状态、细胞数目及染色体组成等进行观察的结果表明,融合胚培养24小时后发育到4－细胞期,并发生致密化（Tab.1)。融合胚的囊胚形成时间与体内发育的同期胚胎及体外培养的同期二倍体胚胎基本一致（Tab,2;Fig.1)。融合囊胚的细胞数平均为13．0±4．95,显（P＜0．01）少于体外发育囊胚（37．0±5．92）和体内发育囊胚（41．6±2．4）的细胞数（Tab.3)。融合胚各个分裂相的染色体数目分布情况见Fig.2,其四倍体（4n＝80）率为42．86％,非整倍体率达57．14％。而对照组的体内发育囊胚的非整倍体率仅为11．54％;（Tab.4),与Kaufman的结果（12．4％）很接近,说明本实验中的染色体制备技术和分析方法是可行的。融合囊胚的细胞数目减少和高发的非整倍体率可能是四倍体胚胎发育能力差的原因。     

牛体细胞克隆胚胎类ES细胞集落的筛选及其核移植

对第7d的牛体细胞克隆囊胚进行体外增殖培养,分离筛选类ES细胞,并对其进行了传代培养,接种在饲养层上的体细胞克隆囊胚细胞,在传代的24h内增殖形成小集落,2～3d有雀巢状的集落出现,筛选形态相同的细胞集落进行传代培养,4～5代后,皿底出现多个大小不等的多细胞单层集落,将传4～5代的细胞集落接种到无饲养层的4孔培养皿中培养,24h出现多细胞单层集落,4～7d长满皿底,并形成上皮样细胞,呈网状,将其作为核供体细胞进行核移植实验。结果有80%（40/50）核-质融合的移核重构胚发生卵裂,5%（2/40）发育至桑椹胚期,2.5%（1/40）发育至囊胚期,92.5%（37/40）停止在2～4细胞期,结果表明：采用牛体细胞克隆胚胎的类ES细胞进行核移植,具发育形成早期胚胎的潜能。     

蛋白激酶Cα在小鼠孤雌及四倍体胚胎早期发育过程中的分布和作用

为了观察蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα在昆明白小鼠受精卵、孤雌激活和四倍体胚胎早期发育阶段的亚细胞定位和致密化进程中的表达变化,本实验利用免疫荧光化学染色与激光共聚焦显微镜观察相结合的方法,对受精卵、孤雌激活和四倍体胚胎早期发育阶段PKCα的表达进行了定位观察,并利用Western blot对三组胚胎致密化进程中PKCα的表达进行定量分析.结果显示,PKCα在上述三组胚胎发育的2-细胞期至囊胚期均有表达,虽然不同胚胎PKCα的分布在同一发育阶段存在差异,却表现出在各胚胎期主要分布于卵裂球核染色质内,以及在胚胎致密化开始,PKCα在卵裂球连接处发生重新分布的共同特点.此外,三组胚胎PKCα在致密化进程中的表达呈升高趋势,即致密化后的表达高于敛密化前.结果表明,PKCct对胚胎致密化的调节具有重要作用,其在8-细胞/4-细胞期的重新分布是胚胎进入桑椹胚期的必然事件,是胚胎致密化的前提,同时伴随蛋白表达增多.此外,PKCα在囊胚期发生了植入前的第二次重新分布.PKCα在三组胚胎各发育阶段表达情况各不相同,它对小鼠胚胎发育的影响体现在整个早期发育阶段.PKCα在小鼠受精卵早期发育阶段的两次重新分布可能与在致密化开始时启动的细胞黏附事件存在某种必然联系.