酵母各属间颜色反应、尿素酶活性和发酵力的比较

本文对比了28个属、37个种、74株酵母的颜色反应、分解尿素能力以及发酵力的关系,并讨论了这些特性与其它特征(如DNA碱基组成等)的一致性。这种一致性说明了一些无孢子酵母的亲缘关系。     

掺假饲料酵母中尿素含量的测定

掺假饲料酵母中尿素含量的测定张庆华，罗辉芬，王艳华（辽宁省微生物研究所，朝阳１２２０００）随着养队业的迅猛发展，蛋白质饲料越来越缺乏，饲料酵母以其蛋白质含量高，氨基酸齐全等优势逐渐占领市场，也深受广大养殖户的欢迎。但是由于国家尚未制定饲料酵母的国家标...     

控释掺混尿素对稻、麦土壤氮与酶活性的影响

通过大田试验,共设7个处理,即不施氮、常规施肥以及掺混控释氮肥10%、20%、40%、80%、100%处理,探讨了不同施肥处理对土壤中4种形态氮(全氮、铵态氮、硝态氮、微生物生物量氮)和3种氮功能性酶(脲酶、蛋白酶、硝酸还原酶)活性的影响,以探究控释掺混尿素对稻、麦土壤肥力和环境的影响.结果表明: 土壤全氮在稻、麦全生育期内趋于稳定,且掺混比例20%以上各控释氮肥处理在稻、麦季均无显著差异;掺混40%以上控释氮肥能有效促进稻、麦生育中后期土壤无机氮水平;随稻、麦生育期推进,掺混40%以上控释氮肥处理可显著提高土壤微生物生物量氮,但常规施肥处理的微生物生物量氮整体呈明显下降趋势;掺混40%以上控释氮肥能明显提升稻、麦生育中后期土壤酶活性,土壤蛋白酶与硝酸还原酶活性在作物生育后期均随掺混比例增加而提高,以100%控释氮肥处理土壤酶活性最高.掺混20%以上控释氮肥处理能明显降低水稻季分蘖期脲酶活性,推迟铵态氮峰值期,有利于减少氮损失;掺混40%以上控释氮肥处理均可保障稻、麦生育中后期的氮素供应,刺激土壤脲酶与蛋白酶参与氮素转换,促进了土壤氮素有效性;100%控释氮肥处理对稻、麦生育后期土壤硝酸还原酶活性增加最明显,与掺混40%～80%控释氮肥处理相比,可显著减少小麦季20～40 cm土壤硝态氮残留量,在减少氮素损失方面的效果明显.     

汞、镉对土壤脲酶活性影响的研究Ⅰ.尿素浓度

对不同尿素浓度条件下重金属与土壤脲酶活性关系进行了研究。结果表明,尿素浓度对脲酶活性具有显著的影响。在供试浓度范围内可采用线性和Langmuir模型较好地表征二者关系。并得到脲酶活性的尿浓贡献率,尿浓贡献变化率和最大表观脲酶活性等参数;Hg,Cd明显降低了前述参数值,其中Hg Cd复合污染的抑制作用最强,Hg的生态毒性最大;同时初步获得土壤酶促反应过程中存在吸附机制。     

清香型白酒发酵过程中酵母群落结构及其与尿素代谢的关系

【目的】探索清香型白酒发酵过程中酵母群落结构及演变,分析潜在的关键尿素代谢酵母及其环境调控因素,为降低发酵过程中氨基甲酸乙酯的含量提供理论依据。【方法】通过相关性分析明确发酵过程中氨基甲酸乙酯主要前体物质及其代谢微生物类群,利用高通量测序技术解析酵母群落结构组成,并结合偏最小二乘回归分析寻找潜在的关键尿素代谢酵母。采用冗余分析评价发酵过程中环境因素对酵母群落结构的影响。【结果】尿素是清香型白酒发酵过程中氨基甲酸乙酯的主要前体物质,酵母是尿素代谢的主要微生物。高通量测序结果显示,在97%的相似度下进行操作分类单元聚类后,共鉴定出22个酵母种。其中,嗜高压有孢汉生酵母(Hanseniaspora osmophila)、发酵毕赤酵母(Pichia fermentans)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)与尿素合成存在正相关性,库德毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)与尿素降解存在正相关性。酒醅含水量、p H、乙醇和精氨酸是影响发酵过程中酵母群落演替的重要环境因素。【结论】环境因素影响潜在的关键尿素代谢酵母,为降低发酵过程中尿素与氨基甲酸乙酯含量提供理论依据。     

春季海南岛近岸海域尿素与浮游生物的脲酶活性

2011年春季(4-5月),对海南岛的海口湾、澄迈湾、文昌八门湾、陵水新村湾和大东海5个海湾的尿素浓度及浮游生物的脲酶活性开展调查研究,结合其它理化环境因子,分析海南岛近岸海域尿素的可利用性及其对该海区浮游植物生长可能产生的影响.结果表明,海南岛近岸水体中尿素平均浓度为2.07-3.30 μmol/L,占总溶解态氮TDN含量的14％-38％,尿素占TDN比例由北向东、南方向递增.浮游生物脲酶活性为0.30-0.84 μmolN· L-1· h-1,海口湾最高,从北部向东、南部逐渐减少.各海湾较高水平的尿素和脲酶活性主要分布在排污口、养殖区或旅游区的近岸海域.硅藻为优势种,甲藻种类少且密度低,部分甲藻密度达到104-105个/L的水体,尿素和脲酶活性也处于较高水平.海区浮游植物细胞密度与脲酶活性或尿素占TDN比例等因子存在相关性,表明尿素是海南海域浮游植物生长不可忽略的重要氮源.尿素在一定程度上促进春季海南岛近岸海域甲藻等浮游植物的生长,可能对浮游植物群落结构的改变产生重要影响.     

控释尿素和普通尿素配比对不同氮效率玉米叶片衰老特性和土壤酶活性的影响

控释尿素和普通尿素配比施用可以同步玉米氮素需求,延缓后期衰老,增加产量。本试验以黄淮海区域两种氮效率玉米作为对象,研究控释尿素和普通尿素不同配比对其叶片衰老特性、土壤酶活性和土壤无机氮的影响。试验选取黄淮海主栽玉米品种豫禾988（氮低效）和郑单958（氮高效）作为试验材料,设置6个施氮处理（CK、N180U、N180C1、N180C2、N180C、N300U）,其中CK为不施氮处理,180、300代表施氮水平分别为180 kg/hm²和300 kg/hm²,U代表全尿素处理（基肥：追肥=2：3）,C1、C2分别代表控释氮：尿素氮为1：2和2：1（基肥一次施用）,C代表全控释尿素处理（基肥一次施用）。2018-2019年结果表明：与CK相比,豫禾988在N180C1和郑单958在N180C2处理下,能够在玉米生育后期显著提高穗位叶超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）活性,降低膜脂过氧化物（MDA）含量,同时也增加了土壤无机氮含量、脲酶和蔗糖酶活性。综上所述,针对不同氮效率玉米品种,通过控释尿素和尿素合理配施,利用速效氮和控释氮的释放来延缓玉米功能叶片衰老,延长功能期,提高生育后期土壤无机氮含量和酶活性,共同促进玉米生长,增加玉米产量,其中豫禾988和郑单958分别在N180C1和N180C2处理下效果最佳。     

我国各类基物上的酵母菌分布及其尿素酶活性

本文讨论了2300株由我国各地分离到的酵母菌和类酵母菌与各类基物的关系。共述及23属,占Lodder(1970)系统的半数以上。在十几类基物中酵母菌的分布各有不同,叶子上有大量掷孢酵母,果实上比其它基物更能获得克勒克酵母属(Kloeckera),在咸腌食品中相对地有较多耐高渗透压的酵母如球拟酵母属(Torulopsis)与德巴利酵母属(Debaryomyces)。对部分属的定种工作也已进行,说明某些属的种在我国均有发现而且为数不少。此外还研究了600余株代表各类酵母的尿素酶活性,结果说明担子菌酵母或系统上接近担子菌的酵母都有尿素酶活性,而子囊菌酵母则无。根据作者的观察子囊菌酵母中裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)则常常例外地有尿素酶反应,且常有辅酶Q_(10),从而可见裂殖酵母属有其特有的生物学特性,在系统上很可能与其它子囊菌酵母不同。对属于不完全菌的无孢子酵母也进行了尿素酶活性测定,结果表明它们部分与子囊菌有关,部分与担子菌有关。     

酵母PH02蛋白的磷酸化研究

本文报道ＰＨＯ２蛋白能被一种未知的蛋白激酶磷酸化ＰＨＯ２蛋白的第２３０－２３３位氨基酸残基组成一个可能被ｐ３４相关的蛋白激酶识别的一致序列（ＳＰＩＫ）,用点突变的方法将Ｓｅｒ－２３０变成Ａｌａ可导致ＰＨＯ２蛋白激活ＰＨＯ５表达能力的完全丧失。进一步的研究显示,将Ｐｒｏ－２３１突变成Ｓｅｒ同样可导致ＰＨＯ２的矢活,而Ｓｅｒ－２３０突变成Ａｓｐ则不影响ＰＨＯ２的活力。由于ＰＨＯ２（Ａｓｐ－２３０）突变体通过在第２３０位残基引入了一个负电荷,可以看成Ｓｅｒ－２３０被磷酸化的状态,由此推测ＰＨＯ２蛋白可能需要在Ｓｅｒ－２３０被磷酸化后才会具有激活ＰＨＯ５基因转录的能力。体外磷酸化分析的结果表明,大肠杆菌表达的ＧＳＴＩ－ＰＨＯ２（野生型）融合蛋白能够被酵母ＹＰＨ４９９总蛋白抽提物磷酸化,如果以ＳＰＩＫ（２３０－２３３）一致序列被破坏的ＧＳＴ－ＰＨＯ２（Ｐｒｏ－２３１→Ｓｅｒ）突变体作为底物,则观察不到该融合蛋白被酸磷化标记。结果表明ＰＨＯ２在细胞内是一种磷骏化蛋白,第２３０位Ｓｅｒ的磷酸化是该转录因子较制ＰＨＯ５基因表达的活性所必需。     

热带假丝酵母多倍体变种的细胞色素P450和尿素在烷烃代谢中的作用

建立了可行的细胞色素 P450测定方法。考察了以烷烃为单一碳源的酵母细胞色素P450的一氧化碳差示光谱,峰值约为455nm。观察了烷烃培养的酵母细胞色素 P450在生长期中的消长。比较了十四醇、十四醇添加苯巴比妥、以及正十四烷等三种不同培养条件下酵母细胞色素P450的含量和发酵产物的成份。结果表明,细胞色素 P450为烷烃转化成二元酸所必需。烷烃为单一碳源培养酵母时,培养基中过量尿素(0.2%以上)促进烷烃利用和酵母生长,降低细胞色素 P450生成和二元酸的积累。根据上述实验结果和本研究室以前报道,提出了烷烃代谢调控模式。     

大鼠硫酸腺嘌呤预处理心肌酶活性及SDH的电镜细胞化学观察

本实验用硫酸腺嘌呤预处理方法与经典缺血预处理方法对比分析大鼠心肌酶活性及SDH的电镜细胞化学结构。雄性SD大鼠24只,分4组,即Ⅰ组:正常对照组,Ⅱ组：缺血再灌注组;Ⅲ组：经典缺血预处理组;Ⅳ组：硫酸腺嘌呤预处理组。检测肌酸激酶（CK)、细胞色素氧化酶（CCO）及琥珀酸脱氢酶（SDH）的活性。结果显示：与Ⅱ组比,Ⅲ组、Ⅳ组CK漏出减少,CCO、SDH活性增强,细胞超微结构保存良好。结果表明：硫酸腺嘌呤预处理方法具有类似经典缺血预处理效应。     

固定化酵母细胞生产1,6-二磷酸果糖研究

本文研究了固定化酵母细胞制备果糖1,6二磷酸(FDP)的方法及其生产。用卡拉胶包埋方法固定化酿酒酵母(Sacchromyces cerevisae),对含葡萄糖1.0M,磷酸盐0.8M的糖磷液,pH6.5,在37℃下进行磷酸化反应。反复分批转化20天以上,可达到平均产FDPH_427.58mg/ml,最高为59.94mg/ml。用100ml固定化细胞生物反应器连续运转309h,稀释速率D=0.097h~(-1),平均产FDPH_4 21.51mg/ml。20L反应器连续运转,生产能力达到1.7g/h.L。用层析方法制备FDPNa_3结晶粉,提取收率为72.08％,制备质量达到或超过了国内外同类产品的质量要求。     

固定化酵母反应动力学的研究

本文采用微分反应器初速度法对以海藻酸钙为载体的固定化酵母的耗糖动力学进行了研究。测得了固定化酵母的表观动力学常数,并进一步求得了固定化酵母的本征动力学常数。实验结果表明,固定化酵母的表观动力学常数显著受内外扩散的影响,其本征动力学常数与 游离酵母的动力学常数比较,也有较大的不同。此外,对内扩散对反应动力学的影响进行了理论分析和实验验证。     

壳聚糖球固定化酵母细胞的研究

以戊二醛为交联剂,将壳聚糖球交联引入醛基,然后将交联的壳聚糖球浸泡在酵母细胞悬浮液中,制备了固定化酵母细胞壳聚糖球。以苯乙酮酸为底物,催化合成了D-扁桃酸。最优固定化条件是戊二醛的质量分数w(GA)=1%,酵母细胞与交联壳聚糖球的质量比m(Y):m(CB)0=0.5,交联时间为6h,固定化时间为18h,底物浓度为10mmol/L,在此条件下反应最大转化率和产物光学纯度分别高达67.86%和98.05?。固定化酵母壳聚糖球具有良好的重复使用性和贮存稳定性。     

不同湿地模型净水效果与基质酶活性相关性的比较研究

为了研究不同植物和基质组合的小型湿地模型净水效果及其与基质酶活性(脲酶和磷酸酶)之间的相关性, 并选出净水效果最佳的模型, 通过对两种植物(茭白和慈姑)和两种基质(石榴石和磁铁矿)进行组合构建不同的湿地模型, 对不同湿地模型进出水口水质和基质酶活性进行测定并加以分析进行优化选择。结果表明: 湿地模型对亚硝态氮的去除率最高, 最高能达到98.87%, 最低也能达到58.06%, 对高锰酸盐的去除率最低, 最高37.91%, 最低2.51%; 湿地模型X5-X6对各污染物的去除率基本上都比X1-X4高, 总氮去除率平均高3%, 氨氮去除率平均高10%, 亚硝态氮去除率平均高10%, 总磷去除率平均高15%, 正磷酸盐去除率平均高20%, 高锰酸盐去除率平均高8%; 在相同种植数量的情况下, 茭白和慈姑混合种植的湿地模型总体上比茭白和慈姑单一种植的湿地模型具有更好的净水效果, 是实验中的最佳湿地模型; 湿地模型的脲酶活性与总氮去除率具有显著的相关性(相关系数为0.903—0.980), 脲酶可作为判定人工湿地去除养殖水体中总氮效能的指标, 湿地模型磷酸酶活性与高锰酸盐去除率总体上具有显著相关性(相关系数为0.821—0.992), 磷酸酶可作为判定人工湿地去除养殖水体中高锰酸盐效能的指标。研究为人工湿地植物和基质优化选择和基质酶活性评价净水效果提供了理论依据。     

抗、感黑穗病谷子品种几种酶活性的比较研究

本文对7个不同抗、感黑穗病的谷子品种在不同时期进行了超氧化物歧化酶、过氧化物酶、多酚氧化酶活性的比较研究。结果表明,谷子感染黑穗病后,体内超氧化物歧化酶、过氧化物酶、多酚氧化酶活性均显著增强。抗病品种的酶活性明显地高于感病品种。这些酶活性的变化能够削弱或消除病菌对谷子的毒害作用,在谷子抗黑穗病过程中发挥重要作用。     

新型隐球酵母铜应答转录因子Cuf1与荚膜的生物合成的相关性研究

摘要：【目的】新型隐球酵母是人类条件致病真菌,主要感染免疫缺陷患者。该酵母最显著的特征是细胞外包被主要的致病因子-多糖荚膜,其调控机制复杂。本文研究旨在阐述编码铜依赖转录因子的CUF1基因对其荚膜生物合成的负调控作用。【方法】以野生型菌株为对照,对CUF1缺失的突变菌株进行菌落形态观察、荚膜墨汁染色的显微观察、细胞聚沉试验以及荚膜定量分析。【结果】与野生型菌株相比,Δcuf1突变株产生的菌落更粘,显微镜下亦可明显观察到荚膜更厚。同样数量的细胞,突变株聚沉平衡后体积更大。此外,荚膜粗提物定量称重分析也证明突     

酵母细胞对高渗环境的适应与胞内甘油累积

甘油是包括酿酒酵母在内的许多种酵母细胞中的主要相容性溶质。为适应在高渗环境下的生存,酵母细胞将在胞内累积甘油。胞内甘油累积的增加可由甘油合成的增强,甘油利用的减弱,细胞膜通透性下降导致的胞内甘油流失的减少以及从环境中吸取更多的甘油而产生。本文综述了酵母细胞对环境渗透压变化的信号传导,高渗诱导的基因表达,环境渗透压升高时酵母细胞内甘油的累积以及甘油合成的限速步骤。     

组氨酸标签位置对重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母外切菊粉酶活性的影响

为了研究His_6-tag标签位置对鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶(Kluyveromyces cicerisporus CBS4857 exo-inulinase,KcINU1)酶活性的影响,实验首先根据Swiss-Model构建的KcINU1三维模型预测了组氨酸标签在KcINU1的位置,然后将编码His_6-tag的基因通过PCR方法分别引入到kcINU1的N端和C端,并将重组的kcINU1基因克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA,重组质粒进一步经电转化法整合到毕赤酵母宿主菌X-33中,最后用甲醇诱导进行分泌表达,镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,DNS去进行外切菊粉酶的活性测定。结果显示,实验中成功表达了具有活性的、His_6-tag标签位置不同的重组蛋白,并且N-His_6-KcINU1糖基化程度比KcINU1-His-C高,后者的比活是前者的82.2%,表明N端携带His_6-tag标签不影响蛋白的糖基化修饰,可以保持较高的酶活。该研究为获得高活性且便于分离纯化的重组KcINU1奠定了基础,对糖苷水解酶32家族标签位置的选择具有指导意义。