女贞的一种小分子闭环RNA

女贞(Ligustrum Cornpactum)叶片的核酸提取物,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),出现两条低分子量的核酸带,DNase 1及RNase A处理证实两条核酸带均为RNA,初步测得迁移率较小的RNA的分子量约为0.7×10~5道尔顿,5＇末端标记,双相及双方向PAGE分析证实,该RNA是存在于女贞叶片细胞内的一种小分子闭环RNA(简称psc RNA),不同离子强度下的RNase A处理揭示,psc RNA分子内有大量碱基互补结构,从点杂交结果推断psc RNA的一级结构中,不含绝大多数闭环类病毒RNA所共同具有的中心保守区段,在本实验的条件下pscRNA不能感染爪哇三七,女贞叶片汁液和按照提取,纯化病毒粒子的程序制备的溶液。在电镜下均没有观察到病毒颗粒,结果表明,女贞叶片细胞中存在一种无蛋白质外壳包被的、具有次量分子内碱基互辅结构的共价闭合环状RNA分子,在其它两种植物中,亦初步检测到此类闭环RNA分子,讨论了此种闭环RNA分子的意义。     

柑桔裂皮病类病毒感染爪哇三七叶片原生质体

柑桔裂皮病类病毒(Citrile Exocortis Viroid,简称CEV)是一种严重影响柑桔生产的单链闭环RNA致病因子,近年来人们已对它的理化特性、检测方法以及离体培养系统进行了研究。由于利用原生质体出利用整个植物或愈伤组织来研究CEV复制和致病机理更为优越,所以建立一个适合CEV感染的原生质体体系是人们关心的重要课题。     

几种化学药物对柑桔裂皮病类病毒感染和复制的影响

经柑桔裂皮病类病毒(Citrus exocortis viroid,简称CEV)感染后的指示植物爪哇三七(Cynura aurantiaca),分别施用不同浓度的赤霉素(5ppm,10ppm,50ppm,100ppm,200ppm)、萘(100ppm,300ppm)、5-氟尿嘧啶(0.5mg/L,1mg/L,2mg/L)溶液,其相对感染指数(Relative infectivity index)均有程度不同的改变。抽提叶片核酸,经5％双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)-银染色法结合凝胶扫描技术确定CEV浓度,辅以点杂交方法定性,观察到施用赤霉素组CEV浓度增高,施用萘组和5-氟尿嘧啶组CEV浓度均降低。用无性繁殖的柑桔苗作材料,CEV感染后分别施用50ppm赤霉素、300ppm萘、1mg/L 5-氟尿嘧啶溶液,用相同的分析方法,得到了与爪哇三七一致的结果。讨论了这三种药物影响CEV复制的意义。     

柑桔根繁能脱除裂皮病类病毒吗?

柑桔裂皮病类病毒(Citrus Exocortis Vitold,CEV)的传播和流行,对柑桔的生产带来了严重的损失。已证明特CEV的亲本可通过嫁接、插枝这两种营养繁殖的方式将CEV传播给子代。所以,CEV脱毒方法就成为生产上急待解决的问题。据报道,采用热处理、茎尖微芽嫁接和选育珠心苗等技术可获得无毒植株。嫁接是一种常用的育苗方法,然     

矮化枣树叶中小分子环状RNA的初步研究

枣树矮化病是我国枣树苗繁育中新发现的重要病害,其症状表现为节间短缩,枝叶密挤,呈丛状。病树比相同条件下的正常树约矮二分之一。其病因未见有研究报道。我们对病株叶组织抽提液,用电子显微镜没有观察到病毒颗粒和类菌原体。从病树和正常枣树叶的细胞核抽提液中,用正反和垂直双向凝胶电泳方法分析细胞核RNA,结果发现,病株叶细胞核RNA中含有环状低分子量的RNA。这是我国首次在矮化枣树叶细胞核中分离到的环状小分子RNA。这一发现将对枣树矮化病的病因研究提供一个有用的线索。     

柑桔裂皮病类病毒一爪哇三七悬浮细胞的生长特性

爪哇三七(Gvnura aurantlaca Dc)是柑桔裂皮病类病毒(Citrus Exocortis Viroid简称CEV)敏惑的指示植物。用CEV感染的柑桔叶研磨汁液机械接种健康爪哇三七植株,以此作为CEV感染的外植体采源。在MS和B,琼脂培养基上诱导和继代培养健康、CEV感染的爪哇三七叶片的愈伤组织,在MS、B,液体培养基中建立健康、CEX’感染的爪哇三七悬浮细胞系统。从愈伤组织和悬浮细胞培养物中抽提核酸,经5％双向聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染分析：在健康爪哇三七愈伤组织和悬浮细晦中不出现特异的CEV电泳带,而CEV感染的爪哇三七的所有培养物中都含有类病毒。cEV可在有丝分裂征盛的爪哇三七悬浮细胞中复制。散伤组织和悬浮细胞很容易继代培养和保存。     

爪哇三七组织培养类病毒的初步研究

用含裂皮病类病毒(Citrus exoeortis viroid,简称CEV)的古巴花叶橙、冰糖橙的叶汁和核酸粗提物感染爪哇三七(Gynura aurantiaca),取其腋芽和嫩叶作外植体,经消毒处理,接种在稍加改良的B5和MS半固体培养基上,置于24℃～27℃遮光培养,经2～3周诱导形成愈伤组织,质地有的松散易碎似白木耳状,有的坚硬灰黑似多瘤状,经双向凝胶电泳-银染法和点杂交法检测,证实用CEV感染的嫩叶和腋芽作外植体,不仅能诱导形成愈伤组织,而且CEV还可能在愈伤组织中复制,结果表明,已初步建立了爪哇三七的组织培养和研究类病毒的离体培养系统。     

从苹果锈果病组织中分离到类病毒RNA分子的研究

用鉴定类病毒环状分子结构的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳方法测定结果表明,在患有锈果、花脸、裂果等症状及不显症状的苹果锈果病成熟果中,存在着一种环状低分子量RNA,称之为ASSD-RNA-1,其分子量略小于马铃薯纺垂形块茎类病毒(PSTV),在病树枝条中除存在ASSD-RNA-1之外,还存在另一种环状分子,称为ASSD-RNA-2,其分子置比PSTV略大,在热力学上ASSD-RNA-2较ASSD-RNA-1稳定,变性温度前者高于后者,在成熟的病果中未检出ASSD-RNA-2,研究了患病组织核酸提取物的侵染性,提供了锈果病类病毒病毒病原的又一证据。     

Interference between viroids inducing exocortis and cachexia diseases of citrus

Systemic interactions of long duration among the Group I] Citrus Viroids, CVd-IIa and CVd-IIb were investigated by grafting buds from established citron (Citrus medica L.) sources containing single viroids to a common healthy seedling. In healthy tissues, the two viroids became established in approximately equal titres as a mixed infection. By contrast, tissues that grew from the CVd-IIa or CVd-IIb source buds contained only trace amounts of the heterologous invading viroids. This interference between CVd-IIa, a mild exocortis agent, and CVd-IIb, the cachexia agent, was also demonstrated in the presence of CEVd, the severe exocortis agent but not a Group II viroid. When a CVd-IIb bud was propagated on a citron containing CVd-IIa, a dramatic reduction in the titre of CVd-IIb was observed. The interference between CVd-IIa and CVd-IIb indicates that the mild and relatively innocuous isolate, CVd-IIa, can interfere with the replication and/or accumulation of the severe cachexia agent, CVd-IIb, in citrus. This offers a potential practical approach for the control of cachexia in commercial plantings by “viroid interference”.     

快速提取、纯化叶绿体4.5SrRNA的方法

我们采用植物叶与热缓冲液、苯酚直接混合(约65℃)匀浆,离心抽提和乙醇沉淀后,得到植物叶总RNA。经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、纯化,即可得到叶绿体4.5S rRNA,此法不仅操作简单,而且得率高。 同时,经过对同一植物的不同组织或不同细胞组分,如根、细胞质、叶绿体和叶绿体核糖体小分子RNA的提取与鉴定,以简便的方法证明了4.5S rRNA是叶绿体核糖体成份,也证明了我们所采用的提取、纯化4.5SrRNA方法的可靠性。     

A novel method for constructing pathogen-regulated small RNA cDNA library

Pathogen-responsive endogenous small non-coding RNAs regulate gene expression in relation to plant immune responses by serving as RNA silencing machinery. Decay caused by the bacterium, Erwinia carotovora subsp. carotovora (Ecc), often leads to soft rot disease in the plant Brassica campestris L. ssp. pekinensis (Bcp). To discover endogenous small RNA species in Bcp in response to Ecc infection, we developed a highly efficient approach for cloning pathogen-regulated small RNAs. A group of degenerate stem-loop reverse primers was designed to synthesize first single-stranded cDNA (sscDNA) and the sscDNA was then tailed with a poly(C) at its 3′ end to create a forward priming site. A novel cDNA/RNA subtractive hybridization was performed to capture Ecc-regulated small RNAs and this subsequently allowed construction of small RNA cDNA libraries for sequencing.