甜菜夜蛾触角全长cDNA文库的构建与分析

目的:构建甜菜夜蛾触角全长cDNA文库。方法:利用TRIzol试剂提取甜菜夜蛾触角总RNA,以此为模板,通过SMAR-TScribeTM反转录酶反转录合成第一链cDNA,引物扩增获得双链cDNA,经Proteinase K消化、SfiⅠ酶切和CHROMA SPIN-400Column分级分离后,收集400～2 000 bp之间的片段重组于改造的pUC19载体并转化至大肠杆菌Escherichia coli DH5α,最终构建获得甜菜夜蛾触角全长cDNA文库。结果:对文库进行滴度测定和重组率分析,结果表明构建的cDNA初级文库滴度为1.6×107pfu/ml,重组率为94%,插入片段大小为0.5～3.0 kb,平均长度在1 kb以上,表明构建获得的文库是一个高质量的文库。结论:该文库的构建为今后克隆甜菜夜蛾嗅觉相关基因奠定了基础。     

甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库的构建

为了克隆甜菜单体附加系M14无融合生殖相关基因 ,采用cDNA文库快速构建法制备了M14花蕾cDNA文库。根据甜菜单体附加系M14无融合生殖的细胞胚胎学研究结果 ,提取甜菜M14花蕾三个关键时期的RNA ,分离纯化mRNA ,以Oligo(dT)为引物 ,在逆转录酶的作用下 ,合成第一链cDNA ,进而合成第二链cDNA。含有EcoRⅠ和NotⅠ粘性末端的双链cDNA在T4DNA连接酶的作用下与载体λZAP臂相连 ,并对连接产物进行体外包装 ,得到噬菌体颗粒 ,即甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库。经大肠杆菌寄主菌株XL1-blueMRF’平板检测 ,三个文库滴度分别为 2 .8× 10 5pfu·mL-1、1.6× 10 5pfu·mL-1和 3.5× 10 5pfu·mL-1,克隆重组率为 83%、78%和 81%。cDNA文库可直接用于目的基因的筛选     

家蝇cDNA文库的构建

自Ｂｏｍａｎ小组 (Ｓｔｅｉｎｅｒ ,1981)从惜古比天蚕(Ｈｙａｌｏｐｈｏｒａｃｅｃｒｏｐｉａ)中分离、纯化出第一种抗菌肽天蚕素以来 ,人们已在昆虫和其他无脊椎动物中发现了 170多种抗菌肽 (Ｌｏｗｅｎｂｅｒｇｅｒｅｔａｌ ,1999)。目前 ,人们不仅搞清楚了多数抗菌肽的氨基酸序列、结构和功能特点 ,而且还对一些抗菌肽的基因进行了克隆 (陈留存和王金星 ,1999)。我们以家蝇为材料 ,分离、纯化出了抗菌肽 ,在此基础上 ,构建了经过诱导的家蝇ｃＤＮＡ文库 ,以克隆其基因。1　材料和方法1 1　实验材料家蝇 (Ｍｕｓｃａｄｏｍｅｓｔｉｃａ)…     

甜菜夜蛾几丁质合成酶基因A和B启动子的克隆

几丁质不仅是昆虫的表皮和围食膜的主要成分,也是一个非常关键的害虫控制靶标,主要通过几丁质合成酶（chitin synthase,CHS）基因合成。本文在克隆甜菜夜蛾Spodoptera exigua的两个几丁质合成酶基因（SeCHSA和SeCHSB）cDNA和基因组序列的基础上,从基因的5′末端设计特异性引物和构建特定的基因组文库, 采用PCR的方法获得了5′端侧翼序列。通过5′RACE的方法确定SeCHSA和SeCHSB基因的转录起始位点后,获到了启动子序列。这为研究昆虫几丁质合成和转录调控奠定了基础。     

枸杞果实cDNA文库的构建

目的 :通过构建枸杞果实cDNA文库 ,分离类胡萝卜素合成酶基因。方法 :枸杞果实RNA的提取采用改进的异硫氰酸胍 -酚 -氯仿法 ,利用PolyATractmRNAIsolationSystem(Promega公司 )分离mRNA ,然后利用UniversalRibocloneRcDNASynthesisSys tem(Promega公司 )合成双链cDNA ,在cDNA末端连接上EcoRⅠ接头 ,并与λExCell载体连接 ,利用PackageneLambdaDNAPackagingSystem进行包装。结果 :首次构建出滴度为 8 4× 10 4 pfu ml,重组效率为 86 9%的枸杞果实cDNA文库。结论 :构建出枸杞果实cDNA文库 ,为类胡萝卜素合成酶基因的分离奠定了基础     

中国对虾cDNA文库的构建

中国对虾ｃＤＮＡ文库的构建ＣＯＮＳＴＲＵＣＴＩＯＮＯＦｃＤＮＡＬＩＢＲＡＲＹＯＦＳＨＲＩＭＰＰＥＮＡＥＵＳＣＨＩＮＥＮＳＩＳ（ＣＲＵＳＴＡＣＥＡ,ＤＥＣＡＰＯＤＡ）关键词中国对虾ｃＤＮＡ文库构建ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ,ｃＤＮ...     

菠萝果实cDNA文库的构建

以菠萝幼果为研究材料,采用Creator^TMSMART^TM cDNA Library Construction Kit技术构建菠萝幼果cDNA文库,其文库的库容量为1．01×10^6,重组率为92％,PCR检测表明大多数插入片段均大于1000bp。     

眼镜蛇毒腺cDNA文库的构建

目的　蛇毒含有多种生物活性成分, 从天然蛇毒中提取分离蛇毒有效成分受到蛇毒资源和质量的限制。为开发蛇毒有效成分的基因工程产品, 本研究构建了蛇毒腺的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 文库, 为进一步筛选、克隆和表达蛇毒有关基因做准备。　方法　从眼镜蛇（ Ｎａｊａ ｎａｊａ ａｔｒａ ）毒腺中提取ｍ Ｒ Ｎ Ａ,经反转录合成ｃ Ｄ Ｎ Ａ后, 以λｇｔ１０ 噬菌体为载体, 构建非表达的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 文库。　结果　蛇毒腺ｃ Ｄ Ｎ Ａ 非表达文库库容量为２×１０６ｐｆｕ／μｇ 重组子, 经大肠杆菌 Ｃ６００ ｈｌｆ 菌株平皿测定, 重组率为 ７０％ 。　结论　经平板鉴定和 Ｐ Ｃ Ｒ 快速鉴定表明, 所构 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 文库达到建库要求, 能够用于目的基因筛选和克隆表达。     

甜菜夜蛾的饲养方法介绍

介绍一种甜菜夜蛾的室内饲养方法 ,采用本方法累代饲养甜菜夜蛾 8代 ,平均蛹重达 1 1 2 .9mg ,平均化蛹率 97% ,平均羽化率为 91 .3% ,室内饲养结果表明 ,该饲养方法可用于室内大量饲养甜菜夜蛾     

Down‐regulation of a chitin synthase a gene by RNA interference enhances pathogenicity of Beauveria bassiana ANU1 against Spodoptera exigua (HÜBNER)

Chitin synthase (CHS) is an important enzymatic component, which is required for chitin formation in the cuticles and cuticular linings of other tissues in insects. CHSs have been divided into two classes, classes A and B, based on their amino acid sequence similarities and functions. Class A CHS (CHS‐A) is specifically expressed in the epidermis and related ectodermal cells such as tracheal cells, while class B CHS (CHS‐B) is expressed in gut epithelial cells that produce peritrophic matrices. In this study, we cloned the CHS‐A gene from the beet armyworm, Spodoptera exigua (SeCHS‐A). The SeCHS‐A contains an open reading frame of 4,698 nucleotides, encoding a protein of 1,565 amino acids with a predicted molecular mass of approximately 177.8 kDa. The SeCHS‐A mRNA was expressed in all developmental stages and specifically in the epidermis and tracheae tissue by quantitative real‐time‐PCR analysis. Expression of SeCHS‐A gene was suppressed by feeding double‐stranded RNA (dsCHS‐A, 400 ng/larva) in the third instar larvae of S. exigua. Suppression of the SeCHS‐A gene expression significantly increased 35% of mortality on pupation of S. exigua. Also, the third instar larvae fed with dsCHS‐A significantly increased susceptibility to entomopathogenic fungi, Beauveria bassiana ANU1 at 3 days after treatment. These results suggest that the SeCHS‐A gene plays an important role in development of S. exigua and RNA interference may apply to effective pest control with B. bassiana.     

甜菜夜蛾发生规律及其防治研究

甜菜夜蛾在福建漳州龙海每年发生9－10年,3月中下旬开始发生,4－10月份是该虫为害农作物的严重时期,其中8－9月份为全年发生危害的高峰期,通过田间药效试验,评价了不同类型的12种杀虫剂对甜菜夜蛾的防治效果,结果表明,除尽,菜喜以及米满对田间甜菜夜蛾具有较好的防效,锐颈特,杀虫单,敌杀死等药剂对田间甜菜夜蛾几乎失去防效。     

甜菜夜蛾抗药性研究现状

就有关甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hbner)对常用杀虫剂的抗药性现状作综述。甜菜夜蛾对拟除虫菊酯类、有机磷类、氨基甲酸酯类杀虫剂已产生了较高水平的抗药性,其中山东泰安抗性种群对氯氟氰菊酯的抗性高达2445.5倍;对多杀菌素等生物杀虫剂产生了中低水平的抗性;对昆虫生长调节剂如虫酰肼的敏感性也有所降低,但昆虫生长调节剂依然是比较理想的防治药剂。对交互抗性及抗性治理也作了阐述。     

收集甜菜夜蛾卵的简便方法

介绍了一种收集甜菜夜蛾SpodopteraexiguaH櫣ｂｎｅｒ卵的简单而有效的方法 ,收卵率达 90 %以上     

甜菜夜蛾幼虫饲养技术的改进

利用一次性塑料杯饲养甜菜夜蛾SpodopteraexiguaH櫣bner,一次性接入初孵幼虫,直至化蛹不再转移,也不再更换饲料。与已报道的方法相比,该方法操作简单,省工省时,可以提高工作效率。在各项饲养指标中,除平均蛹重略微偏低之外,其余指标均与已报道的数据基本一致。试验证明,采用该方法可以满足室内甜菜夜蛾的继代繁殖和批量饲养。     

甜菜夜蛾田间种群的药剂敏感性测定

采用浸叶法测定福建省4个甜菜夜蛾田间种群对9种杀虫剂的敏感性。结果表明,甜菜夜蛾田间种群对乙酰甲胺磷、氯氰菊酯、毒死蜱、灭多威、顺式氯氰菊酯、定虫隆、氟虫脲、虫螨腈、虫酰肼的敏感性差异明显,LC50值分别为5272.75-6799.33、2387.34-3741.94、198.86-621.55、324.55-1124.94、133.20-399.67、19.34-72.68、38.92-134.11、2.38-3.06和4.84-5.76 mg.L-1;甜菜夜蛾田间种群对杀虫剂的敏感性在不同地区间也存在明显差异。2001-2002年,福州和漳州甜菜夜蛾种群对虫螨腈的敏感性分别下降3.96和5.30倍,福州种群对虫酰肼、顺式氯氰菊酯、毒死蜱和灭多威的敏感性也分别下降3.60、3.61、2.87和1.43倍,但田间种群对定虫隆、氟虫脲的敏感性有所恢复。     

Identification of a hypertrehalosemic factor in Spodoptera exigua

Trehalose is a major blood sugar in insects with a range of physiological functions, including an energy source and a cryoprotectant. Hemolymph trehalose concentrations are tightly regulated according to physiological conditions. An insulin‐like peptide, SeILP1, downregulates hemolymph trehalose concentrations in Spodoptera exigua. Here, we identified a factor that upregulates hemolymph trehalose concentration in S. exigua. Hemolymph trehalose concentrations were significantly increased after immune challenge or under starvation in a time‐dependent manner. To determine endocrine factors responsible for the upregulation, stress‐associated mediators, such as octopamine, serotonin, or eicosanoids were injected, but they did not upregulate hemolymph trehalose. On the other hand, injection with Schistocerca gregaria adipokinetic hormone (AKH) significantly increased hemolymph trehalose concentration in S. exigua. During upregulation of hemolymph trehalose by AKH injection, trehalose degradation appeared to be inhibited because expression of trehalase and SeILP1 were significantly suppressed while that of trehalose phosphate synthase was not significantly changed. Interrogation of a Spodoptera genome database identified an S. exigua AKH‐like gene and its expression was confirmed. During starvation, its expression concentrations were increased, although RNA interference specific to the AKH‐like hypertrehalosemic factor (SeHTF) gene significantly prevented the upregulation of hemolymph trehalose concentrations during starvation. A synthetic peptide of SeHTF was prepared and injected into S. exigua larvae. At nanomolar concentration, the synthetic SeHTF peptide effectively upregulated hemolymph trehalose concentrations. Here we report a novel hypertrehalosemic factor in S. exigua (SeHTF).     

甜菜夜蛾人工饲料及饲养技术研究

研究了人工继代繁殖甜菜夜蛾饲料配方及饲养方法 ,测定了各虫态发育历期、幼虫死亡率、化蛹率、羽化率、蛹畸形率及不同世代蛹重。采用改进的饲料配方饲养的深圳种群 ,第 2代幼虫死亡率、化蛹率、蛹畸形率、羽化率分别为 7 8% ,97 3 % ,2 7%和 93 8% ,第 2 ,5 ,9,1 2代平均单头蛹重分别为 1 1 9 7± 1 6 1 ,98 3± 1 1 4,94 3± 1 2 6和 82 4± 9 6mg,平均单雌产卵量分别为 1 1 3 7 2± 63 3 ,684 5± 5 3 7,45 6 9± 40 2和 3 91 7± 45 6粒。人工饲养的甜菜夜蛾 ,卵、幼虫、蛹、雌性成虫的发育历期分别为 2 5～3 5 ,1 0～ 1 2 5 ,7～ 8 5和 8～ 1 4天 ,完成一个世代需要 2 1～ 2 5天。