白介素-18在被动吸烟诱导的慢性阻塞性肺疾病大鼠中的表达

目的 研究白介紊-18(Interleukin-18,IL-18)在被动吸烟诱导的慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠中的表达变化.方法 将20只大鼠随机分为2组,即正常对照组和COPD模型组.应用单纯被动吸烟法建立大鼠COPD模型,香烟烟雾暴露时间为6个月.利用酶联免疫吸附法测定2组大鼠血清和支气管肺泡灌洗液(bronchoal veolar lavage fluid,BALF)中的IL-18浓度,用实时定量RT-PCR法测定BALF中IL-18 mRNA的表达水平,用HE染色法观察肺组织形态学改变,用免疫组织化学染色法检测IL-18在肺组织中的表达.结果 1.COPD模型组血清和BALF中的IL-18浓度较正常对照组显著增加(P＜0.01);2.COPD模型组BALF中IL-18 mRNA的表达水平较正常对照组显著增高(P＜0.01);3.COPD模型组肺组织中IL-18的表达较正常对照组显著增加(P＜0.01).结论 被动吸烟诱导的COPD大鼠外周血和肺部均高表达IL-18,提示IL-18在吸烟所致的COPD发病机制中可能起重要作用.     

核因子-κB在大鼠慢性阻塞性肺疾病肺组织中的定位及表达

目的:研究转录调控因子--核因子-κB(NF-κB)在大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型肺组织中的定位和表达,探讨NF-κB在COPD发病中的作用与意义.方法:雄性Wistar大鼠14只,随机分为COPD模型组和对照组,每组7只.采用每日熏香烟和两次气管内滴入200μg脂多糖法制作COPD大鼠模型.用免疫组化和原位杂交法检测肺中NF-κB p65蛋白表达及其mRNA表达.结果:免疫组化发现,COPD模型组大鼠肺NF-κB p65高表达于肺泡、支气管上皮细胞和小动脉内皮细胞胞核中(其光密度半定量分析分别为0.426±0.007,0.434±0.012和0.313±0.007,P均＜0.01),而对照组在相应部位仅有少量表达或不表达(分别为0.115±0.006,0.116±0.005和0.095±0.007).原位杂交显示,NF-κB p65在COPD组高表达于肺泡上皮细胞,支气管、小动脉平滑肌细胞胞浆中(分别为0.203 0.008,0.208±0.010和0.206±0.007 P均＜0.01),而对照组呈低表达(0.100±0.006,0.102±0.002和0.103±0 003).结论:核因子-κB在慢性阻塞性肺疾病中的表达、激活和核转位可能是众多炎性基因表达的基础,广泛分布于多种细胞中,参与对其基因的转录调控.     

磷脂酶C抑制剂U73122对COPD大鼠肺组织内MMP-9,MMP-12表达影响的实验研究

目的:探讨磷脂酶C抑制剂U73122对COPD大鼠肺组织内MMP-9,MMP-12表达的影响.方法:通过烟熏及气管内注入脂多糖(LPS)建立COPD大鼠模型,从第1d起通过尾静脉注射磷脂酶C(PLC)抑制剂U73122(以U73343为阴性对照),持续28天.第28d,观察各组大鼠肺组织病理变化,western blot法检测肺组织中MMP-9、MMP-12表达水平.结果:模型组和干预组大鼠MMP-9、MMP-12蛋白表达高于对照组(P＜0.05),干预组低于模型组(P＜0.05).干预组肺组织形态学改变较模型组改善(P＜0.05).结论:U73122通过抑制磷脂酶C(PLC)信号途径减少了COPD中MMP9、MMP12的表达,减轻肺组织结构破坏.     

COPD大鼠肺组织中Muc5ac和IL-13的相关性研究

目的:研究慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠气道粘蛋白Muc5ac和白介素13(IL-13)的表达及其相关性.方法:20只wistar雄性大鼠随机分为对照组和COPD组.正常组8只,COPD组12只,分别用免疫组化法测定肺组织Muc5ac和IL-13的表达.结果:Muc5ac和IL-13蛋白表达主要位于气道上皮细胞,细胞胞浆呈棕黄色.COPD组大鼠肺组织IL-13和Muc5ac的表达均高于正常组(P均＜0.05).结论:IL-13是引起粘液分泌的重要因子,它可能上调Muc5ac的表达.     

慢性阻塞性肺病大鼠模型的肺功能及肺组织病理学变化评估

目的:探讨被动吸烟的时间长短与慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠模型的肺功能及肺组织病理学的变化之间的关系.方法:采用被动吸烟法建立COPD大鼠模型,随机分为被动吸烟4周组、6周组、8周组和对照组,分别测定和评估不同时间段的各组大鼠模型的肺功能和气道肺组织的病理变化.结果:6周组及8周组大鼠模型的呼气峰流速(PEF)显著降低、气道内压上升坡度(IP-slope)显著增高,与对照组比较P＜0.01.以PEF值小于对照组的大鼠80%PEF值为存在气流受限的界线,则4周组、6周组、8周组出现气流受限的鼠分别为0只(0)、6只(75%)及8只(100%),6周组及8周组的大鼠气流受限发生率显著高于4周组(P＜0.01).8周组大鼠出现明显气道壁增厚、气道狭窄及显著肺气肿改变,其气道壁炎细胞浸润、杯状细胞化生、气道壁坏死糜烂、纤维结缔组织及平滑肌增生等评分均显著高于对照组(P＜0.01),气道坏死糜烂、小气道阻塞发生率及气道平滑肌增生等指标显著高于6周组(P＜0.01).6周组中有6只大鼠出现气道狭窄及肺气肿改变,气道壁炎细胞浸润、杯状细胞化生、气道壁坏死糜烂、纤维结缔组织及平滑肌增生等评分均显著高于对照组(P＜0.01).6周组及8周组大鼠PEF值与气道壁纤维组织和平滑肌增生呈显著负相关(P＜0.05);而4周组大鼠未出现典型肺气肿及气道狭窄.结论:COPD的形成与吸烟时间有关,在吸烟量相同条件下,吸烟时间越长,气道和肺组织病变越重,气流受限的发生率越高.     

JAK2/STAT3信号通路在门静脉高压大鼠模型脾脏纤维化过程中的作用

目的:探讨Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在门静脉高压大鼠模型脾脏纤维化过程中的表达和作用.方法:采用缩窄门静脉的方法制备门静脉高压大鼠模型,通过给予JAK2特异性抑制剂AG490阻断JAK2/STAT3信号通路.30只SD(Sprague Dawley)大鼠随机分为单纯手术组、AG490组、假手术组(n=10).AG490组每天给予5 mg/kg体重的AG490,另外两组每天给予相同体积的生理盐水,连续2周后处死大鼠,计算各组脾指数,Masson三色染色检测脾脏组织纤维化程度,免疫组织化学和Western blotting检测脾脏组织中磷酸化STAT3 (p-STAT3)蛋白的表达水平.结果:单纯手术组p-STAT3蛋白水平较假手术组明显升高(P＜0.05),AG490组较单纯手术组明显降低(P＜0.05);单纯手术组脾指数、脾脏纤维化程度较假手术组明显升高(P＜0.05),AG490组较单纯手术组明显降低(P＜0.05);p-STAT3蛋白水平与脾脏纤维化程度呈明显的正相关趋势(r=0.897,P＜0.05).结论:JAK2/STAT3信号通路与门静脉高压大鼠脾脏纤维化过程关系密切,阻断该通路可以减轻门静脉高压脾脏纤维化的程度.     

白介素-4和白介素-6在慢性阻塞性肺病肺组织中的表达

为了探讨白介素 - 4(Interleukin- 4,IL- 4)和白介素 - 6 (Interleukin- 6 ,IL- 6 )在慢性阻塞性肺病 (COPD)患者肺组织中的表达变化及其在 COPD发病机制中的作用 ,45例因肺癌而行肺叶切除术患者的肺组织 ,根据有无 COPD及吸烟史分为 COPD组、吸烟对照组及非吸烟对照组 (每组各 15例 )。用免疫组织化学法测定肺组织炎性细胞中 IL- 4和 IL- 6的表达。结果表明 :1.IL - 4和 IL - 6在 COPD组、吸烟对照组及非吸烟对照组患者肺泡局部浸润的炎性细胞中有表达 ,其中 COPD组IL- 4和 IL- 6的表达强度明显高于吸烟对照组及非吸烟对照组 (P<0 .0 5 ) ,但吸烟对照组及非吸烟对照组 IL- 4和 IL- 6表达强度无显著差别 (P>0 .0 5 )。 2 .三组中 IL - 4在肺组织中的表达强度与 1秒钟用力呼气容积占预计值百分比 (FEV1 % pred)值之间均无直线相关关系 (r=- 0 .0 93,0 .0 0 2 45和 - 0 .2 5 2 ,P>0 .0 5 ) ;仅在 COPD组肺组织中的 IL- 6表达强度与 FEV1 % pre值呈直线负相关关系 (r=- 0 .6 3119,P<0 .0 5 ) ,其余各组未发现这种负相关关系。 3.COPD组 IL- 4与 IL- 6的表达呈直线正相关关系 (r=0 .5 99,P<0 .0 1)。结果提示 :1.IL - 4在 COPD患者细支气管及肺泡炎性细胞中表达增强 ,说明 Th2 型细胞因子可能也在 COPD发病     

慢性阻塞性肺疾病大鼠模型中痩素及白介素-8 的表达分析

目的:观察COPD大鼠模型中瘦素(leptin)、白细胞介素8(IL-8)的表达情况,分析其相关性,探讨leptin在COPD发生发展中的作用及意义.方法:36只雄性SD大鼠随机分为①健康对照组;②COPD模型1组:分别于第(1、14)d经气管内注入内毒素200ug,熏5％香烟(第1、14d除外),2h/d,共4周;③COPD模型2组:单纯熏5％香烟2h/d,共12周.观察肺组织病理变化,免疫组化法测定leptin、IL-8在支气管肺组织的表达情况,放免法测定血清leptin及IL-8浓度.结果:细胞因子leptin及炎性因子IL-8在支气管肺组织阳性表达.LPS联合熏烟诱导COPD1组支气管肺组织中leptin(52.67±04.72)和IL-8(59.56± 3.94)表达较单纯熏烟诱导COPD2组leptin(38.89± 2.57)和IL-8(55.22± 3.42)表达明显升高,P＜0.05,两组COPD大鼠模型支气管肺组织中leptin及IL-8表达较正常对照组leptin( 1690± 1.52)和IL-8 (28.00± 4.24)表达均明显增高,P＜0.05,COPD1组血清中leptin(3.26± 0.95)ng/mL和IL-8( 107.51±13.38 )pg/mL-较COPD2组中leptin(2.42± 0.69 )ng/mL和IL-8((94.07± 11.20)pg/mL明显增高,P＜0.05,两组COPD大鼠模型血清中leptin及IL-8浓度较正常对照组leptin(0.95±0.56)ng/mL和IL-8( 39.48± 6.35 )pg/mL浓度显著升高,P＜0.05.血清中Leptin与IL-8表达水平呈显著正相关(r值分别为0.72 0.67 0.84均P＜0.05).经过q检验,两两之间比较均有统计学意义.结论:leptin和IL-8均参与COPD炎症反应过程,并且具有相关性,LPS促进二者的表达.     

椒目油对哮喘大鼠肺组织Fas/FasL表达水平和肺血管通透性的影响

目的:观察椒目油(zanthoxylum seed oil,ZSO)对支气管哮喘大鼠肺组织Fas/FasL表达水平和肺血管通透性的影响,为临床应用椒目油治疗哮喘提供实验证据和理论支持.方法:将雄性SD大鼠80只随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组和椒目油治疗组,每组各20只.以卵白蛋白(ovaibumin,OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发建立哮喘大鼠模型,以免疫组化ABC法检测肺组织中Fas/FasL蛋白的表达,伊文思蓝(evans blue dye,EBD)分光光度法检测肺血管通透性.结果:椒目油和地塞米松均能增强哮喘大鼠肺组织淋巴细胞表面Fas/FasL的蛋白表达;与哮喘模型组相比较,有统计学意义(P＜0.05).哮喘模型组大鼠肺内EBD浓度显著高于对照组(P＜0.01),而与哮喘组相比,椒目油和地塞米松均能显著缓解EBD的升高(P＜0.01).结论:椒目油可有效降低哮喘大鼠肺血管通透性,可能通过增强Fas/FasL蛋白表达而促进炎症局部淋巴细胞凋亡减轻哮喘气道炎症反应.     

慢性阻塞性肺疾病大鼠NRF2和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的改变

目的:通过观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺内红系衍生的核因子2相关因子2(NRF2)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达,探索NRF2调控γ-GCS在COPD发病中可能的参与机制.方法:雄性Wistar大鼠16只,随机分COPD模型组和对照组.检测γ-GCS活性,γ-GCS的基因表达和NRF2的蛋白质表达.结果:γ-GCS 活性在COPD组中明显高于对照组.γ-GCS mRNA广泛高表达于COPD组支气管平滑肌细胞,而对照组相应部位呈弱表达.对照组肺匀浆中有一定量γ-GCS mRNA表达,但相对于COPD组仍较低.NRF2、γ-GCS在COPD组支气管上皮细胞胞浆中高表达,而对照组相应部位中呈弱表达.COPD组γ-GCS和NRF2蛋白表达皆有明显上调.NRF2蛋白表达与γ-GCS蛋白、mRNA表达呈正相关关系.结论:氧化应激可能通过使NRF2转录活性增加的方式上调NRF2,进而上调γ-GCS的表达,在COPD的发病中起重要作用.     

STAT蛋白与肿瘤

STAT是一种重要的核转录因子,参与调控细胞的生长、分化和凋亡。诸多肿瘤细胞系及人的癌变组织中存在着持续激活的STAT蛋白,尤其是STATl、STAT3、STAT5蛋白及其下游分子对于肿瘤的发生、发展、演进起着重要的作用。STAT蛋白的抑制为肿瘤治疗提供了新的思路。     

脂多糖对人支气管上皮细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6表达的影响

目的观察脂多糖对人支气管上皮细胞16HBESTAT1、STAT3、STAT4、STAT6表达的影响。方法采用普通RT—PCR检测16HBE细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA表达;Western印迹检测16HBE细胞STAT1、STAT4、STAT6的蛋白表达。分别采用不同浓度的脂多糖在不同的时间点处理16HBE细胞,采用Real—timePCR的方法检测16HBE细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA表达。结果1μg／m1的LPS处理16HBE细胞1h组、0．25μg／m1的LPS处理16HBE细胞4h组、1μg／ml的LPS处理16HBE细胞4h组STAT1、STAT4的mRNA表达较正常对照组显著增高（P〈0．01）;0．25μg／ml的LPS处理16HBE细胞2h组、1μg／ml的LPS处理16HBE细胞2h组、10μg／ml的LPS处理16HBE细胞2h组STAT1、STAT4的mRNA表达较正常对照组有所增高（P〈0．05）;1μg/ml的LPS处理16HBE细胞1h组STAT6的mRNA表达较正常对照组显著增高（P〈0．01）。所有LPS处理16HBE细胞组STAT3的mRNA表达均较正常对照组减低。结论人支气管上皮细胞表达STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA和STAT1、STAT4、STAT6的蛋白,一定剂量的脂多糖在某些时间点分别刺激了人支气管上皮细胞STAT1、sTAT4、STAT6的mRNA表达。     

Adenovirus sequesters phosphorylated STAT1 at viral replication centers and inhibits STAT dephosphorylation

Tyrosine phosphorylation and nuclear translocation of STAT1 indicate activation of interferon (IFN) signal transduction pathways. Here, we demonstrate that tyrosine-phosphorylated STAT1 is targeted by a unique mechanism in adenovirus (Ad)-infected cells. Ad is known to suppress IFN-inducible gene expression; however, we observed that Ad infection prolongs the tyrosine phosphorylation of STAT1 induced by alpha IFN in infected cells. To understand this paradoxical effect, we examined the subcellular localization of STAT1 following Ad infection and found that nuclear, tyrosine-phosphorylated STAT1 accumulates at viral replication centers. This form of STAT1 colocalized with newly synthesized viral DNA. Viral DNA replication, but not viral late gene expression, is required for the regulation of STAT1 phosphorylation. Our results indicate that Ad infection regulates STAT1 dephosphorylation rather than STAT1 phosphorylation. Consistent with this idea, we show that Ad infection disrupts the interaction between STAT1 and its cognate protein tyrosine phosphatase, TC45. Our findings indicate that Ad sequesters phosphorylated STAT1 at viral replication centers and inhibits STAT dephosphorylation. This report suggests a strategy employed by Ad to counteract an active form of STAT1 in the nucleus of infected cells.