细菌脂多糖诱导人单核细胞株对细菌脂蛋白的耐受性及其与肌动蛋白骨架关系

细菌脂多糖(LPS)可诱导宿主对LPS的耐受,但对细菌脂蛋白(BLP)是否存在交叉耐受,目前报道不一。采用人单核细胞株(THP-1),建立小剂量LPS诱导THP-1对LPS耐受的细胞模型;观察细胞肌动蛋白骨架、炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度及NF-κB的DNA结合活力的变化情况;探讨BLP交叉耐受及细胞骨架在其中的作用。结果显示,THP-1细胞经小剂量(10ng/ml)LPS、大剂量(100ng/ml)LPS或BLP刺激后,细胞形态严重变形,肌动蛋白重组,细胞周边肌动蛋白丝带消失,出现明显的肌动蛋白收缩团块及伪足,细胞核内NF-κB的DNA结合活性显著升高,培养上清液中炎症因子(TNF-α、IL-1β及IL-6)的释放显著增加;而小剂量LPS预刺激12h后,再用大剂量的LPS或BLP刺激6h,上述指标明显改善;采用细胞骨架肌动蛋白聚集破坏剂鬼笔环肽预处理后的THP-1细胞,可取消由小剂量LPS诱导的自身耐受及对BLP的交叉耐受;可见,细菌LPS、BLP(100ng/ml)可诱导THP-1细胞肌动蛋白骨架的改变,激活NF-κB信号通路,诱导炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6过度释放,激活宿主炎症细胞的炎症反应;而小剂量LPS预刺激后可诱导出THP-1细胞对LPS的自身耐受和对BLP的交叉耐受;细胞骨架肌动蛋白参与了小剂量LPS诱导THP-1细胞对LPS自身耐受和对BLP交叉耐受的形成。     

细菌脂多糖(LPS)在糖尿病视网膜微血管病变中的作用

本研究旨在通过Akita小鼠糖尿病模型及糖尿病人群血浆样本,探讨病原体相关性分子细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)在糖尿病视网膜病变中的重要作用。本研究选择6个月糖尿病病程的Akita小鼠(Ins2+/Akita)及其同年龄组野生型(wild type,WT)小鼠(C57BL/6J)尾静脉内注射脂多糖(LPS)或生理盐水对照共7 d,从影像学、电生理及病理学水平评估糖尿病视网膜眼病进展。最后收集糖尿病视网膜眼病患者及对照人群血标本,通过ELISA测定血浆LPS表达水平。通过光学相干断层扫描技术分析,发现Akita小鼠的视网膜层间厚度较WT小鼠组相比明显变薄(p=0.000 2),LPS处理进一步加重糖尿病小鼠视网膜结构损害(p=0.000 7)。视网膜电图检测发现LPS处理Akita小鼠组的视网膜细胞幅值较生理盐水处理Akita小鼠显著减慢,有统计学意义(p<0.05)。胰酶消化法分离及PAS染色小鼠眼球视网膜微血管网后,计数测得LPS处理显著增加了Akita小鼠视网膜中无细胞毛细血管数量(p=0.002 6),提示LPS在糖尿病微血管损伤中的重要作用。为保证该研究的临床转化性,我们进一步检测了糖尿病视网膜病变患者(n=19)、糖尿病患者(无微血管并发症)(n=23)及健康对照组(n=20)的血浆LPS水平,发现糖尿病患者血浆LPS水平较健康对照组显著升高(p=0.002 3),其中糖尿病视网膜病变患者LPS升高最为显著(p<0.000 1)。本研究表明,循环中细菌脂多糖增加在糖尿病视网膜病变进展中起到重要作用。     

细菌脂多糖对肠道病毒71型感染影响的初步研究

肠道病毒71型(enterovirus 71, EV71)感染常导致婴幼儿手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD),细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)在多种肠道病毒感染过程中起重要作用。本研究旨在探讨细菌LPS对EV71感染的影响。将EV71与LPS共孵育,测定病毒被热处理后残留病毒的活力,以及病毒感染过程中病毒基因拷贝数的变化。结果显示,热处理后病毒活力逐渐丧失,而经LPS处理的病毒活力丧失的速度减缓,且残留病毒活力与LPS浓度呈正相关;LPS处理后的病毒在黏附、侵入、胞内复制及释放过程中基因拷贝数较对照组均降低;免疫印迹分析表明LPS与抗VP1单克隆抗体可竞争性结合EV71,且粪便中的EV71可被抗大肠埃希菌抗体识别。上述结果提示,LPS可增强EV71热稳定性,抑制EV71感染过程,且LPS可能与EV71结合。     

溶藻弧菌脂多糖对石斑鱼免疫功能的影响

脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是G菌细胞壁中的主要成分之一,是细菌内毒素的主要物质,不仅可引起机体良好的体液免疫应答,而且也可提高机体的非特异性免疫功能。Bog-wald发现LPS能导致实验鱼产生特异性抗体,而且还增强鱼体的免疫吞噬能力;Mac Arthur等报道LPS可提高鲽(pleuronectes platessa)体内巨噬细胞的游走能力;Solem认为LPS可促进大西洋鲑(Atlantic salmon)巨噬细胞的分裂且提高其吞噬活性和鱼体抗感染的能力。本文用溶藻弧菌LPS免疫石斑鱼后,分析了石斑鱼血清抗体效价的变化、LPS对石斑鱼血清溶菌酶、酚氧化酶(PO)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及抗菌活力等非特异性免疫指标的影响,以及LPS对石斑鱼免疫保护效果,将为充分利用LPS免疫学特性提供理论依据。       

LPS下调小鼠肝脏、肠道羧酸酯酶表达

目的:研究细菌脂多糖(LPS)对小鼠肝脏、肠道羧酸酯酶表达及酶活性的影响。方法:小鼠经腹腔注射5.0mg/kg的LPS,对照组给予生理盐水,注射后24h处死小鼠,取肝脏和肠道组织。用qRT-PCR技术检测小鼠肝脏、肠道组织羧酸酯酶1和2(mCES1和mCES2)mRNA水平;Westernblot技术检测小鼠肝脏、肠道组织mCES1和mCES2蛋白表达水平。用分光光度计检测小鼠肝脏、肠道组织羧酸酯酶总活性。结果:LPS显著降低小鼠肝脏、肠道组织羧酸酯酶1和2的mRNA水平(P<0.05),同时LPS也显著降低小鼠肝脏、肠道组织羧酸酯酶的蛋白表达水平及酶活性(P<0.05)。结论:LPS造成的炎症状态可显著降低小鼠肝脏、肠道组织羧酸酯酶的表达及酶活性。     

热原质与脂多糖

<正>脂多糖(LPS)是革兰氏阴性(G~-)细菌细胞的主要成分之一,它具有广泛的生物活性,如人和动物非肠道使用可引起机体的发热及其它毒害反应。如果强调其生物毒性,内毒素与其是同义的。LPS亦具有免疫佐剂活性、抗肺瘤活性等。本文就其热原的概念及研究简史,G~-细菌致热作用的本质及热原质、内毒素与LPS之间的关系,LPS的物理化学特性,生物学特性,免疫学特性等有关的研究资料综述如下。 一、热原的概念及研究简史(5—7) 在一个多世纪以前人们已经发现注射污染的药剂可引起人体的发热反应。1976年Burdon—Sanderson把引起这种发热性的物质称为热原(Pyrogen)。1911年英国Horf等氏发现发热性物质不能用细菌过滤器或普通蒸馏法去除。1925年英国     

内毒素诱导多形核白细胞产生的化学发光现象

细菌内毒素(LPS)能够诱导多形核白细胞(PMN)产生化学发光现象,其发生机理可能和PMN的呼吸爆发有关。不同类型的LPS对PMN的诱导能力不尽相同,粗糙型(R)比光滑型(S)要强得多。LPS诱导产生化学发光的过程受到许多因素的影响。     

维持性血液透析终末期肾病患者肠道优势菌群多样性变化研究

目的探讨维持性血液透析终末期肾病患者肠道优势菌群多样性及其与炎症因子的相关性。方法采集维持性血液透析的稳定终末期肾病患者和健康对照受试者的血液和粪便样本,采用荧光实时定量PCR(real-time quantitative PCR,QPCR)检测肠道优势菌群的变化情况,应用酶联免疫吸附技术(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测患者血液中的白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、白介素6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和内毒素(lipoposaccharide,LPS)。结果维持性血液透析终末期肾病患者肠道菌群总菌量差异无统计学意义,但肠道内有益菌群如双歧杆菌属细菌、乳酸杆菌属细菌和粪杆菌属细菌显著降低,而肠道内有害菌如肠杆菌科细菌和肠球菌属细菌均显著升高(P0.05)。维持性血液透析终末期肾病患者血液中IL-6、TNF-α和LPS显著升高,均与双歧杆菌属细菌有显著负相关,与肠杆菌科细菌有显著正相关。肠道内乳酸杆菌属细菌和粪杆菌属细菌与IL-6呈显著负相关,肠球菌属细菌与其呈显著正相关。此外,乳杆菌属细菌与TNF-α呈显著负相关,肠球菌属细菌和LPS呈显著正相关。结论维持性血液透析终末期肾病患者肠道优势菌群多样性发生了显著变化,且与患者炎症因子有密切的相关性。     

菌体脂多糖在大白菜软腐欧文氏菌对寄主根表吸附中的作用

用两种方法分别洗除菌体胞外多糖(EPS)和脂多糖(LPS),经在大白菜幼苗上测定表明,菌体洗除LPS后对寄主根表的吸附能力明显减弱,吸附菌量随无LPS的菌体在混合接种体中比例的增高而降低,在无LPS的菌体接种体中加入LPS提取物,可使吸附能力恢复到正常水平;平行测定的EPS不发生上述影响。用EPS和LPS对根表进行预处理,均可明显抑制完整菌体(不洗,含EPS和LPS)和无EPS的菌体对根表的吸附,但只有LPS预处理使无LPS的菌体吸附量提高2—3倍。用大白菜对该菌的专化性细菌凝集素Agin—SD60所作的菌体凝集试验表明,菌体洗除LPS后不再被 Agin—SD60所凝集。根据以上结果认为,菌体脂多糖在大白菜软腐欧文氏菌与寄主的接触识别中可作为细菌识别子起作用。     

大肠埃希氏菌诊断噬菌体受体位置的测定

本文报道用静止期细菌吸附噬菌体速率常数测定(ARC),和细胞壁脂多糖(LPS)使50％噬菌体失活量测定(PhI_(50))的结果,以试图分析讨论存在于大肠埃希氏菌细胞壁上的噬菌体受体位置和数量。志贺氏菌噬菌体Sh的受体位置也一并于此进行试验和讨论。经试验可被噬菌体E-4(φ369)裂解的菌株9株,ARC试验K值为198～515,其中3株提取LPS测定PhI_(50)为<0.125-0.5μg/ml,证明这些细菌细胞壁上有大量E-4噬菌体的受体,而且这种受体就定位在LPS上。被噬菌体E-1(φ484)和Sh(φ62)裂解的许多R菌株,ARC试验获得很高的K值,但提取的LPS不能使这两株噬菌体失活,说明这些细菌细胞壁上虽有大量的相应受体,但受体位置不在LPS上,很可能在脂蛋白上,尚待实验证明。试验结果进一步推论两株噬菌体的受体是不相同的。被噬菌体E-2(φ466)裂解的菌株,ARC试验K值不超过100,说明在细菌细胞壁上相应受体数目较少,或噬菌体尾丝末端与受体的亲和力较低。单独的LPS不能作为噬菌体的受体,但O抗原的存在似乎对噬菌体的吸附有协同作用。噬菌体E-3(φ451)ARC试验K值很低,每个细菌细胞壁上的受体可能只有少数的几个。因此,从细胞外的裂解大概是不可能的,而是必须在细胞内复制,然后从细胞内裂解。     

北京生命科学研究所发现炎症性Caspase为细菌内毒素的胞内天然免疫受体

<正>北京生命科学研究所邵峰实验室近年来一直专注于研究宿主细胞质中感知细菌和病原细菌的分子免疫机制。2014年8月6日,该研究组最新的研究成果在Nature在线发表,他们发现人和小鼠的炎症性Caspase-4/5/11为胞内内毒素(Lipopolysac charide,LPS,脂多糖,俗称内毒素)的受体,直接结合LPS发生寡聚化而被激活,导致细胞炎症性坏死。在该项研究中,邵峰实验室研究人员首先建立了一个可以将LPS高效导入哺乳动物细胞内的转染     

PD-L1对细菌脓毒症免疫抑制的影响及其机制*

目的:探讨在脂多糖(LPS)所致细菌脓毒症免疫抑制中树突状细胞(DCs)程序性细胞死亡配体-1(PD-L1)的表达情况及其相关信号通路。方法:细菌脂多糖刺激骨髓来源树突状细胞诱导淋巴细胞免疫抑制模型,实验分为5组:对照组(Con)、脂多糖组(LPS)、2-(4-吗啉基)-8-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮+脂多糖组(LY294002+LPS)、吡咯烷二硫代甲酸铵盐+脂多糖组(PDTC+LPS)和脂多糖+封闭PD-L1组(LPS+αPD-L1)。小鼠骨髓来源单核细胞用含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF 10 ng/ml)和白介素4(rmIL-4 1 ng/ml)的10%胎牛血清1640培养基于CO₂培养箱37℃静置培养4 d后,LPS(10 ng/ml)处理DCs静置12 h获得PD-L1高表达的DCs作为免疫抑制刺激细胞。通路抑制剂LY294002(10 μmol/L)、PDTC (20 μmol/L)作用1 h阻断PI3K和NF-κB信号。采用流式细胞分析、激光共聚焦显微成像检测LPS诱导树突状细胞PD-L1表达及磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸激酶B (PI3K/AKT) 信号通路活化情况;BrdU细胞增殖实验和γ-干扰素酶联免疫斑点实验检测LPS诱导树突状细胞PD-L1表达上调对抗原特异性T细胞增殖反应及细胞毒性T细胞杀伤作用的影响。结果:与对照组比较,LPS组DCs表面PD-L1阳性细胞百分比升高(P＜0.01),PD-L1荧光信号强度增强,且主要分布于细胞表面和细胞质,DCs介导的T细胞增殖水平降低(P＜0.01),γ-干扰素斑点形成细胞数下降(P＜0.01)。与LPS组比较,LY294002+LPS组、PDTC+LPS组和LPS+αPD-L1组PD-L1荧光信号强度降低,T细胞增殖水平升高(P＜0.01),γ-干扰素斑点形成细胞数上升(P＜0.01),改善树突状细胞介导的T细胞免疫抑制现象。 结论:PD-L1是介导脂多糖所致细菌脓毒症免疫抑制的关键分子,PI3K信号、NF-κB信号也参与此免疫抑制过程。     

Toll 样蛋白

Toll样蛋白属Ⅰ型细胞因子受体跨膜糖蛋白。以细菌壁成分作为外源配基,起细菌内毒素(即脂多糖,LPS)共受体作用,介导LPS信号转导,活化髓系与非髓系细胞内NF—кB信号途径。刺激宿主先天与适应性免疫系统。参与调节宿主的免疫应答和炎症反应。     

细菌内毒素耐受的研究进展

细菌内毒素或细菌脂多糖,是临床上引起全身性炎症综合征的主要原因,细菌内毒素或脂多糖耐受也是临床常见的现象,近年来有关细菌LPS耐受机制的研究倍受关注。本文就细菌LPS耐受引起巨噬细胞的变化,对细菌LPS耐受的分子机制进行阐述。     

TNF免疫治疗肿瘤研究进展

<正>人们早就发现由于细菌感染而使机体内肿癌自然消退的现象,从而推测细菌或其产物具有抗肿瘤作用。但这种作用并不是直接的的而是由于在细菌或其产物的刺激下,抗体内产生某些细胞因子作用的结果。1975年Carswell等发现,经卡介苗(BCG)感染的小鼠静注大肠杆菌内毒素(LPS)2小时后,     

华支睾吸虫病患者血管内皮细胞黏附分子水平与肝功能的临床关系

目的探讨华支睾吸虫病患者可溶性血管内皮细胞黏附分子(sVCAM-1)的表达,以及与肝功能的临床关系。方法50例未经治疗的华支睾吸虫病患者,参照Child-Pugh肝功能分级法,分成A22例、B 14例、C 14例3组。采用双抗体夹心ELISA法,检测血清sVCAM-1水平;采用放射免疫分析方法检测血清白细胞介素-4(IL-4)含量;采用鲎三肽基质染色定量法检测血清细菌脂多糖(LPS)水平。对照组为健康献血员20例。结果(1)华支睾吸虫病患者血清sVCAM-1、LPS和IL-4的水平明显高于对照组;(2)经相关性检验,患者血清sVCAM-1、LPS含量与TBL、ALT均呈正相关,与ALB呈负相关;(3)参照Child-Pugh分级,肝功能受累越重,患者血清中sVCAM-1、LPS和IL-4含量依次递增。结论sVCAM-1及LPS参与介导了华支睾吸虫病肝损伤过程;IL-4对华支睾吸虫感染具有一定的保护作用。     

细菌脂多糖识别系统

细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)可激活单核/巨噬细胞、内皮细胞合成和释放多种细胞因子,导致全身性炎症反应.LPS识别及跨膜信号转导是引起细胞效应的关键.在过去的几年中,有关LPS结合蛋白家族和受体系统及其作用机制的研究突飞猛进,大量研究表明LPS识别涉及复杂的蛋白质间相互作用.在此对LPS识别系统成员及其功能的最新研究进展进行综述,并详细介绍新近提出的“LPS受体激活簇”理论.     

外源性硫化氢对家兔内毒素休克诱发肺动脉高压的干预作用

目的:探讨外源性硫化氢(H₂S)对家兔内毒素休克(ES)诱发肺动脉血管反应性的影响。方法:本实验采用家兔经颈静脉注射脂多糖(LPS,8 mg/0.8 ml/kg)复制家兔ES模型,并提前15 min腹腔注射H₂S供体硫氢化钠(NaHS,28μmol/kg)进行干预。随机将新西兰大耳白家兔分为4组(n=8):溶剂对照组、LPS组、LPS+NaHS组和NaHS组。监测平均动脉压(MAP)和平均肺动脉压(MPAP)的变化;应用血管环张力测定技术,检测各组家兔离体肺动脉张力变化;应用光镜和扫描电镜分别观察肺动脉管壁结构及肺动脉内皮细胞超微结构变化。结果:(1)注射LPS后家兔出现MAP降低、MPAP升高,成功复制家兔ES模型;与LPS组相比,LPS+NaHS组家兔MPAP在各个时间点均显著降低(P均﹤0.05);(2)与正常对照组相比,LPS组家兔肺动脉对苯肾上腺素(PE)的收缩反应增强,对乙酰胆碱(ACh)的舒张反应降低(P均﹤0.01);与LPS组相比,LPS+NaHS组家兔肺动脉对PE的收缩反应降低,而对ACh的舒张反应增强(P均﹤0.05)。...     

细菌内毒素耐受小鼠肝细胞内信号转导相关分子的表达变化

目的 探讨细菌脂多糖(LPS)相关的信号转导分子在内毒素耐受小鼠肝细胞内的变化和作用.方法 将实验小鼠随机分为3大组:敏感组以LPS(2 μg)合并半乳糖胺(D-GalN)直接攻击;耐受组预先以LPS(0.1 μg)注射,再在不同耐受时间点(3 h、1 d、2 d、7 d)以LPS(2 μg)/D-GalN联合攻击.对照组注射生理盐水、D-GalN或LPS(0.1 μg);利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western印迹法)测定各信号分子在转录和表达水平的变化.结果 LPS刺激可显著诱导敏感组小鼠肝细胞的Toll样受体(TLR)-4基因转录和蛋白表达;而在LPS预处理的耐受组,TLR-4 mRNA和蛋白的水平均明显低于敏感组(P＜0.01);耐受组中白细胞介素受体相关激酶1(IRAK-1)基因的表达水平也比敏感组明显低(P＜0.01).但是肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)的表达水平则不受LPS预处理的影响.NF-κB组分分析显示,敏感组IκB的降解明显高于耐受组;耐受组的p65亚基表达显著降低,而p50亚基表达升高.结论 内毒素耐受可使NF-κB的p65亚基表达下调、p50亚基表达升高和抑制IκB的降解,而TLR-4和IRAK-I的表达下调是诱导产生内毒素耐受性的重要因素.     

微囊藻毒素与细菌内毒素对草鱼淋巴细胞凋亡的联合毒效应

采用体外暴露方式,以草鱼淋巴细胞为试验对象,研究了水体中微囊藻毒素(MC-LR)与细菌内毒素(LPS)复合作用对鱼免疫系统的影响.结果表明： MC-LR和LPS在单一与复合暴露下都能够诱导草鱼淋巴细胞发生凋亡,呈现细胞凋亡典型的阶梯状DNA电泳特征.但对比复合暴露与单一暴露的凋亡率可以发现,MC-LR与LPS复合暴露会发生协同作用,并呈显著剂量-效应关系,其中复合暴露Ⅳ组凋亡率为单一暴露Ⅰ(MC-LR)和Ⅱ(LPS)组的2-1和3.3倍.MC-LR可协同LPS抑制谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性,引发细胞内活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)水平上升,导致DNA损伤,致使淋巴细胞阻滞于G0期,增殖受到明显抑制,加速鱼淋巴细胞的凋亡,提高细胞凋亡率.表明MC-LR能够协同LPS加剧其对鱼体免疫细胞毒性,对水产养殖业产生严重不利影响.