农业其它

852421一个编码核酮糖一1,5一二磷酸狡化酶小亚基的豌豆核基因组织特异性和光调节表达〔英〕/Coruzzi,G.…了EMBOJ一1984,3(8)一1671一1679〔译自DBA,1984,3(20),84一09731〕 研究了在豌豆不同组织中编码核酮糖-1,5一二磷酸梭化酶小亚基(rbcs)的多基因族的一个成员表达。豌豆(品种Progressg号)基因组DNA用Bglll消化并连接到IO59DNA上。用““P标记cDNA克隆P5515的插人筛选了重组噬菌体,分离出6个编码的rbcs。将克隆的汇PS一3D的一个EcoRI片段继续克隆到pPR::6上,称为pPS一4.0;把这个含有rb。S基因的E。oRI一Clal片段再克隆…     

玉米特异DNA通过有性杂交导入小麦DH后代的分子证据

构建了玉米的随机基因组文库,筛选了近100个玉米基因组特异的重复DNA克隆,用它们作探针分别对2个来自小麦×玉米的小麦DH群体进行RFLP分析.结果发现,玉米的MR64克隆导入到2个小麦群体的各1株后代中,即在普通小麦DH系的18号株和波斯小麦DH系的15号株中检测到强杂交信号,这个结果首次从DNA水平上证明某些玉米特异的DNA序列,可通过受精作用以很低的频率转移到小麦DH后代的基因组中.测序分析证实,克隆MR64的插入片段长度为695Pb,A+T含量为58%,用多种酶切玉米基因组进行RFLP分析表明它是一个带1～3个主串联重复单位的散布重复序列.同时还对它的序列结构、甲基化图谱、拷贝数和在玉米染色体上的分布以及在其它小麦品种和禾本科种基因组中的序列同源性情况进行了详细的研究.     

DNA分析与扩增

920836用盆组聚合酶链反应构建小砚全长血型.蛋白签因〔英〕/Gu,H.一厂B ioehe皿.Biophys.Res.Commun一1991,177(i)一202~208〔译自})BA,1991,10(15),91一08450〕 分别从贫血小鼠脾基因库(质粒pBR322)和小鼠基因库(质粒pUC18)中分出小鼠血型搪蛋自一A基因不完全cDNA克隆(质粒pGP315)和基因组克隆(质粒pGX7,含第一个外显子和转录起始位点附近的序列),并定序。由于缺乏构建小鼠全长血型糖蛋白一A基因的限制位点,用聚合酶链反应拼接这两部分序列克隆擂人的成分,获得全长的重组DNA片段(IO53bp,含小鼠血型糖蛋白A eDNA)。用5种DNA…     

动物遗传工程

921940大鼠生长激紊基因微注射到斑马鱼卵里以生产转基因斑马鱼〔英〕/Pandian,T.J.…泌Curr.Sei一1991,60一9~10〔译自DBA,1991,10(22),91一13024〕 将质粒pMGH(15ng DNA/时)(含有与大鼠生长激素基因融合的小鼠金属硫因启动子)微注射到斑马鱼尚未分裂的受精卵(1266个)里。注射一天后胚胎平均存活率为46%,但变动范围为16~72%。利用标记质粒作探针通过Slot一blot和Sou-thern印迹杂交分析了从推定转基因鱼提取出的基因组DNA。杂交图谱显示发生了基因组、染色体外、以及嵌合整合。继续存在于Fl和FZ代里的染色体外DNA浓度逐步降低。F…     

基因库构建

921720与染色体带型及数t有关的人类签因密码子用且类型的明显差异;核普酸序列数据与细胞遗传学数据的关系〔英〕/Ikemura,T.…了Nueleie AeidsRes厂1991,19(16)一4333~4339〔译自DBA,1991,10(22),91一12729〕 目前,DNA数据库中的人类基因组序列约为10Mb,为高分辨率染色体分带平均尺寸的数倍。通过数据考察,有可能弄清人类基因组的球性特征,从而建立基因序列数据(kb水平)与细胞遗传学数据(Mb水平)。对GenBank数据库进行广泛考察,计算2000个人类序列的密码使用率。第三密码子位置上的最高G+C%为97%,在250个序列中则为80%以上。最低G+…     

植物遗传工程

940738小南瓜花叶病毒外壳蛋白基因:克隆序列分析及其在烟草原生质体中1的表达〔英万Hu,J.S…了Areh.Virol一。1993,130(i一2)一17~31仁译白DBA,1993,12(19),93一11036〕 克隆了南瓜花叶就豆花叶病毒(SqMV)香瓜株系中间部分RNA的互补DNA。分离出SqMVmRNA,通过蔗糖梯度离心分级分离双链cDNA、用E。。Rl DNA一甲基化酶使之甲基化并将EcoRI-亲和性接头连到两侧末端。用EcoRI消化后,将。DNA克隆到质粒pUC18的EcoRI位点上。转化并筛选大肠杆菌DHS感受态细胞。设计了4种寡核普酸引物,用以在SqMV寡核昔酸序列和预测的多聚蛋白…     

桃PGIP基因及其启动子的克隆与分析

桃流胶病是一种严重危害桃树的真菌性病害,为研究PGIP基因在桃抗流胶病及抗其它真菌性病害中的作用,本研究以桃抗流胶病品种‘南京白沙'叶片为材料,对其PGIP基因及启动子序列进行克隆与分析.克隆测序获得了‘南京白沙'桃PGIP基因cDNA序列(GenBank登录号:HQ453972)和PGIP基因组DNA序列以及起始密码子上游453 bp的启动子序列(GenBank登录号:HQ453974),并将该PGIP基因命名为PpPGIP2.‘南京白沙'桃PpPGIP2序列分析显示,该DNA序列具有完整的阅读框,无内含子,与GenBank中登录的李属PGIP基因序列同源性在93%～98%之间,与测序完成的桃全基因组中该基因的序列同源性为96%;PpPGIP2编码的氨基酸序列分析显示,该氨基酸序列含有2个典型的亮氨酸重复序列,信号肽为第1～第24个氨基酸残基;PGIP基因的序列聚类图显示,除了科、属、种间的同源性差异外,桃的种内PGIP基因同源性也有较大差异;PpPGIP2启动子序列分析发现3个抗病相关元件,分别为:GT1CONSENSUS、SEBFCONSSTPR10A和WBOXATNPR1,另外还有与激素调控、胁迫有关的调控元件.本研究对‘南京白沙'桃PGIP基因和启动子的克隆与分析,将为进一步研究桃PGIP基因的表达调控及其功能分析提供参考.     

基因库构建

922884直接偏选含YAC克隆的cosmid文库〔英〕/Bax“-ndale,5.…/Nueleio Aeids Res一i。。1,1。 (25)一6651〔译自DBA,1992,11(4),92-01865〕 介绍了直接筛选含人类人造染色体(HAC)的cosmid基因文库的方法。从48XXXX人类细胞系的酵母人造染色体(YAC)基因文库中分离出重叠YAC克隆〔YGAS(41okb)和YGAio(4‘okb)〕,置于亨廷顿舞蹈病基因4 p16。3候选区内在紫外光下(36Onm)从凝胶上的酵母染色体带中切下HAC带。用(a一‘ZP)一dGTP和一dATP对D NA进行随机引物标记。通过与人切变胎盘DNA预杂交,从探针和经流式分拣的人第4染色…     

基因库构建

921317应用吸菌体展示文库制备抗体片段〔英〕/C lack-50。,T。…/Nature。一1991,352(6336)。一624~628〔译自DBA,1991,10(19),91一10869〕921318栽培花生徐州68一4核签因文库的构建〔中〕/梁涛…了莱阳农学院学报。一1990,7(3)。一iei~165 以EMBL4噬菌体多聚克隆载体将栽培花生徐州68一4的核DNA13~20kb片段进行了克隆,共得到重组噬菌体总数分别为5.6xl。,,8.4xl。,和1.3x10。的3个基因组基因文库。(孙国凤)921319弗兰克氏菌若因文库的构建〔中〕/秦敏…了西南农业学报。一1090,3(4)一56~60 采用cosm记质粒pLAFRI为载体,成功地构建…     

水稻限制性片段长度多态性（RFLP）零等位现象的分子基础研究

零等位基因(nullallele)是指不能产生有功能的产物的等位基因。由限制性片段长度多态性(RFLP)揭示的零等位表现为在实验所用的严谨条件下一个探针与一个植物品种的DNA能够稳定地杂交,而与另一个植物品种的DNA杂交的信号很弱或者没有信号,这说明在后者的基因组中与该探针相应的区域发生了缺失、插入或染色体重排等较大范围的变异。本文利用水稻基因组随机探针RG684对52个水稻品种进行了RFLP分析,结果零等位主要出现在地理上分布于我国东北及日本一带较为典型的粳稻品种中。零等位的这种分布与有些研究者假定的水稻进化从野生稻→籼稻→粳稻的趋势相吻合。RG684的核苷酸序列分析表明其为基因组中没有编码功能的部分,这种序列的缺失或变异不会对植物的生存产生明显的影响。与果蝇gypsy转座子bx34e序列的比较发现RG684序列11403—1439处的37个碱基与其长末端重复顺序(LTR)有78.4%的同源性,作者推测水稻中RFLP零等位的产生可能与转座或类似转座的事件有关。     

疫苗

921734太平洋维鱼催乳激素原在大肠杆菌中的克隆〔俄〕//Prokopenko,I.V。…了Mol.Biol.(Mos-eow)。一1991,25(3)一689~694〔译自DBA,1991,10(21),91一12145〕 克隆T太平洋鱿鱼(ooeo,h鱿。eh:s无eta)催乳激素原cDNA,并测定了序列。应用催乳激素DNA探针从建立于大肠杆菌L87及l监菌体入gt10中的垂体 cDNA基因库中筛选出入gt Prk12。将此序yI]与蹲鱼习a乙饥0 ga而己几e子么及王鱿(0.名schaw-夕‘。“ha)作了比较,显示出显著的同源性。比较太 之洋鱿和王鱿时,在催乳素编码区内发现12个核普酸替代,其中3个导致氨基酸替代(Tyr一宁4、AsP…     

阴道分离因肯毛孢子菌的分子鉴定和种内分型

分别采用rRNA基因内转录间隔区(ITS)和基因间隔区(IGS1)测序,ITS和IGS1区PCR限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和基因组DNA的随机扩增多态性DNA(RAPD)等方法,对三株因肯毛孢子菌Trichosporon inkin进行分子特征及种内分型研究。结果显示,不同菌株的rRNA基因ITS区和IGS1区的序列相似性均高达100%,RFLP酶切图谱具有较理想的种内一致性,而不同菌株的RAPD图谱不尽相同。研究表明:rRNA基因IGS1区测序及RFLP酶切可考虑用于因肯毛孢子菌的菌种分子鉴定,而基因组DNA的RAPD则较适合于菌种的种内分型。     

质粒研究与载体构建

92引47抗杀稻疽菌素一S的大肠杆菌TK121的杀稻瘟菌素一S一脱氨酶N末端氨基酸序列以及bsr基因的核普酸序列〔英〕/Kobayashi,K.…了Agrie.Biol.Chem一1991,55(12)。一3155~3157〔译自DBA,1992,11(5),92一02402〕 分离到抗杀稻瘟菌素一S(BS)的蜡状芽抱杆菌K55一51菌株,并分离到BS脱氢酶(BSD)。构建了含有BSD基因(bsr)的质粒pBSRs(10.5kb)。将其再克隆到枯草杆菌及大肠杆菌TK121中,已将bsr基因定位于pTK17中的一个1。5 kbEcoRI一BamHI片段上(内含一个单一的Bglll位点)。用M13链终止法测定DNA序列,在测定的Nde工一Hincn片段中…     

利用分子标记和水稻籼粳交双单倍体群体进行遗传作图研究

利用“圭 630”(籼稻 ,Oryza sativa subsp.indica) /“0 2 4 2 8”(粳型广亲和品种 ,O.sativa subsp.japonica)的 F1代花药培养双单倍体植株 ( DH)群体和 RFLP标记构建了一张水稻分子连锁图谱。图上有 2 33个标记 ,覆盖基因组约 2 0 70 c M( centimorgan) ,定位了 2 5个 RFLP新标记、2个染色体端粒和水稻落粒性基因 sh- 2。亲本间的 RFLP主要来源于碱基取代 ,少数来源于 DNA结构的变化。RFLP标记在图谱上的排序与其它图谱基本相同 ,但标记在染色体间和染色体内分配不均 ,这可能与染色体间的遗传稳定性和染色体内的区段变异性 ,以及各区段交换重组活性不同有关。     

MAPPING重组噬菌体中插入片段的“分/合”策略

随着胚胎干细胞基因打靶技术不断推广应用,如何有效地从小鼠基因组DNA文库中筛选得到基因组DNA并进行结构分析(如限制性内切酶酶切图谱分析,即mapping等)已成为一个被普遍关心的问题.设计应用了“分/合”的策略,即先对重组噬菌体插入片段制备一套亚克隆,在对亚克隆进行详细的mapping的基础上,再对完整的大分子噬菌体DNA进行酶切分析,将两者相结合,可以分析得到完整的酶切图谱.应用此策略,简便准确地对所克隆的含有小鼠凝血因子IX基因组DNA的大分子插入片段进行了限制性内切酶酶切图谱分析,结果得到了DNA印迹等的验证.     

曼氏无针乌贼GT微卫星位点的筛选

采用链霉亲和素包被的磁珠富集法筛选曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)微卫星位点。试验样品来自舟山六横岛,提取4个样品的DNA混合成DNA pool,用限制性内切酶Sau 3A I酶切。接上接头后构建基因组PCR文库,用生物素标记的(GT)15探针筛选。将筛选获得目的片段进行PCR扩增,连接pMD18-T载体,转入DH5α感受态大肠杆菌里,扩大培养后PCR筛选阳性克隆。总共选取278个克隆,对120个经过检测含有插入片段的克隆进行测序,发现102个克隆含有微卫星序列,阳性克隆比率为85%。除去重复测序和侧翼链不足的序列,可以设计引物的微卫星序列有64条。     

国际基因组完成人类21号染色体DNA序列测定

21号染色体占人类基因组的 1 %～ 1 .5% ,是人类染色体组中最小的常染色体 ,也是自人类基因组计划实施以来第一个被绘制出致密连锁图、酵母人工染色体 (YAC)物理图谱和限制性内切酶 Not 图谱的常染色体 .今年 5月《自然》杂志刊登了日、德、法、美、英和瑞士等国 1 3个研究单位署名文章“人类 2 1号染色体DNA序列”,测定序列覆盖了 2 1号染色体的 99.7% ,序列测定的准确度达 99.995% .根据他们公布的结果 ,2 1号染色体长臂 (2 1 q) DNA由 33546361 bp组成 ,其中只剩下 3个小的克隆裂隙和 7个序列裂隙 (约 1 0 0kb)尚未确定其序列 .2 1号…     

PCR筛选BAC文库和直接BAC末端测序方法的建立

建立了一种用PCR方法筛选富含高度重复序列的大麦BAC DNA 文库和直接对 BAC DNA进行末端测序的方法.用PCR技术进行大麦BAC DNA 文库(含816个平板,每个平板含384个克隆)的筛选分4步进行.在实验中,建立了两个水平的BAC DNA池(一级池和二级池).一个二级池由一个平板(含有384个克隆)的DNA 组成,一个一级池由连续10个稀释100倍的二级池的DNA混合而成(如1～10,11～20等),共82个一级池.BAC DNA 文库筛选的第一步是对82个一级池的筛选.得到阳性一级池后(如2号一级池),对其所含的10个二级池(从11～20)进行第二步筛选.得到阳性二级池后,培养相应的阳性平板的所有克隆(384个),从头开始(左上侧),每相邻的4个克隆为一组,在96孔板上(4 X 96=384) 进行第三轮PCR反应;之后对筛选结果为阳性的4个克隆分别进行菌落 PCR(第四轮)得到单一阳性克隆.根据BAC DNA Hind III 酶切指纹图谱,对同一引物筛选的BACs进行重叠群作图(Contig).对代表contig 的两端的BAC DNA直接进行末端测序并对测序结果Blast,以检测其在大麦中是否属于单拷贝序列.根据测序和Blast结果设计引物,用中国春附加系(附加大麦染色体)对来自BAC克隆的引物进行染色体定位并用分离群体进行遗传学作图,以确定是否可以用作下一步的染色体步行.     

变色栓菌漆酶基因的克隆与序列分析

本研究以PCR扩增的方法,从变色栓(菌Trametes versicolor)的基因组DNA中扩增出了一预期大小的DNA片断,并将其克隆到了pUCM-T载体上。经筛选、酶切、PCR鉴定,序列分析,证明该片断为变色栓菌漆酶基因的克隆。该基因的开放阅读框由1560个核苷酸组成,编码一个由519个氨基酸组成的多肽。与GeneBank中发表的Laccase基因(AY081188)序列比较发现,编码的氨基酸序列同源性为96%,而核苷酸序列的同源性为92%。     

DNA分析与扩增

922793用小卫遥盆盆密码作O付几分通的数位方法〔英洲Jeffreys,A.J.…了Nature一1991,354 (6350)一204~209〔译自DBA,1。。2,11(3),92一01260〕 用聚合酶链反应(PCR)作小卫星(Ms)变型重复图是一种新的简单的DNA定型法。2种不同重复单位(a一和t一型)组的Ms等位基因可以一种从第一个重复单位起双线延伸的方式编码。总基因组DNA中可形成等位基因重叠的三元密码。人Ms MS32(DISs)的同感Zobp重复单位序列为多态位点(a一型,可被Haelll裂解)重复子和Hae111抗性(t一型)重复子。32一ATG一A和32一ATG-T是20碱基的不同重复序列。在低引…