延髓腹外侧一氧化氮介导电针内关对急性心肌缺血大鼠心功能的作用

实验在以乌拉坦和氯醛糖混合麻醉的雄性SD大鼠上进行。结扎左冠状动脉前降支以建立急性心肌缺血(AMI)动物模型。病理学检查显示该模型具有典型的心肌缺血改变。功能学改变包括心率(HR)减慢、平均动脉压(MAP)降低,以及心功能减弱,如左室舒张末压(LVEDP)增大,左室收缩压(LVSP)、左室压变化最大速率(±dp/dt)、左室收缩成分缩短速度(VCE)、心力环总面积(L0)等均明显减小。电针AMI大鼠的内关穴位20 min,可使其HR、MAP、LVEDP、LVSP、±dp/dt、VCE和L0等均明显改善。若电针前于延髓头端腹外侧区(RVLM)微量注射一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NNA(0.1 mmol/L,0.1 μl),除HR和MAP外,电针改善AMI心功能的其余各项指标均减弱或被取消,而以等量的生理盐水取代L-NNA被注入RVLM时,则不能影响EA对AMI各项心功能指标的改善作用。以上结果提示电针内关改善AMI的作用由RVLM的一氧化氮(NO)所介导。     

延髓头端腹外侧区在躯体传入冲动抑制中枢性心肌缺血中的作用

电刺激麻醉家免延髓头端腹外侧区(rVLM)能诱发心外膜电图ST段明显抬高。刺激腓深神经能抑制这种反应。P5平面横断脑干、双侧电解损毁中脑中央灰质腹侧部(vPAG)或在双侧rVLM微量注射脑啡肽抗体后,均能明显减弱腓深神经的抑制作用。以上结果提示腓深神经能够抑制由rVLM诱发的心肌缺血反应。腓深神经的这种抑制效应可能有赖于中脑头端以上某些区域脑结构的完整,vPAG可能是这种抑制效应的中枢环节之一,延髓水平的脑啡肽可能参与这种抑制过程。     

乙酰胆碱对离体大鼠延髓头端腹外侧区神经元自发放电的影响

在８９张Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠延髓脑片,用玻璃微电极记录到１６５个延髓头端腹外侧区神经元的自发放电,其放电形式有三种：规则型;不规则型,静息型,乙酰胆碱对自发放电有兴奋,抑制双相和无影响四种效应,各占所测试神经元数的４１．８％,２０％,３％和自发放电有兴奋,抑制双相和无双相和影响四种效应,各占所有测试神经元数的４１．８％,２０％,３Ｔ和３５．２％。     

内皮素通过最后区易化大鼠延髓腹外侧头端区神经元活动

在３５只切断双侧缓冲神经、用氨基甲酸乙酯－α氯醛糖混合麻醉的Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠,应用细胞外记录的电生理学方法,由ＲＭ－６０００型多道生理记录仪和ＷＳ－６８２Ｇ热阵记录器（频响范围０～２．８ｋＨｚ）同步记录血压、心率和单位神经元放电,观察颈动脉注射内皮素对８７个延髓腹是头端区（ＲＶＬＭ）自发放电神经元活动的影响,所得结果如下;（１）颈动脉注射ＥＴ－１（０．３ｎｍｏｌ／ｋｇ）时３６个单位     

皮质酮对大鼠延髓头端腹外侧区神经元活动的影响

实验用多管微电极细胞外记录氨基甲酸乙酯麻醉的SD大鼠延髓头端腹外侧区（RVLM）神经元的活动,用电刺激主动脉神经和静脉注射苯肾上腺素激活压力感受器反射等方法鉴定心血管神经元,在RVLM内共记录到145个自发放电的神经元,其中33个为心血管神经元,31个为伤害调制性神经元,81个为未知功能神经元。33个心血管神经元微电泳硫酸皮质酮（CORT）后,25个（76%）神经元放电迅速加快,8个（24%）自发放电没有变化。伤害刺激引起兴奋的31个伤害调制性神经元,微电泳CORT后19个（64%）神经元放电抑制,而2个（6%）兴奋,其余10个（30%）没有反应,功能不明的81个神经元在微电泳CORT后,32个（40%0兴奋,5个（6%）抑制,44个（54%）没有反应,以上结果证明CORT可能通过非基因组机制快速影响RVLM神经元的活动,提示在应激等情况下CORT的快速作用机制可能在心血管和抗伤害等活动整合中具有一定意义。     

电刺激大鼠延髓头端腹外侧区对交感节前神经元单位放电的影响

本实验用氨基甲酸乙酯麻醉和箭毒化的雄性大鼠,细胞外记录脊髓胸2节段的交感节前神经元(SPN)单位放电,电刺激同侧颈交感干,逆向激活 SPN,以确定所记录的神经元为交感节前神经元。共分析了80个 SPN 单位放电,其中有自发活动和无自发活动的单位各40个。SPN 轴突传导速度为0.59—3.75m/s。实验观察到电刺激同侧延髓头端腹外侧区(Rostralventrolateral medulla:RVL)可兴奋多数有自发活动的 SPN(19/25),并可使少数静止SPN 产生诱发反应(4/23),潜伏期为6—115ms。电刺激对侧 RVL 结果类似:多数自发活动的 SPN(6/9)呈兴奋反应,及少数静止 SPN(3/17)产生诱发反应,潜伏期为11—105ms。表明 RVL 对双侧 SPN 有兴奋性影响。     

延髓头端腹外侧区注入肾上腺素对血液流变学的影响

实验用ＳＤ雄性大鼠７８只,采用束缚方法引起应激性高血粘度和血压升高。结果：（１）清醒大鼠束缚２ｄ可引起应激性高血粘度和血压升高。（２）双侧延髓头端腹外侧区（ｒＶＬＭ）微量注射肾上腺素（Ｅ,每侧０．５μｇ／０．５μｌ）可引起血粘度明显增高,此作用可预先在双侧ｒＶＬＭ注入α肾上腺素能受体阻断剂酚妥拉明所阻断,不能被β－肾上腺能受体阻断剂心得安所阻断。用同样剂量Ｅ注入双侧延髓尾端腹外侧区（ｃＶＬＭ）或静     

乙酰胆碱对大鼠头端延髓腹外侧区前交感神经元放电的作用

实验采用细胞外记录和微电泳等电生理方法,研究乙酰胆碱（ＡＣｈ）对氨基甲酸乙酯麻醉的大鼠头端延髓腹外侧区（ＲＶＬＭ）前交感神经元放电频率的影响。在ＲＶＬＭ共记录到３５个前交感神经元,微电泳ＡＣｈ能增加其放电（Ｐ〈０．０５）,并且具有剂量依赖性。其中２２个神经元微电泳Ｍ型胆碱受体阻断剂阿托品（ＡＴＲ）后能明显降低前交感神经元的基础放电（Ｐ〈０．０５）和完全阻断ＡＣｈ引起的神经元兴奋作用;分别向其余７和     

颈动脉注射17β -雌二醇对去缓冲神经大鼠延髓腹外侧头端区神经元放电活动的影响

本研究旨在观察17β-雌二醇(E2)对雄性大鼠延髓腹外侧头端区(RVLM)神经元自发放电活动的影响.在切断双侧缓冲神经的麻醉雄性Sprague-Dawley大鼠上,同步记录血压、心率和RVLM神经元的自发放电活动.颈动脉内注射E2 (10 ng/kg),30个RVLM神经元自发放电单位中有25个单位的放电频率由14.46±0.47降至9.73±0.33 spikes/s (P<0.05),与此同时血压和心率无明显改变.E2的抑制效应在1 min内起效,持续时间长于5 min.雌激素受体拮抗剂tamoxifen (5 mg/kg)不能阻断E2 的抑制效应.预先给予一氧化氮(NO)合酶阻断剂L-NAME (2.7 μg/kg)能明显阻断E2的抑制效应.应用NO供体SIN-1 (0.5 μg/kg)可增强E2的抑制效应.以上结果提示,E2可通过非基因组效应激活RVLM神经元的NOS而引发NO释放,进而抑制其自发放电活动.     

肾上腺髓质素对大鼠延髓头端腹外侧区压力反射敏感神经元的作用

采用多管微电泳结合细胞外记录的方法研究了肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)对大鼠延髓头端腹外侧区(rostral ventrolateral medulla,rVLM)压力反射敏感性神经元电活动的作用及其可能机制.结果显示在29个rVLM压力反射敏感神经元中,20个神经元在30、60和90 nA的电流微电泳大鼠ADM(rADM)过程中,放电频率由(10.8±2.7)spikes/s分别增加到(14.6±3.6)、(19.8±4.7)和(31.9±6.4)spikes/s(P＜0.05,n=20).微电泳rADM特异性受体阻断剂人ADM(human ADM,hADM)(22-52)可明显减小神经元放电频率的增加幅度,比正常放电频率仅增加15.4%[(11.4±2.5)sipkes/s,P＜0.05,n=10],而降钙素基因相关肽1(CGRP1)受体阻断剂hCGRP(8-37)对rADM兴奋性神经元电活动影响较小.在另外23个神经元中,10个神经元的放电频率在10、20和40 nA电流微电泳神经型NOS(nNOS)抑制剂7-NiNa过程中放电减少,由正常的(10.1±3.5)spikes/s分别减少为(7.5±2.5)、(5.3±2.1)和(3.1±1.4)spikes/s(P＜0.05,n=10).在微电泳7-NiNa过程中同时微电泳rADM,则rADM增加神经元放电频率的效应减弱,增加幅度为基础水平的17%[(6.2±1.9)spikes/s].8个神经元在10、20和40 nA电流微电泳诱导型NOS抑制剂(iNOS)aminoguanidine(AG)过程中放电频率由(11.5±5.1)spikes/s增加到(17.8±5.6)、(22.5±6.3)和(29.1±6.4)spikes/s(P＜0.05,n=8),rADM与AG同时微电泳时,AG对rADM本身增加神经元放电的效应无明显影响.上述结果提示,rADM在rVLM可通过其特异性受体或来源于nNOS的NO作用于压力反射敏感神经元,使其活动增强而发挥调节心血管活动的作用.     

Exercise training restores oxidative stress and nitric oxide synthases in the rostral ventrolateral medulla of renovascular hypertensive rats

Abstract

We hypothesize that exercise training (EX) reverses the level of nitric oxide (NO) and oxidative stress into rostral ventrolateral medulla (RVLM) of renovascular hypertensive rats (two kidneys, one clip - 2K1C). Microinjections of L-arginine (5 nmol), L-NAME (10 nmol), or saline (100 nl) were made into RVLM of 2K1C and normotensive (SHAM) rats sedentary (SED) or subjected to swimming for 4 weeks. mRNA expression (by qRT-PCR) of nitric oxide synthases isoforms (nNOS, eNOS, and iNOS), manganese superoxide dismutase (MnSOD), copper and zinc superoxide (Cu/ZnSOD), catalase (CAT), NADPH oxidase subunit p22^phox, concentration of thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS), and CAT activity into RVLM were evaluated. The mean arterial pressure was reduced in 2K1C EX compared with that in 2K1C SED rats. L-arginine into RVLM induced hypertensive effect in 2K1C and SHAM SED rats, while L-NAME prevented hypertensive effect only in SHAM-SED. EX reduced hypertensive effect of L-arginine in SHAM and 2K1C rats. mRNA expression of NOS isoforms, p22^phox, and concentration of TBARS were increased while CAT and Cu/ZnSOD expression and CAT activity decreased into RVLM of 2K1C-SED compared with SHAM-SED rats. Additionally, EX reversed mRNA expression of CAT and NOS isoforms, concentration of TBARS, and CAT activity into RVLM of 2K1C-EX rats. These data suggest that the levels of NOS and oxidative stress into RVLM are important to determine the level of hypertension. Furthermore, EX can restore the blood pressure by reversing the levels of NOS and CAT expression, and reducing TBARS concentration into RVLM for the physiological state.     

延髓头端腹外侧区一氧化氮与慢性心力衰竭大鼠心交感传入反射的关系

为观察延髓头端腹外侧区(rostral ventrolateral medulla,RVLM)一氧化氮(NO)在慢性心力衰竭(chronic heartfailure,CHF)大鼠增强的心交感传入反射(cardiac sympathetic afferent reflex,CSAR)中的作用,实验在去压力感受器神经支配的结扎冠状动脉诱发的CHF大鼠和假手术SD大鼠进行,记录电刺激心交感传入神经中枢端前后的血压和肾交感神经活动(renal sympathetic nerve activity,RSNA)变化以评价CSAR.结果显示:(1)CHF大鼠的CSAR显著增强;(2)RVLM微量注射NO合酶(NOS)抑制剂MeTC增强对照组大鼠的CSAR但对CHF大鼠的CSAR无显著影响;(3)RVLM微量注射NO供体S-nitroso-N-acetyl-penicillamine(SNAP)抑制CHF大鼠增强的CSAR;(4)S-methyl-L-thiocitmline(MeTC)仅增强对照组大鼠基础水平的RSNA,而SNAP抑制对照组和CHF大鼠基础水平的RSNA.结果表明RVLM中内源性NO的减少是导致CHF大鼠CSAR增强的重要机制之.     

延髓头端腹外侧区一氧化氮与慢性心力衰竭大鼠心交感传入反射物的关系

为观察延髓头端腹外侧区(rostral ventrolateral medulla,RVLM)一氧化氮(N0)在慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)大鼠增强的心交感传入反射(cardiac sympathetic afferent reflex,CSAR)中的作用,实验在去压力感受器神经支配的结扎冠状动脉诱发的CHF大鼠和假手术SD大鼠进行,记录电刺激心交感传入神经中枢端前后的血压和肾交感神经活动(renal sympathetic nerve activity,RSNA)变化以评价CSAR。结果显示：(1)CHF大鼠的CSAR显著增强;(2)RVLM微量注射NO合酶(NOS)抑制剂MeTC增强对照组大鼠的CSAR但对CHF大鼠的CSAR无显著影响;(3)RVLM微量注射NO供体S-nitroso-N-acetyl-penicillamine(SNAP)抑制CHF大鼠增强的CSAR;(4)S-methyl-L-thioeitruline（MeTC)仅增强对照组大鼠基础水平的RSNA,而SNAP抑制对照组和CHF大鼠基础水平的RSNA。结果表明RVLM中内源性NO的减少是导致CHF大鼠CSAR增强的重要机制之一。     

延髓头端腹外侧区血管升压素能机制在应激性高血粘度中的作用

观察延髓头端腹外侧区（ｒＶＬＭ）微量注射血管升压素（ＡＶＰ）能否影响正常大鼠的血压和血粘度,并分析ｒＶＬＭ内ＡＶＰ能机制在清醒大鼠经悬吊加束缚引起应激性升压反应和高血粘度中的影响。结果如下：⑴正常大鼠双侧ｒＶＬＭ微量注射ＡＶＰ（每侧０．５μｇ／０．５μｌ）,可引起血压和血粘度升高;此作用可被事先在同一位置微量注射ＡＶＰ－Ｖ１受体拮抗剂ｄ（ＣＨ２）５「Ｔｙｒ（Ｍｅ）＾２」ＡＶＰ（每侧０．１μｇ／０．     

肾缺血增强大鼠延髓腹外侧头端区神经元电话动和Fos蛋白表达

在67只切断两侧缓冲神经的麻醉Sprague-Dawley大鼠,应用细胞外记录的电生理方法和免疫组织化学技术,分别观察肾缺血对延髓腹外侧头端区巨细胞旁外侧核神经元自发放电活动和Fos蛋白表达的影响.所得结果如下(1)左肾动脉阻断后,28个单位的放电频率由11.40±1.08增至21.1±1.74spikes/s(P<0.001),血压和心率无明显变化(P>0.05);(2)在17个放电单位中,应用腺苷受体拮抗剂8-苯茶碱(8-phenyltheophylline,10mg/kg)可明显抑制肾缺血的兴奋效应(P<0.05);(3)肾缺血后,延髓腹外侧头端区的Fos蛋白样免疫反应神经元显著增加(P<0.01);(4)预先应用8-苯茶碱可明显减弱肾缺血所激活的Fos蛋白表达反应(P<0.05).以上结果提示肾缺血增强延髓腹外侧头端区神经元的放电活动和Fos蛋白表达,而此作用可能与肾脏缺血所产生的腺苷激活肾内感受器有关.     

Engagement of inducible nitric oxide synthase at the rostral ventrolateral medulla during mevinphos intoxication in the rat

We evaluated the relationship between the toxicity induced by the organophosphate mevinphos (Mev) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) in the rostral ventrolateral medulla (RVLM), the medullary origin of sympathetic neurogenic vasomotor tone. Adult Sprague-Dawley rats that were anesthetized and maintained with propofol were used. Laser scanning confocal microscopic analysis revealed colocalization of the M2 subtype of muscarinic receptors (M(2)R) and iNOS immunoreactivity in RVLM neurons. Comicroinjection bilaterally of Mev (10 nmol) and artificial cerebrospinal fluid (aCSF) into the RVLM elicited a progressive decline in systemic arterial pressure (SAP) and heart rate. This was accompanied during phase 1 Mev intoxication by an increase in the power density of the very high-frequency (VHF; 5-9 Hz), high-frequency (HF; 0.8-2.4 Hz), low-frequency (LF; 0.25- 0.8 Hz) and very low-frequency (VLF; 0-0.25 Hz) components of SAP signals. Phase 2 exhibited a reversal of the VHF and VLF power to control levels and a further reduction in the power density of both HF and LF components to below baseline. Hypotension and bradycardia promoted by Mev were significantly blunted on coadministration into the RVLM of the selective iNOS inhibitors S-methylisothiourea (250 pmol) or aminoguanidine (250 pmol). Not only was the augmented power density of HF and LF components during phase 1 Mev intoxication further enhanced, the reduced power of these two spectral components during phase 2 was appreciably antagonized. On the other hand, the temporal changes in VHF and VLF power were essentially the same as with coadministration of Mev and aCSF. We conclude that, as a cholinesterase inhibitor, Mev may induce toxicity via nitric oxide produced by iNOS on activation of the M(2)R by the accumulated acetylcholine in the RVLM.