鸡γ-干扰素在杆状病毒系统中的表达

目的：获得具有生物学活性的重组鸡γ-干扰素（ChIFN-γ）。方法：应用RT-PCR方法扩增ChIFN-γ基因cDNA,将其克隆入杆状病毒表达系统的转移载体pFastBac1,构建重组质粒pFast-ChIFN-γ,通过位点特异性转座,将ChIFN-γ基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建重组质粒pBac-ChIFN-γ并转染昆虫细胞Sf9,采用间接免疫荧光试验（IFA）、ELISA试验鉴定重组ChIFN-γ的表达,通过细胞病变抑制法检测重组蛋白的抗病毒活性。结果：IFA、ELISA与细胞病变抑制试验结果显示,重组ChIFN-γ在杆状病毒系统中获得表达,其抗病毒活性达5×103～1×104U/mL。结论：重组ChIFN-γ的获得为其开发应用提供了重要的生物材料。     

鸡α干扰素在家蚕中的表达及抗病毒活性测定

鸡α干扰素在防御病毒感染及治疗病毒性疾病中起着重要的作用。旨在利用家蚕杆状病毒表达系统研制有活性的鸡α干扰素。首先对鸡α干扰素基因(ChIFN-α)进行了优化与合成,将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中,与ORF1629缺损的亲本病毒BmBcmid共转染,纯化重组病毒,再感染家蚕幼虫,收集蚕血淋巴以检测α干扰素基因的表达。Western blot分析结果显示,成功表达出分子量约为19 kD的鸡α干扰素。采用细胞病变抑制法在Vero-VSV*GFP系统中测定表达产物的抗病毒活性。所的表达的鸡α干扰素具有明显的抗病毒活性,活性不低于3.2×105 U/mL。利用杆状病毒载体系统成功地表达了具有抗病毒活性的鸡α干扰素的成熟蛋白,为开发廉价高效的鸡干扰素生物制剂奠定了物质基础。     

鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒效果研究

通过PCR从三黄肉鸡的肝脏基因组中扩增了鸡α干扰素(ChIFN-α)全长基因。序列分析表明ChIFN-α基因全长582bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因(489bp),利用基因重组技术构建了E.coli/pET-28a( )-IFNα,使IFN-α置于pET-28a的T7启动子下游并同6×His(多聚组氨酸标签)-Tag融合。经酶切鉴定,DNA测序证实重组质粒构建正确;将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE,Western-blot分析证实表达出22kD左右的融合蛋白,表达的蛋白以不溶性的包涵体形式存在并且具有良好的免疫学活性。提纯的包涵体纯度可达70%以上,用镍亲和层析方法纯化蛋白则可达到95%。经透析复性后的蛋白在鸡胚成纤维细胞上能够抑制H9N2禽流感病毒的复制。鸡胚试验中重组干扰素抗病毒效果好在H9N2禽流感病毒攻毒组中,能保护鸡胚并使其孵出率达到100%的重组干扰素最小蛋白含量为2μg;重组干扰素对新城疫病毒复制也有一定的抑制能力,延迟该病毒复制时间为12h至48h;雏鸡试验表明重组干扰素也能较好地抵抗H9N2禽流感病毒对雏鸡的感染。两组试验均表明,亲和层析纯化蛋白是包涵体蛋白活性的20倍左右。     

人干扰素α-2b 基因在烟草中的表达研究

应用PCR的技术从质粒pAIFN中扩增人干扰素α-2b（Human interferon α-2b,HuIFN α-2b）编码基因,将其连接到pBI121双元载体构建植物真核表达载体pBIFN;用冻融法将该载体转染根癌农杆菌LBA4404;并用叶盘浸染法转化烟草叶片,经转化的烟草叶片的组织培养,诱导愈伤获得再生植株。通过应用PCR,RT-PCR,Wes-tern blot和WISH/VSV方法检测获得的烟草再生植株,结果表明HuIFN α-2b基因已成功整合进烟草核基因组并表达出具有活性的HuIFN α-2b蛋白。本文对HuIFN α-2b基因在烟草核系统中的表达进行了研究,为进一步在烟草叶绿体系统中该基因的表达研究奠定了基础。     

人干扰素和脑啡肽融合蛋白的表达和生物学活性

以INFα-m基因为模版,采用overlapping PCR技术构建甲硫氨酸脑啡肽干扰素表达质粒pBV220/Enk-/Met-INFα-m,转化大肠杆菌DH5α表达,产物以包涵体形式存在.包涵体经分离、变性、复性,然后经CM-Sepharose-FF、DEAE-Sepharose-FF离子交换层析和Sephacryal-HR100分子筛纯化,获得较纯的Enk-IFNα-m融合蛋白.生物活性检测表明,融合蛋白不仅具有干扰素的抗病毒、抗增殖、增强NK细胞功能的活性,而且具有脑啡肽的脑内镇痛作用.     

重组人肿瘤坏死因子(TNF)和干扰素αA(IFNαA)融合蛋白的构建及表达

本文采用定位诱导缺失突变技术,经137个单核苷酸缺失,将串联的重组人肿瘤坏死因子(rhTNF)和重组干扰素αA(rhIFNaA)基因融合成编码单一蛋白的基因。融合基因在大肠杆菌表达后,活性检测证实,存在一旣具有TNF抗肿瘤、又具有IFN抗病毒双重活性的蛋白质。融合蛋白的活性较TNF和IFNαA分别低24倍和15倍。分子筛分析证实,融合蛋白分子量大于25kD。     

兔早期胚胎发育相关新基因IFRG的克隆和表达

近来的研究表明干扰素在哺乳动物早期胚胎发育中有重要的作用。我们首次克隆了兔早期胚胎发育相关新基因IFRG（干扰素应答基因）的全长cDNA序列（AJ584672）,根据该cDNA序列以兔卵巢cDNA为模板经PCR扩增后克隆了兔IFRG cDNA的完整开放阅读框(396bp)。将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上,在大肠杆菌BL21中进行了GST-IFRG融合蛋白的表达。 经IPTG诱导培养后,SDS-PAGE电泳检测结果显示在41kDa处有特异性表达蛋白,回收融合蛋白作为抗原免疫小鼠,制备多克隆抗体,通过Western杂交表明该融合蛋白具有生物免疫活性。     

地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因的克隆、烟草瞬时表达及转化拟南芥的研究

从地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)中克隆到耐高温α-淀粉酶基因全长,构建了原核表达载体,转入大肠杆菌(Escherichia coli)中,使用IPTG于28℃诱导6小时后,通过SDS-PAGE检测到目的蛋白,分子量约为55 kDa,并通过酶活力检测实验证明该蛋白具有耐高温α-淀粉酶活性。同时构建了该基因融合GFP的植物表达载体,通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导瞬时转化烟草(Nicotiana tabacun)下表皮细胞并在荧光显微镜下观察,发现在烟草下表皮细胞的细胞质和液泡中均有绿色荧光。使用I_2-KI溶液对乙醇脱色后的烟草叶片进行染色,显色反应表明在烟草中表达的耐高温α-淀粉酶具有酶活性。最后,采用农杆菌介导的花蕾浸泡法将重组载体转化到拟南芥(Arabidopsis thaliana)中,筛选到稳定遗传的耐高温α-淀粉酶基因的拟南芥纯合子。研究结果为后期开展表达耐高温α-淀粉酶的转基因植物的相关研究奠定了实验基础。     

转二色补血草LbDREB基因烟草耐盐胁迫能力分析

用盐胁迫处理转二色补血草DREB基因（LbDREB）的T_2代烟草和野生型烟草,测定各转基因及野生型烟草的多项与植物抗逆相关的生理指标以及抗逆相关基因的表达水平,结果显示过表达二色补血草LbDREB基因能提高盐胁迫下SOD活性和K~＋/Na~＋,减少MDA含量,并且还能调节抗逆相关的过氧化物酶基因（PODs）和脂质转移蛋白基因（LTD）的表达。表明LbDREB基因能增强植物的抗逆能力。     

烟草果胶甲基酯酶（PME）基因的克隆及功能分析(英)

为了研究果胶甲基酯酶（pectin methyl-esterase,PME）（EC 3.1.1.11）与植物病毒运动蛋白之间的相互作用,应用RT-PCR方法从烟草(Nicotiana benthamiana)中克隆了PME基因,并测定了全序列(GenBank登录号AY238968).序列分析显示该基因由两个保守的结构域组成(PMEI和pectinesterase). DNA印迹结果表明,该基因在基因组中存在多个拷贝,蛋白质印迹表明,植物总蛋白中存在两种形式的PME蛋白,但RNA印迹结果显示,在烟草细胞中只检测到全长的PME转录产物.酵母双杂交结果表明,PME与水稻矮缩病毒Pns11(具有非特异的核酸结合活性)之间存在相互作用,而没有检测到PME与已知的运动蛋白Pns6之间的相互作用,推测Pns11蛋白可能参与了水稻矮缩病毒粒子的运动.     

广东省农业生态学三十年发展概要

广东省农业生态学近三十年的发展过程可以大致以十年为一段分为:(1)为现代农业生态学发展的奠基阶段,(2)为农业可持续发展的探索阶段和(3)推动农业生态学长远发展的平台建设阶段。广东省生态学工作者在改革开放初期为我国农业生态学体系的建设、科研教学的人才培养和农业生态系统的科学研究奠定了坚实的基础。在上个世纪九十年代,我省农业生态学工作者积极参与广东省和全国的生态农业建设,组织了跨学科、跨单位的大规模农业可持续发展研究。跨入新世纪,我省农业生态学家不仅积极推动全国农业生态学有关组织的活动,而且通过重点学科和重点实验室的建设,为学科长远发展建立了高水平的硬件平台,通过活跃的重大项目研究把农业生态学研究逐步推向深入,系列农业生态学著作和教材的出版更为未来农业生态学的发展建立了丰厚的思想平台。     

不同空间尺度下的ALMANAC模型验证

ALMANAC模型最早作为EPIC模型的一部分,用于模拟土壤侵蚀导致的土地生产力的下降．它将试验数据的统计过程和作物生长的机理过程结合起来,是一种典型的基于过程模拟的应用型作物生长模型．如能在不同的空间尺度上验证模型的适用性,无疑会大大扩展模型的应用范围．从这一目的出发,利用美国得克萨斯州19个试验田和9个县的玉米和高粱产量资料及其相关的作物、土壤、田问管理等数据,模拟了1998年田间尺度,1989～1998年县级尺度的平均作物产量．模拟结果表明,ALMANAC模型能够很好地模拟两种不同空间尺度的作物产量,其相对误差在田问尺度上分别为8．9％(高粱)和9．4％(玉米),在县级尺度上分别达到2．6％(玉米)和—0．6％(高粱)．该模型在进行产量预测、掌握作物生长动态,指导农业生产管理和土地利用等方面具有很好的应用前景．     

Alginate/carbon composite beads for laccase and glucose oxidase encapsulation: application in biofuel cell technology

Alginate–carbon beads were prepared in order to develop a biocompatible matrix for laccase and glucose oxidase immobilization for application in biofuel cell technology. The enzyme loading capacity was high (91%) in pure alginate beads for glucose oxidase. For laccase, the loading capacity was enhanced from 75% to 83% by introducing carbon. Desorption out of the matrix was controlled by the enzymes’ diffusion and reached a plateau after 40 h for laccase and 70 h for glucose oxidase. Two-thirds of both enzymes was irreversibly retained inside the alginate beads. This proportion increased to 80% for laccase in combined alginate/carbon beads. Half-life of the adsorbed enzyme was enhanced to 74 days for laccase in carbon/alginate beads and 45 days for glucose oxidase in pure alginate as compared to 38 days and 23 days for free enzymes, respectively.     

胃癌神经内分泌细胞免疫细胞化学的研究

９６例胃癌应用铬粒素抗体免疫细胞化学法发现３８例（３９．６％）肿瘤含有神经内分泌细胞（ＮＥ细胞）;呈激素阳性者：血清素５例,生长抑素５例,胰多肽５例,胰高血糖素５例,胃泌素３例,ＡＣＴＨ６例。结果显示：ＮＥ细胞发现率及细胞数量在低分化癌中明显高于高、中分化癌;异位激素──ＡＣＴＨ阳性细胞数量在低分化癌也明显多于高、中分化癌;本位激素阳性细胞在ＮＥ细胞中的比例在非肿瘤性粘膜中明显高于癌组织,在原发肿瘤明显高于转移灶,在正常粘膜又明显高于癌旁粘膜。根据上述结果,对ＮＥ细胞的发现率、方法学及其激素产物进行了讨论。     

Circannual and Circa-Hemiannual Rhythms of Basal and Stimulated Gastric Secretion in Conscious Cats

Conscious cats equipped with a gastric fistula and a denervated Heidenhain pouch were submitted to weekly measurements of the basal and pentagastrin-stimulated gastric secretion for 1 to 14 years. Rhythms of basal secretion were documented in 37 cats for the group studies, in 25 cats only for the individual studies which required at least whole year data. Twelve-month or 6-month rhythms were detected for each variable studied, i.e. volume, acid, pepsin, fucose and uronic acid outputs in the group studies, with peaks for volume, acid and pepsin in Winter, peaks for uronic acid in Spring and Fall indicating different rhythms for oxyntic, chief and mucous cells. Individual studies detected rhythms in 25% of the analyses, and demonstrated male and female and cat to cat differences. Spectral analysis in 3 cats confirmed the differences in the individual rhythms with prominent peaks differing from 365 days in 50% of the cases. Chronopharmacological responses to pentagastrin were documented for volume, acid and pepsin outputs in 5 male and 6 female cats. Group analysis detected a Winter acrophase for volume and acid secretion and a Summer acrophase for pepsin secretion. Analysis of the stimulated response data showed interindividual variation but a higher percentage of detection for rhythms, i.e. 38% for all variables and 50% for pepsin secretion. Different rhythms in acid and pepsin secretion documented in individual studies could provide the basis of a better understanding of the discrepancies reported in the literature concerning the seasonal incidence of peptic ulcer disease.     

Circannual and Circa-Hemiannual Rhythms of Basal and Stimulated Gastric Secretion in Conscious Cats

Conscious cats equipped with a gastric fistula and a denervated Heidenhain pouch were submitted to weekly measurements of the basal and pentagastrin-stimulated gastric secretion for 1 to 14 years. Rhythms of basal secretion were documented in 37 cats for the group studies, in 25 cats only for the individual studies which required at least whole year data. Twelve-month or 6-month rhythms were detected for each variable studied, i.e. volume, acid, pepsin, fucose and uronic acid outputs in the group studies, with peaks for volume, acid and pepsin in Winter, peaks for uronic acid in Spring and Fall indicating different rhythms for oxyntic, chief and mucous cells. Individual studies detected rhythms in 25% of the analyses, and demonstrated male and female and cat to cat differences. Spectral analysis in 3 cats confirmed the differences in the individual rhythms with prominent peaks differing from 365 days in 50% of the cases. Chronopharmacological responses to pentagastrin were documented for volume, acid and pepsin outputs in 5 male and 6 female cats. Group analysis detected a Winter acrophase for volume and acid secretion and a Summer acrophase for pepsin secretion. Analysis of the stimulated response data showed interindividual variation but a higher percentage of detection for rhythms, i.e. 38% for all variables and 50% for pepsin secretion. Different rhythms in acid and pepsin secretion documented in individual studies could provide the basis of a better understanding of the discrepancies reported in the literature concerning the seasonal incidence of peptic ulcer disease.