一种新的人兽共患传染病——狐狸阴道加德纳氏菌病的研究——Ⅰ.病原菌分离与人工感染试验

于国内外首次报道采用改良兔血胰(月示)琼脂培养基,从狐体及其流产胎儿脏器中,分离得到阴道加德纳氏菌共145株。其中从流产胎儿脏器分离得到26株,分离率为92.86％。从流产空怀狐阴道分泌物中分离得到118株,分离率34.01％。从阳性取皮狐鼠蹊淋巴结分离得到1株,分离率2％。血液中未分离到本菌。通过对病原菌的分离,揭示了该菌在狐体内的存在部位,优选出最佳的分离途径、时机与方法。人工感染试验结果证实了本菌的致病性。     

一种新的人兽共患传染病—狐狸阴道加德纳氏病的研究

对国内主要狐场狐狸阴道加德纳氏菌病的流行病学调查表明,银黑狐、北极狐、赤狐及彩狐均对本病易感染,主要通过交配传染,病狐在本病流行中起主要作用。各狐场感染率为０．９－２１．９％,导致注率１．５－１４．７％,空怀率３．２－４７．５％,提示了本病的严重危害性。通过血清学和病原分离证实,本病可感染饲养管理人员,为人兽共患病,狐狸外,貉、水貂及犬也可感染。实验动物中小白鼠、小白鼠、地鼠、豚鼠和家兔对本病不感     

一种新的人兽共患传染病——狐狸阴道加德纳氏菌病的研究 Ⅲ.流行病学调查

对国内主要狐场狐狸阴道加德纳氏菌病的流行病学调查表明,银黑狐、北极狐、赤狐及彩狐均对本病易感染,主要通过交配传染,病狐在本病流行中起主要作用.各狐场感染率为0.9—21.9%,导致流产率1.5—14.7%,空怀率3.2—47.5%,揭示了本病的严重危害性.通过血清学和病原分离证实,本病可感染饲养管理人员,为人兽共患病.除狐狸外,貉、水貂及犬也可感染.实验动物中小白鼠、大白鼠、地鼠、豚鼠和家兔对本病不感染.     

一种新的人兽共患传染病——狐狸阴道加德纳氏菌病的研究 Ⅲ.流行病学调查

对国内主要狐场狐狸阴道加德纳氏菌病的流行病学调查表明,银黑狐、北极狐、赤狐及彩狐均对本病易感染,主要通过交配传染,病狐在本病流行中起主要作用.各狐场感染率为0.9—21.9%,导致流产率1.5—14.7%,空怀率3.2—47.5%,揭示了本病的严重危害性.通过血清学和病原分离证实,本病可感染饲养管理人员,为人兽共患病.除狐狸外,貉、水貂及犬也可感染.实验动物中小白鼠、大白鼠、地鼠、豚鼠和家兔对本病不感染.     

一种新的人兽共患传染病——狐狸阴道加德纳氏菌病的研究——Ⅱ.病原菌的鉴定

对从狐狸流产胎儿和阴道分泌物中分离得到的16株菌进行了细胞形态、细胞壁显微结构的观察和生化、对人血红细胞具溶血性、DNA的G+C含量等测定。根据它们细胞呈革兰氏阳性到可变,形态从球杆到杆状的多形态性,接触酶和氧化酶均阴性,葡萄糖的O/F测定为发酵产酸,主要产物有乙酸和乳酸等主要产物,归为阴道加德纳氏菌,但由于它们对营养要求不苛求,生长速度快和对氧要求低等,又不同于人体来源的加德纳氏菌。因此,将这群菌另定为一个亚种——阴道加德纳氏菌狐狸亚种(Gardnerella vaginalis subsp.fox)。模式株为U80。     

一种新的人兽共患传染病——狐狸阴道加德纳氏菌病的研究——Ⅱ.病原菌的鉴定

对从狐狸流产胎儿和阴道分泌物中分离得到的16株菌进行了细胞形态、细胞壁显微结构的观察和生化、对人血红细胞具溶血性、DNA的G+C含量等测定。根据它们细胞呈革兰氏阳性到可变,形态从球杆到杆状的多形态性,接触酶和氧化酶均阴性,葡萄糖的O/F测定为发酵产酸,主要产物有乙酸和乳酸等主要产物,归为阴道加德纳氏菌,但由于它们对营养要求不苛求,生长速度快和对氧要求低等,又不同于人体来源的加德纳氏菌。因此,将这群菌另定为一个亚种——阴道加德纳氏菌狐狸亚种(Gardnerella vaginalis subsp.fox)。模式株为U80。     

一种新的人兽共患传染病——狐阴道加德纳氏菌病的研究：V.狐阴道…

将我国６个省（区）、１３个主要狐场分离的１４５株狐阴道加德纳氏菌,进行抗原性、免疫原性测定,从每场分离菌中选出１￣３个优良株进行血清型研究。凝集素交叉吸收试验证实,选出的２６株菌可划分为３个血清型,以此３个血清型代表株制备因子血清,余下１１９株菌中,１０８株在所划分的３个血清型内,１１株未能定型。在３个血清型中,Ｉ型菌株数占定型菌数的７９．１％,因而确定,Ｉ型菌是国内狐场狐阴道加德纳氏菌主要流行型     

新的人兽共患传染病——狐狸阴道加德纳氏菌病的研究 Ⅳ.Dot-ELISA检测狐狸阴道加德纳氏菌病血清抗体的研究

应用建立的Dot-ELISA方法检测了192份狐狸阴道加德纳氏菌人工感染狐、疫苗免疫狐和菌检阳性狐血清,结果187/192呈阳性反应,检出率为97.3%. 阻断和交叉试验证实,本方法具有特异性.敏感度为平板凝集试验(PAT)的28.1倍,为微量凝集试验(MAT)的5.5倍.重复性良好,与PAT、MAT的阳性符合率为100%.     

一种新的人兽共患传染病——狐狸阴道加德纳氏菌病的研究：VI.阴道加德纳氏茵病灭活疫苗的研制

选用免疫原性优良的我国狐狸阴道加德纳氏菌主要流行型血清Ｉ型ＧＶＦ４４号菌株,先后试验研制了氢氧化铝胶、蜂胶和油佐剂灭活苗。试验结果表明,铝胶苗的安全性优,免疫剂量为４０亿菌／１ｍｌ,３倍免疫剂量的铝胶灭活苗接种狐狸后无任何不良反应,免疫后２１ｄ经１００个ＩＤ５０强毒的攻击,对Ｉ型的保护率达９２％,对Ⅱ、Ⅲ型的保护率达８０％以上。免疫持续期为６个月,４￣１０℃条件下可保存１０个月。通过田间试验应用证     

一种新的人兽共患传染病——狐狸阴道加德纳氏菌病的研究 Ⅵ.阴道加德纳氏菌病灭活疫苗的研制

选用免疫原性优良的我国狐狸阴道加德纳氏菌主要流行型血清Ⅰ型GVF44号菌株,先后试验研制了氢氧化铝胶、蜂胶和油佐剂灭活苗。试验结果表明,铝胶苗的安全性优,免疫剂量为40亿菌/1ml,3倍免疫剂量的铝胶灭活苗接种狐狸后无任何不良反应,免疫后21d经100个ID_(50)强毒的攻击,对Ⅰ型的保护率达92％。对Ⅱ、Ⅲ型的保护率达80％以上。免疫持续期为6个月,4～10℃条件下可保存10个月。通过田间试验应用证实该疫苗安全、有效。     

一种新的人兽共患传染病——狐狸阴道加德纳氏菌病的研究 Ⅵ.阴道加德纳氏菌病灭活疫苗的研制

选用免疫原性优良的我国狐狸阴道加德纳氏菌主要流行型血清Ⅰ型GVF44号菌株,先后试验研制了氢氧化铝胶、蜂胶和油佐剂灭活苗。试验结果表明,铝胶苗的安全性优,免疫剂量为40亿菌/1ml,3倍免疫剂量的铝胶灭活苗接种狐狸后无任何不良反应,免疫后21d经100个ID_(50)强毒的攻击,对Ⅰ型的保护率达92％。对Ⅱ、Ⅲ型的保护率达80％以上。免疫持续期为6个月,4～10℃条件下可保存10个月。通过田间试验应用证实该疫苗安全、有效。     

新的人兽共患传染病——狐狸阴道加德纳氏菌病的研究 Ⅳ.Dot-ELISA检测狐狸阴道加德纳氏菌病血清抗体的研究

应用建立的Dot-ELISA方法检测了192份狐狸阴道加德纳氏菌人工感染狐、疫苗免疫狐和菌检阳性狐血清,结果187/192呈阳性反应,检出率为97.3%. 阻断和交叉试验证实,本方法具有特异性.敏感度为平板凝集试验(PAT)的28.1倍,为微量凝集试验(MAT)的5.5倍.重复性良好,与PAT、MAT的阳性符合率为100%.     

一种新的人兽共患传染病——狐阴道加德纳氏菌病的研究 V.狐阴道加德纳氏菌菌株的血清分型研究

将我国6个省(区)、13个主要狐场分离的145株狐阴道加德纳氏菌,进行抗原性、免疫原性测定,从每场分离菌中选出1～3个优良株进行血清型研究。凝集素交叉吸收试验证实,选出的26株菌可划分为3个血清型,以此3个血清型代表株制备因子血清,余下119株菌中,108株在所划分的3个血清型内,11株未能定型。在3个血清型中,Ⅰ型菌株数占定型菌数的79.1％,因而确定,Ⅰ型菌是国内狐场狐阴道加德纳氏菌主要流行型。试验还明确了从貉分离的5株、水貂分离的4株、犬分离的2株阴道加德纳氏菌也属于血清Ⅰ型。将3个血清型代表菌株制成超声抗原,经免疫琼脂扩散试验证实,各型抗原与同型或异型免疫血清均可形成一条明显的融合沉淀线,表明各型菌间有共同抗原成分。同型菌免疫琼脂扩散试验表明,各株菌形成的沉淀线完全融合,从而证实了血清分型的可靠性。     

一种新的人兽共患传染病——狐阴道加德纳氏菌病的研究 V.狐阴道加德纳氏菌菌株的血清分型研究

将我国6个省(区)、13个主要狐场分离的145株狐阴道加德纳氏菌,进行抗原性、免疫原性测定,从每场分离菌中选出1～3个优良株进行血清型研究。凝集素交叉吸收试验证实,选出的26株菌可划分为3个血清型,以此3个血清型代表株制备因子血清,余下119株菌中,108株在所划分的3个血清型内,11株未能定型。在3个血清型中,Ⅰ型菌株数占定型菌数的79.1％,因而确定,Ⅰ型菌是国内狐场狐阴道加德纳氏菌主要流行型。试验还明确了从貉分离的5株、水貂分离的4株、犬分离的2株阴道加德纳氏菌也属于血清Ⅰ型。将3个血清型代表菌株制成超声抗原,经免疫琼脂扩散试验证实,各型抗原与同型或异型免疫血清均可形成一条明显的融合沉淀线,表明各型菌间有共同抗原成分。同型菌免疫琼脂扩散试验表明,各株菌形成的沉淀线完全融合,从而证实了血清分型的可靠性。     

中药安菌凝胶对狐狸阴道加德纳菌病的实验研究

通过对狐狸加德纳菌病（ＧＶＦ）阴道菌群分析、阴道光镜和电镜下组织学结构观察认定,ＧＶＦ与人类细菌性道病（ＢＶ）同属菌群失调所致,并以此为动物模型,采用黄芪、苦参、蛇床子、甘草四味中药以新型高分子材料卡波姆（Ｃａｒｂｏｍｅｒ）为赋形剂制成凝胶,对其进行体外抑菌实验和不同组方的疗效比较,结果显示：Ｂ组方中药制剂（安菌凝胶）治疗后的疗效最好,关在细胞水平上中药作为微生态调节剂的机制进行了初步探讨。     

溯本追源,关口布局,加强人兽共患传染病基础科学研究:“重大突发动物源性人兽共患病跨种感染与传播机制研究”项目获得国家重点研发计划资助

以中东呼吸综合征冠状病毒、西尼罗病毒、基孔肯雅病毒等为代表的人畜共患病病毒对全球公共卫生健康产生了巨大的威胁。由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所牵头、谭文杰研究员作为项目首席科学家的"重大突发动物源性人兽共患病跨种感染与传播机制研究"项目获得"十三五"国家重点研发计划"畜禽重大疫病防控与高效安全养殖综合技术研发"专项资助,将为从源头、传播、感染靶点三个层次有效阻断动物源性人兽共患病发生及疫病防控提供科学依据与技术支撑。