聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应和面包酵母转移核糖核酸的分离

对聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应作了研究。建立了电流密度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(CDGGE)。CDGGE不仅在电泳开始时,而且在电泳过程中对被分离的样品有压缩作用,从而提高了分辨率。作者用CDGGE法将面包酵母混合转移核糖核酸分成20条带,并对其中的一些带作了鉴定。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应和面包酵母转移核糖核酸的分离

对聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应作了研究。建立了电流密度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(CDGGE)。CDGGE 不仅在电泳开始时,而且在电泳过程中对被分离的样品有压缩作用,从而提高了分辨率。作者用CDGGE 法将面包酵母混合转移核糖核酸分成20条带,并对其中的一些带作了鉴定。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳的一种辅助辨型方法

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是实验室常用的基本鉴定方法之一.但由于做胶方式以及各实验室仪器设备良莠不齐,经过一系列纷繁复杂的操作,电泳结果未必尽如人意.其中凝胶带型的判断就是一个较为困惑的问题,一般的聚丙烯酰胺胶跑出的条带总体上都有弧度,越是靠近凝胶两侧越是严重.在本实验中,我们设计了一种较为简单易行的方案,即将难以区分的条带样品做成混合样marker来辅助辨型,通过调整电压和凝胶浓度来达到区分条带的目的.我们用该方案可以将相差0～3 bp大小的条带区分开来.     

用于双向凝胶电泳分析的奶牛乳清蛋白样品制备方法的比较

为建立适用于双向凝胶电泳分析的奶牛乳清蛋白的制备方法,分别比较了直接裂解法、三氯乙酸-丙酮法,Trizol法和2-D clean up kit法对奶牛乳清蛋白提取效率和双向凝胶电泳图谱的影响.用2-D Quant Kit试剂盒测定蛋白浓度,分别用十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳和双向凝胶电泳进行奶牛乳清蛋白的分离.蛋白定量结果表明,2-D clean up kit法产率最高,直接裂解法、三氯乙酸-丙酮法次之,trizol法产率最低;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,2- D clean up kit法提取的蛋白质量最高;双向电泳图谱分析表明,2-D clean up kit法得到的蛋白图谱与另外3种方法相比,检测到的蛋白点最多,图谱背景清晰,分辨率最高.结果提示,2-D clean-up法相对最适合于双向凝胶电泳分析奶牛乳清蛋白样品的制备,尤其对一些低丰度高分子量蛋白的分离效果较为明显.     

防止SDS-聚丙烯酰胺凝胶平板电泳中出现的异常现象

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳灵敏度高,分辨率高,广泛应用于医学,生物化学,分子生物学,免疫,遗传工程等方面.它要求有严谨的操作技术,在电泳过程中如某个环节掌握得不好,就很难得到理想的结果.下面介绍几年来我们在进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时常出现的一些异常现象以及预防的措施. 1.样品处理时,通常是用Ttis-HCI pH6.8的缓冲液,要使样品均一的进入分离胶,必须确保缓冲液有精     

沙冬青cDNA-AFLP银染和条带回收方法分析

通过比较而获得沙冬青cDNA-AFLP银染和条带回收的最佳方法.银染时采取Bassam法和Sanguinetti法,凝胶条带回收时利用直接回收法、试剂盒法、LiCl高盐法和聚丙烯酰胺凝胶高效回收法.比较不同方法对于开展聚丙烯酰胺凝胶电泳的影响.采用Bassam银染法对获得的扩增产物进行染色后无法得到差异显示条带,而利用Sanguinetti银染法显色后可观察到比较明显的差异表达条带;以直接回收法、PAGE试剂盒法、LiCl高盐法对差异条带进行回收后,二次PCR无法得到扩增产物,采用聚丙烯酰胺凝胶高效回收法后则可获得比较清晰的二次扩增产物.Sanguinetti银染法和聚丙烯酰胺凝胶高效回收法是应用于本研究的最佳方法.     

猪生长激素的提纯及其生物学活性和某些理化性质的研究

通过调pH抽提、硫酸铵分级分离和DEAE-纤维素柱层析等方法从猪垂体中提取了生长激素。平均产率约为0.5g生长激素/1000g鲜垂体。用去垂体大白鼠胫骨测定法测得共促生长效应为1.84。提取的生长激素在高pH不连续缓冲体系聚丙烯酰胺凝胶电泳时呈现两条带;Sephadex G75柱层析得到一个峰;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳呈现一条带,其分子量约为21,900道尔顿;聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳呈现五条带,主带在pH7.8处;DNS法测定其N-末端氨基酸为苯丙氨酸一种。此外,还测定了它的氨基酸组成。     

小麦叶片人工老化期间的蛋白水解酶活性变化(简报)

以放线菌酮处理小麦叶片老化后,蛋白水解酶活性上升受抑,以氯霉素处理叶片则无此作用。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）显示叶片老化期间有蛋白水解酶条带出现。     

用ConA-Sepharose 4B柱亲和层析分离猪脂肪细胞质膜上的糖蛋白

猪大网膜脂肪细胞的空泡,经非离子去垢剂Tritonx-100抽提,ConA-Sepharose AB 柱亲和层析后,分离得到4个糖蛋白,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,测得它们的表现分子量分别为74,000、79,000、88,000和>100,000。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析猪脂肪细胞质膜的蛋白组成,结果表明,猪脂肪细胞质膜上至少有20多个蛋白组分,其中至少有5个组分为糖蛋白。     

用ConA—Sepharose4B柱亲和层析分离猪脂肪细胞质膜上的糖蛋白

猪大网膜脂肪细胞的空泡,经非离子去垢剂Tritonx-100抽提,ConA-Sepharose 4B柱亲和层析后,分离得到4个糖蛋白,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,测得它们的表现分子量分别为74,000、79,000、88,000和>100,000。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析猪脂肪细胞质膜的蛋白组成,结果表明,猪脂肪细胞质膜上至少有20多个蛋白组分,其中至少有5个组分为糖蛋白。