两种NC膜条上马铃薯A病毒DAS-ELISA检测研究

基于双抗体夹心ELISA反应原理,在两种不同加工成形的硝酸纤维素膜条(NC strip)上进行了马铃薯A病毒(PVA)的检测研究,并以酶标板ELISA做参比。结果表明,在NC条-2(NC strip-2)上的检测灵敏度与酶标板ELISA相当,而反应试剂的用量仅为酶标板ELISA的百分之一;NC条-1(NC strip-1)由于加样点间易发生交叉污染而不适合进行ELISA检测。应用NC条-2可稳定进行PVA的ELISA检测,为进一步开展微流体斑点免疫检测研究奠定了基础。     

唐鱼卵黄蛋白原的ELISA检测方法的建立

目的探索建立唐鱼卵黄蛋白原的ELISA检测方法。方法以卵黄脂磷蛋白（Lv）抗血清为抗体,以纯化的Lv作为抗原建立间接酶联免疫吸附反应（ELISA）方法检测雄性唐鱼（Tanichthys albonubes）整体匀浆液中的卵黄蛋白原（Vtg）。结果利用ELISA方法测定了经17-β雌二醇（E2）和不同浓度DDTs暴露21 d诱导的雄鱼整体匀浆液中的Vtg含量,可以直接在1块或在不同的酶标板上准确地进行比较。经0.055 mg/mL E2诱导的雄鱼整体匀浆液中Vtg含量为4148.33μg/g;当暴露DDTs浓度为0.0275、0.0137和0.0067 mg/mL时,雄鱼整体匀浆液中Vtg含量分别为1109.43、911.16和1322.79μg/g,与丙酮溶剂对照组462.79μg/g比较差异存在显著性（P〈0.05）。结论建立了唐鱼卵黄蛋白原的ELISA检测方法 ,本方法的检测灵敏度为8.1 ng/mL,批内误差为8.59%,批间误差为6.28%,工作范围为3.26～209.25 ng/mL。在该范围内,标准曲线具有良好的线性和重复性。     

简易快速酶标免疫吸附试验

酶标免疫吸附试验(FLISA)具有敏感、准确等特点。国内通用的微量板法(Microplate)因受到仪器及器材限制,影响一步推广。为此,作者建立一个简易快速酶标免疫吸附试验方法(SR—ELISA)。本法不用分光光度计,不用微量板,不用终止反应。作者用此法测定了肝吸虫病人抗体,为了观察其敏感性及准确性,在测定时间使用了微量板 ELISA及琼脂扩散 ELISA(DIG—ELISA)进行了对比。结果说明 SR—ELISA 与微量板 ELISA 及 DIG—ELISA 具有相同的敏感性,但在操作上更为简易,可在4小     

木香倍半萜对血管内皮细胞生长因子的抑制作用

对ELISA法测定人血管内皮细胞生长因子(human VEGF)的检测条件进行研究,考察了酶标板种类、一抗包被时间、紫外辐照等对酶联免疫反应的影响,优化了检测条件:可采用广州洁特公司生产的酶标板替代进口Costar酶标板,一抗包被时间24 h,一抗包被前紫外辐照30 min可明显提高酶标板对包被抗体的亲和力.利用优化的检测条件测定了木香挥发油、土木香挥发油、木香主要单体成分脱氢木香内酯(dehydrocostus lactone,1)和木香烯内酯(costunolide,2)对人肺腺癌A549细胞分泌VEGF的抑制作用,同时以MTT法测定药物对A549肿瘤细胞生长的抑制作用.结果表明,木香挥发油、土木香挥发油、脱氢木香内酯和木香烯内酯在不影响细胞增殖的浓度范围内,可明显抑制A549细胞分泌VEGF.     

共价连接的多肽酶联免疫测定法的研究

采用紫外线照射及戊二醛活化处理聚苯乙烯酶标板后再包被八肽胆囊收缩素（CCK-8）,以此为基础进行酶联免疫吸附试验（ELISA）,通过不同的洗涤过程对CCK-8与酶标板相互作用的性质进行研究.结果表明,该包被方法可使CCK-8通过共价交联的方式稳定地结合于固相载体上,该方法适用于不同来源的酶标板,处理后的酶标板性质稳定,可储存使用,测定的批内及批间变异系数分别为4.75%和7.80%,方法稳定可靠,重复性好,便于推广应用.     

HIV Gag CAP2NC噬菌体蛋白酶切割模型的构建

HIV蛋白酶(protease,PR)耐药突变的大量出现严重地影响了AIDS的治疗.应用突变PR对展示HIVPR靶序列随机文库的噬菌体进行切割筛选,可获得突变PR的敏感噬菌体,该噬菌体可用于针对HIVPR耐药突变株的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)新药筛选.为了探索这一可能性,将包含HIVPR靶位点P2/NC序列的Gag蛋白CAP2NC片段展示于噬菌体表面,并在该片段的N端连接一可与人免疫球蛋白分子特异结合的固相化标签序列LD3,将该噬菌体固定于人免疫球蛋白包被的酶标板上,用HIVSF2PR进行切割,用抗M13噬菌体酶标抗体ELISA法检测未被切割的剩余噬菌体以反映切割效果.结果表明,所构建的噬菌体能被HIVPR有效切割,最大切割效应可达80%以上,其ELISA检测值明显下降,并且该切割效应与HIVPR呈明显的量效关系,能被PI类药物Indinavir(IDV)特异抑制.首次成功构建了展示HIV Gag CAP2NC片段的噬菌体蛋白酶切割模型,不仅可为研究HIVPR的耐药性变异及其靶序列的适应性变异提供一新的研究平台,同时也为构建一种全新的PI类药物,尤其是针对耐药的PI类药物大规模体外噬菌体筛选模型打下基础.     

定量检测猕猴血清中重组人源化抗狂犬病毒单克隆抗体间接ELISA法的建立

目的：建立定量检测血清中重组人源化抗狂犬病毒单克隆抗体（HuMabs）NM57的间接ELISA法,为药代动力学研究提供一种简单快速的方法。方法：采用狂犬病毒糖蛋白包被酶标板、HRP标记的IgG-Fc段为标记抗体,建立定量检测HuMabsNM57的间接ELISA法,并对其特异性、灵敏度、精密度及准确度进行检测。结果：间接ELISA法检测HuMabsNM57的灵敏度为5ng／mL,组内及组间精密度分别为2．6％-6．0％、8．5％-11．3％。结论：建立了灵敏度高、特异性强的检测HuMabs NM57的间接ELISA法,精密度及准确度均符合药代动力学要求,可用于猕猴及人血清中HuMabsNM57的检测。     

黄曲霉毒素B_1抗独特型抗体的制备和应用研究II.抗独特型抗体应用

以抗独特型抗体(anti-idiotypeantibody,Ab2)的酶切片段Fab2替代黄曲霉毒素B1(AFB1)建立一种不需要使用AFB1的无毒酶联免疫吸附(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA)试剂盒,研究该试剂盒特异性、稳定性和AFB1的加标回收,并将该试剂盒用于农产品和饲料中AFB1的检测。结果表明,该试剂盒具有和常规ELISA试剂盒一样的特异性和加标回收能力,无毒试剂盒和常规试剂盒一样都可以用于农产品和饲料中AFB1的检测,并且两种试剂盒的检测结果并无显著差异,无毒ELISA试剂盒在适当处理后,40C放置3个月和-200C放置5个月,以间接非竞争ELISA测定的吸光值分别是起始时的85%和87%。     

兔抗金黄地鼠酶标抗体的制备及应用

目的 纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测.方法 采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG,用SDS- PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab2);用免疫双扩散法检测抗血清效价后,再用亲和层析纯化抗血清IgG( Ab2);采用改良过碘酸钠标记法制备兔抗金黄地鼠酶标抗体( rabbit anti-hamster IgG-HRP);用直接ELISA和Western-blot法对兔抗金黄地鼠IgG酶标抗体进行工作浓度测定;应用金黄地鼠酶标抗体对金黄地鼠仙台病毒进行酶免检测(IEA).结果 金黄地鼠血清IgG纯度达95％;兔抗金黄地鼠IgG抗体(Ab2)免疫双扩散效价为1(:)64;兔抗金黄地鼠IgG -HRP经直接ELISA和Western-Blot测定工作浓度分别为1∶5000和1∶2000;酶免(IEA)效价为1:2000.结论 高效快速纯化了金黄地鼠IgG,制备了金黄地鼠IgG-HRP,为金黄地鼠病原微生物的血清学检测提供了条件.     

黄曲霉毒素B1抗独特型抗体的制备和应用研究Ⅱ.抗独特型抗体应用

以抗独特型抗体(anti-idiotype antibody,Ab2)的酶切片段Fab2替代黄曲霉毒素B1(AFB1)建立一种不需要使用AFB1的无毒酶联免疫吸附(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)试剂盒,研究该试剂盒特异性、稳定性和AFB,的加标回收,并将该试剂盒用于农产品和饲料中AFB1的检测。结果表明,该试剂盒具有和常规ELISA试剂盒一样的特异性和加标回收能力,无毒试剂盒和常规试剂盒一样都可以用于农产品和饲料中AFB1的检测,并且两种试剂盒的检测结果并无显著差异,无毒ELISA试剂盒在适当处理后,4℃放置3个月和-20℃放置5个月,以间接非竞争ELISA测定的吸光值分别是起始时的85％和87％。     

音乐治疗效应的动物实验研究

近年来国内外关于音乐治疗效应的动物实验研究认为：音乐能影响动物的情绪;音乐还对动物的免疫功能、学习及记忆能力、以及动物的神经系统结构和功能等均有一定影响。该领域的研究有利于深入探索音乐疗法的作用机理。     

热带气旋对红树林的影响研究进展——基于文献计量分析

红树林在防风消浪、促淤保滩、固岸护堤等方面发挥重要的作用,是抵御台风、风暴潮、海岸侵蚀等自然灾害的重要天然屏障。热带气旋是红树林面临的最主要自然威胁之一,削弱了红树林对自然灾害的抵御及生物多性维持等功能发挥。然而,尽管热带气旋对红树林的影响日益受到全球的广泛关注,但缺乏对该领域研究进展的系统分析和总结。以Web of science核心集数据库为数据源,利用CiteSpace软件对1995—2021年间热带气旋对红树林影响研究进行文献计量分析和可视化图谱绘制,以厘清该领域研究的现状、趋势和热点,并揭示未来的发展方向。研究表明：（1）该领域研究年发文量随时间处于波动上升的趋势,尤其2013年后迅速增加,表明该领域的研究日益受到重视;（2）美国、澳大利亚和印度等国家在该领域的研究走在前列,美国的中介中心性最高,其次是德国,美国广泛地与德国、法国、日本等许多国家有密切合作;（3）美国佛罗里达、加勒比地区、澳大利亚北部和印度南部等是当前研究的热点区域;（4）研究热点随时间推移而不断发展,从红树林植被的干扰损害逐渐发展到固碳储碳、海岸防护等功能的影响。全球变化背景下热带气旋对红树林的影响、红树林对热带气旋干扰的弹性、基于遥感和大数据处理的模型模拟等日益受到关注,量化热带气旋对红树林功能的影响、探明热带气旋与海平面上升的关系及对红树林影响、构建完善的观测体系数据集等将是未来研究的重要方向。研究对长期关于热带气旋对红树林影响的研究进展进行定量和可视化分析,可为预测热带气旋对红树林的影响和风险、及减缓和应对其风险等研究提供借鉴参考。     

复杂疾病关联研究中的若干问题

关联研究广泛应用于阐述心血管疾病、2型糖尿病、原发性高血压和肥胖等人类复杂疾病的遗传学基础。文中就关联研究中混杂的识别与控制、候选基因的选择、中间表型的应用、单体型分析方法的应用,以及结果的判定等问题进行了讨论。人群分层是关联研究混杂的主要来源之一。选择患者亲属做对照、基因组对照和选择遗传背景较为一致的隔离人群都可以减少混杂。候选基因的选择可以基于与疾病间的生物学联系或是该基因与疾病某已知相关基因的同源性。适当的应用中间表型和单体型分析方法可以增加关联研究有意义发现的机会。本文认为,优化研究设计、足够的样本含量、正确选择对照,结合先进的数据分析方法,关联研究必将为困扰人类的常见疾病的易感性研究发挥更大的作用。     

壳聚糖固定化木瓜蛋白酶的研究

以自制的壳聚糖作为载体,用戊二醛作交联剂,优化了固定化条件,研制成壳聚糖固定化木瓜蛋白酶。其活性回收率达到42—53％,操作半衰期达到一个月以上,对热、乙醇以及尿素的稳定性有很大的提高,Km值为0.67×10~2mg/mL,最适温度65—70℃,最适pH8.0,能使啤酒中的蛋白质浓度从56.5mg/L减少到2.7mg/L,可以消除啤酒的低温混浊现象。     

基于Web of Science的国际应用生态学研究进展

应用生态学是自然资源管理和生态环境保护最重要的科学技术工具之一.在当前自然资源短缺、环境污染严重、生态系统退化的严峻形势下,对国际应用生态学的理论基础、研究方法、研究热点进行分析,对夯实我国应用生态学的知识基础、指明研究方向、确定战略定位具有重要意义.本文基于文献计量学原理,借助CiteSpace、Carrot²等信息可视化软件,以Web of Science中1980—2018年国际应用生态学研究领域基于不同检索策略的两个文献数据集合为研究对象,从研究载体、研究力量及研究内容3个维度进行文献时空分布、核心研究力量、研究热点演进以及研究前沿及趋势分析,旨在揭示其学科发展轨迹、研究现状与发展趋势,以期为未来我国的应用生态学研究提供参考.     

蚕丝固定化脂肪酶的研究

研究了蚕丝固定化脂肪酶的工艺条件,并考察了固定化脂肪酶的稳定性。试验结果表明：蚕丝与对-β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)进行反应的最适条件是PH=10．8,SESA：2．0g／g蚕丝,反应生成的对氨基苯磺酰乙基蚕丝(ABSE-蚕丝)经重氮化后与脂肪酶偶联的最适条件是：pH=7．5,偶联时间>10h。加酶量为168～308u／g蚕丝时,所得固定化脂肪酶活力为106～160u√g蚕丝．此时固定化冀的活力回收率较高(>52％)。固定化脂肪酶稳定性较高．其操作半衰期约为250h。