木霉GXC产β—葡聚糖条件和酶学性质

研究了木霉GXC产β－葡聚糖糖的条件,结果表明,最适产酶碳源的麸皮,氮源为硫酸铵,产酶的最适条件为,初始pH为4.0-5.0,30℃培养44h,粗酶液经硫酸铵沉淀,SephadexG-25,Sephadx G-100和DEAE－Sephadex A-50柱层析得到纯β－葡聚糖酶,SDS－PAGE凝胶电泳显示－条带,测得分子量为35kD,该酶最适反应pH5.0,最适反应温度为60℃,在40℃以下,pH4.0-5.0酶活力相对稳定,5.0mmol/L以下的Ca^2 ,Zn^2 和Fe2 ,以及10.0mmol/L以下的Co^2 对酶活力有激活作用,而Cu^2 和Fe^ 具有抑制作用。     

基于pH调控的环β-1,2-葡聚糖合成及结构鉴定

目的:研究pH调控对发酵法生产环β-1,2-葡聚糖的影响,并对pH调控条件下所产环葡聚糖的结构进行解析。方法:以根瘤菌ATCC 1333为研究对象,进行pH调控与不调控的发酵过程分析,并结合乙醇分级沉淀对pH调控后的发酵液中多糖进行分离提纯,经Superose 12层析纯化,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-MS)、单糖组成分析、电喷雾串联质谱(electrospray ionization mass spectrometry,ESI-MS),傅里叶红外光谱(fourier transform infrared spectoscopy,FTIR),核磁共振nuclear magnetic resonance,NMR)手段对葡聚糖进行结构鉴定。结果:提出两阶段pH调控发酵策略,生长期pH控制为7.0,产糖期pH控制为5.5,与自然发酵模式相比,环葡聚糖产量增加了52%,细胞浓度增加了102%,并且发酵颜色不再发生褐化现象,更有利于后续环葡聚糖的分离纯化。并确定pH调控对根瘤菌ATCC 1333发酵生产的葡聚糖的结构并无影响,合成的环葡聚糖是以葡萄糖为单体,通过β-1,2糖苷键连接的环葡聚糖,聚合度从17~22,以19为主的环状葡聚糖,无支链结构。结论:pH调控对于发酵生产环β-1,2-葡聚糖的结构无影响,为环β-1,2-葡聚糖的发酵工艺研究提供理论基础,也为研究β-1,2-葡聚糖提供可靠的糖源。     

内切β-1,3-葡聚糖酶产生菌的分离筛选与鉴定

以茯苓多糖为碳源,以蓝色茯苓多糖为内切β－1,3－葡聚糖酶活力测定底物,从不同样品中筛选到4株产内切β－1,3－葡聚糖酶活力较高的菌株,经TLC分析酶解产物表明其中三株的酶解产物主要为二糖、三糖、四糖,另外一株的酶解产物主要为二糖。对其中一株内切酶活力最高（3．73U2/ml）的菌株经鉴定为生孢噬胞菌（Sporocytophaga)。     

木霉GXC产β-葡聚糖酶条件和酶学性质

研究了木霉GXC产β-葡聚糖酶的条件.结果表明,最适产酶碳源为麸皮,氮源为硫酸铵;产酶的最适条件为初始pH为4.0～5.0,30℃培养44h.粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-25、Sephadex G-100和DEAE-Sehadex A-50柱层析得到纯β-葡聚糖酶,SDS-PAGE凝胶电泳显示一条带,测得分子量为35kD.该酶最适反应pH5.0,最适反应温度为60℃,在40℃以下、pH4.0～5.0酶活力相对稳定.5.0mmol/L以下的Ca2+、Zn2+和Fe2+,以及10.0mmol/L以下的Co2+对酶活力有激活作用;而Cu2+和Fe3+具有抑制作用.     

β—葡聚糖酶的分离纯化和特性研究

对里木霉所产β－葡聚糖酶粗酶液通过饱和硫酸铵沉淀、Sephadex G-100柱层析和DEAE－Sephadex A-50柱层析进行纯化,比活提高14．60倍,活力回收6．62％。酶特性研究表明,最适温度和pH分别为60℃和5．0,在pH低于5．0时酶较稳定,酶的热稳定性在60℃以下。Cu^2 、Mn^2 、Mg^2 、Fe^3 和K^ 对酶有抑制作用,Zn^2 、Ca^2 、Co^2 和Fe^2 有激活作用。     

高相对分子质量裂褶多糖的制备与结构鉴定

以裂褶菌（Schizophyllum commune）发酵生产的培养物为研究对象,经过活性炭脱色、Sevag法脱杂蛋白、乙醇沉淀得粗多糖,再经Sephadex G-200柱层析分离纯化得裂褶多糖纯品.通过Sephadex G-200凝胶层析法测得其平均分子质量为436kDa;由气相色谱、红外光谱、高碘酸氧化、Smith降解、^13C核磁共振等方法表征其化学结构,推测其结构为具有（1→6）分支的β-〔1-3）-D-葡聚糖：其组成重复单元应该含有3个主链糖基和一个单糖分支,主链的取代发生在C-1和C-3之间,即为1→3糖苷键;分支发生在C-1和C-6之间,即为1→6糖苷键,其中分支点在主链糖基的C-6上.     

黑曲霉纤维素酶的化学组成

本文测定的黑曲霉纤维素酶各组分均为糖蛋白,但含糖量和组成各不相同,含糖量分别为：β－葡萄糖苷酶１１．３％,内切β－葡聚糖酶１１．８％,β－葡聚糖纤维二糖水解酶ＣＢＨ—１７．２％、ＣＢＨ－Ⅱ５．８％。各酶组分的氨基酸组成有一定的差异,但也有一些共同之处,即都含有较多的酸性氨基酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）,碱性氨基酸（Ｈｉｓ、Ａｒｇ）含量较低。分析酶组分间的相似性时发现,β－葡聚精纤维二糖水解酶的ＣＢＨ－Ⅰ组分与内切β－葡聚糖酶在各种氨基酸的含量上较为相似,而同属于β－葡聚糖纤维二糖水解酶的两个组分ＣＢＨⅠ和ＣＢＨ—Ⅱ在氨基酸的含量上有一定的差异。     

用酸碱法从而包酵母中提取β——（1——3）——D葡聚糖

研究了用酸－碱法制备水不溶性葡聚糖的工艺。０．７５ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ在１００℃作用２ｈ,能有效地去除甘露聚糖,０．５ｍｏｌ／Ｌ的酸使不溶性的葡聚糖的比粘度增加,除去糖元,分析表明,产品为β－Ｄ－葡聚糖,其中β－（１－３）－Ｄ－葡聚糖约为８７％。     

兰州百合糖蛋白LGP-2的提取纯化及结构表征研究

以兰州百合为原料,采用PBS缓冲溶液提取兰州百合糖蛋白,经Sephadex G-200和DEAE-Cellulose 52柱层析纯化得到2个组分:LGP-1和LGP-2。以LGP-2为研究对象,对其进行结构表征研究。傅里叶红外光谱表现出糖和蛋白质的特征吸收峰,糖链中存在吡喃糖构型和β-糖苷键;体积排阻色谱测定其重均分子量为9.311×10~4;β-消去反应结果则说明LGP-2含有O-连接的糖肽键;圆二色性光谱结果表明其主链二级结构以β-折叠为主。     

环状β-(1,2)-葡聚糖的提纯与鉴定*

三叶草根瘤菌H954在GMS培养基上 2 8℃培养 8d后 ,发酵液用无水乙醇分步沉淀法抽提 ,经过SephadexG 50、SephadexG 1 0、DEAE 纤维素柱层析纯化 ,并用气相色谱 (GC)、^{1 3}C 核磁共振(NMR)和质谱分析 ,证明该菌产生环状 β( 1 ,2 ) 葡聚糖 ,该糖是一种以葡萄糖为单体 ,通过 β ( 1 ,2 ) 葡聚糖苷健连接而成的环状分子 ,且绝大部分为中性糖 ,聚合度从 1 7到 2 2 ,其中以 1 9为主 ,分子量为 30     

甘薯凝集素的提取及性质研究

抗蔓割病甘薯的叶片组织浸取液,经硫酸铵分级沉淀,甲壳素柱层析及葡聚糖凝胶过滤得到一种在PAGE或SDS－PAGE上均呈现单一蛋白带的甘薯凝集素。该凝集素没有血型专一性及被测动物红细胞专一性,其凝集活性可被N－乙酰葡萄糖胺或岩藻糖所抑制。甘薯凝集素在75℃加热10min,即丧失全部凝集活性,其凝集活性依赖于Ca^2 和Mg^2 ,Mn^2 则无作用。经Sephadex G-100和SDS－PAGE测定,凝集素相对分子质量为63000,中性糖含量为6.21%,该凝集素对蔓割病菌有抑制作用,是一种酸性糖蛋白。     

一株红孢囊藻(Rhodosorus sp.SCSIO-45730)总糖和β-葡聚糖的积累特性研究

红孢囊藻(Rhodosorus sp.)可以积累高含量多糖,在医药保健和生物能源领域具有潜在开发价值。为进一步评估红孢囊藻(Rhodosorus sp.)产业化潜力,研究了一株红孢囊藻SCSIO-45730在盐度不同的4种培养基中生长及总糖和β-葡聚糖积累特性,结果表明:改良的ASW培养基相对于其他培养基(f/2、Conway和Erdschreiber)更有利于红孢囊藻SCSIO-45730生物量和总糖的积累。以ASW培养基为基础培养基,研究该藻盐度适应性,结果显示:该藻可在18‰-58‰盐度范围内正常生长,随着盐度增加,藻细胞体积逐渐增大且出现聚团现象;在盐度为38‰时,获得最大生物量、总糖含量和产率以及β-葡聚糖产率,分别为13.70 g/L、48.52%DW、412.58 mg/L·d和119.70 mg/L·d,β-葡聚糖含量随着盐度增加而降低;该藻在户外平板光生物反应器中总糖和β-葡聚糖单位体积产量分别为0.73 g/L和0.23 g/L。结果表明,红孢囊藻SCSIO-45730具有较广的盐度适应性、高产总糖和β-葡聚糖潜力,是生产生物乙醇和β-葡聚糖的理想原料。     

裂褶菌胞内多糖的分离纯化鉴定及其性质

裂褶菌菌丝体用热水提取,乙醇沉淀,Sevag法脱蛋白,逆向流水透析,得胞内多糖粗品,经Sephadex A-50、Sephadex G-200柱层析纯化,得胞内多糖纯品,称SPG。纯度经纸层析、Sephadex G-200柱层析、高效液相色谱分析、聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,结果表明SPG为单一均匀组分。 SPG水解物经纸层析、薄层层析分析证实它是由葡萄糖组成的一种葡聚糖结构,SPG的部分水解、酶解、红外光谱、核磁共振氢谱分析表明具有β(1→3),β(1→6)糖苷键。凝胶过滤法测定SPG的分子量约为10万。     

黑曲霉纤维素酶系中内切β-葡聚糖酶的分离纯化

使用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤色谱及DEAE-Sephadex A-25(A-50)离子交换色谱等分离技术,从黑曲霉(Aspergillus niger)培养液中分离到7种内切β-葡聚糖酶组分,分别称为Ⅰ-2a、Ⅰ-2b、Ⅰ-2c、Ⅰ-2d,Ⅱa、Ⅱb和Ⅲa。经凝胶电泳鉴定均为单一带。     

附子多糖FⅠ的分离纯化及部分理化性质研究

白附片经热水抽提、Sevag法脱蛋白、乙醇沉淀、DEAE-C32柱层析分离,再通过Sephadex G-200柱层析进一步纯化,得到一种纯白色粉末状多糖,糖含量为97%,平均分子量为2.6×105,熔点为270℃.经完全酸水解、薄层层析、红外光谱分析,证明为葡聚糖.     

沙质微泡菌β-1,3(4)-葡聚糖酶的克隆表达及酶学性质

【背景】β-葡聚糖是自然界中广泛存在的非淀粉多糖,是谷类植物细胞壁的主要成分。β-葡聚糖酶能够水解β-葡聚糖生成低聚合度的寡糖,在食品、饲料、造纸等领域发挥着重要的作用。【目的】从海洋细菌沙质微泡菌(Microbulbifer arenaceous)中克隆到一个β-1,3(4)-葡聚糖酶基因,在大肠杆菌中可溶表达,研究其相关酶学性质。【方法】以沙质微泡菌(Microbulbifer arenaceous)基因组DNA为模板,克隆一个β-1,3(4)-葡聚糖酶基因(MaGlu16A),构建重组表达载体p ET-28a-MaGlu16A并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析纯化后进行酶学性质研究。【结果】MaGlu16A的最适pH和最适温度分别为pH 6.0和40°C,在pH 5.0-10.5和35°C以下稳定。对EDTA具有较高的抵抗性,在1 mmol/L和10 mmol/L EDTA浓度下仍保持99.3%和82.5%的酶活力。该酶能够有效水解可得然多糖、昆布多糖、大麦葡聚糖、地衣多糖、燕麦葡聚糖和酵母葡聚糖,水解产物主要为葡萄糖、二糖、三糖和四糖。【结论】海...     

快速筛选产β—葡聚糖酶曲霉及抗阻遏育种

采用改良琼脂块鉴定平板法进行产β-葡聚糖酶曲霉的快速筛选。其中温度、初始pH、平板厚度及去氧胆酸钠的浓度都影响曲霉产β－葡聚糖酶分解底物所形成水解圈大小及透明度。同时研究发现,高浓度的葡萄糖对曲霉合成β－葡聚糖酶具有阻遏作用,通过改变分离培养基的葡萄糖浓度,结合诱变育种可以快速筛选到抗葡萄糖阻遏的高产β－葡聚糖酶的菌株。     

番茄感染TMV诱导的β—1,3—葡聚糖酶的纯化和性质

番茄系统感染ＴＭＶ诱导叶胞外β－１,３－葡聚糖酶活性升高,番茄叶胞外提取液经冰冻干燥浓缩、－２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析和ＰＢＥ９４聚焦层析纯化,获得ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均一的β－１,３－葡聚糖酶,测得该酶的分子量为２２ｋＤ;以昆布多糖为底物,该酶的最适ｐＨ５．４,最适温度３０－４０℃;Ｋｍｔ Ｖｍａｘ值分别为５．６４ｍｇ／ｍｌ和０．３２８ｎｍｏｌ／ｓ。在感染     

超声提取的麦冬多糖POJ-U1b的结构分析及AFM观测

本文利用超声提取麦冬多糖,经DEAE-52纤维素柱层析进行分离纯化,利用Sephadex G-150凝胶柱层析对得到的多糖组分POJ-U1b进行纯度鉴定,结果显示POJ-U1b为单一组分。利用气相色谱法、红外光谱法及核磁共振对POJ-U1b的结构进行了研究,利用原子力显微镜对不同浓度的POJ-U1b表面形貌进行了观测。结果显示,麦冬多糖POJ-U1b是由葡萄糖组成的葡聚糖,具有糖类物质的特征吸收峰,其糖环构型既有吡喃型又有呋喃型,糖链主要由→6)-α-D-Glcp(1→连接方式构成。AFM观测结果表明POJ-U1b具有高度分支的化学结构,糖链间通过糖单元间不同的链接方式衍生出许多环状和分支结构。随着多糖浓度的增大,POJ-U1b呈现出链状及片状粘连结构,这种现象可能与糖链间的范德瓦尔斯相互作用及糖链间氢键缔合有关。     

附子多糖FI的分离纯化及部分理化性质研究

白附片经热水抽提、Sevag法脱蛋白、乙醇沉淀、DEAE- C32柱层析分离 ,再通过 Sephadex G- 2 0 0柱层析进一步纯化 ,得到一种纯白色粉末状多糖 ,糖含量为 97% ,平均分子量为 2 .6× 10 5,熔点为 2 70℃。经完全酸水解、薄层层析、红外光谱分析 ,证明为葡聚糖。