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1.
构建了3种来源于水稻、人和啤酒酵母的线粒体tRNA^Trp基因。实验表明这些线粒体tRNA^Trp的体外转录产物具有被枯草杆菌色氨酰-tRNA合成酶(TrpRS)氨酰化的能力,但是不能被鼠肝来源的氨酰tRNA合成酶粗酶所催化。动力学资源常数测定表明枯草杆菌TrpRS对线粒体tRNA^Trp的亲和力为野生型tRNA^Trp的一半,而在催化效率上,水稻和啤酒酵母线粒体tRNA^Trp的色氨酰化能力比野 相似文献
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为研究tRNATrp 与色氨酰tRNA合成酶(TrpRS) 的相互识别及其结构、功能关系, 纯化了枯草杆菌TrpRS并用溴化氰活化的Sepharose 4B 将TrpRS固定化, 固定化TrpRS的蛋白质回收率为95 .5 % , 活力回收率为31.3% 。研究了固定化TrpRS的酶学性质, 其热稳定性和贮存稳定性方面均比液相TrpRS有了较大的提高, 最适温度、最适pH 均有一定程度的增大, 工作稳定性良好。以固定化TrpRS为亲和层析介质, 对含有20 个核苷酸随机序列、长度为56 个核苷酸的单链RNA 随机库进行了3 轮筛选,RNA 群体亲和固定化TrpRS的比例从4 .3 % 上升至14 .7 % 。筛选得到了与tRNATrp 氨基酸接受茎类似的RNA二级结构。实验结果表明固定化TrpRS可以作为SELEX 亲和层析介质, 进行模拟tRNATrp 分子的RNA 随机库的SELEX 筛选。 相似文献
3.
为研究tRNA^Trp与色氨酰-tRNA合成酶(TrpRS)的相互识别及其结构、功能关系,纯化了枯草杆菌TrpRS并用溴化氰活化的Sepharose4B将TrpRS固定化,固定化TrpRS的蛋白质回收率为为95.5%,活力回收率为31.3%。研究了固定化TrpRS的酶学性质。其热稳定性和贮存稳定性方面均比液相TrpRS有了较大的提高,最适温度、最适pH均有一定程度的增大,工作稳定性良好。以固定化T 相似文献
4.
色氨酰tRNA合成酶(TrpRS)在蛋白质合成系统中具有非常重要的地位。通过蛋白质同源模建得到了枯草杆菌(Bacillus subtilis)色氨酰tRNA合成酶的三维结构。研究表明合成酶的二级结构含有16个α螺旋和5个β折叠,唯一的色氨酸Trp^92位于两个亚基的界面上。模建结果对配基结合位点和活性位点以及可能与tRNA^Trp结合的方式也给出了预测。 相似文献
5.
人酪氨酰tRNA合成酶(TyrRS)在蛋白质合成时能催化酪氨酸共价结合到相应的tRNA分子上。新近美国Scripps研究所的Wakasugi和Schimmel证明,TyrRS能被断裂成两种具有不同细胞因子活性的片段,从而揭示了TyrRS的新功能[1]。人TyrRS在正常情况下存在胞浆里,不能分泌到胞外,但能从凋亡细胞里释放出来,保持完整长度。胞外弹性蛋白酶能激活人TyrRS使之断裂成两个片段:C末端片段或C末端结构域和N末端片段或催化N末端结构域(小TyrRS)。羧端结构域与人内皮单核细胞活化多肽II(EMA… 相似文献
6.
tRNA个性研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
tRNA参与蛋白质生物合成中至关重要的两个功能上相连的生物化学事件。一种是由氨基酰-tRNA合成酶(aaRS)催化的tR-NA的氨基酰化(tRNA的个性),通过aaRS对tRNA的序列和结构元件的专一识别和氨基酰化,使tRNA转化为氨基酰tRNA。另... 相似文献
7.
采用高表达大肠杆菌tRNALeu菌株提取、纯化了亮氨酸等受体转移核糖核酸tRNALeu1和tRNALeu2.利用稳态动力学手段研究了tRNALeu1及脱镁tRNALeu1在不同稀土离子作用下与纯化亮氨酰-tRNA合成酶的氨酰化作用.tRNALeu1与亮氨酰-tRNA合成酶的结合及催化效率均受参与稀土离子的影响,表观Km值有较明显的变化.结果表明,亮氨酰-tRNA合成酶催化的tRNALeu1氨酰化反应所需Mg2+能够被稀土离子取代,但亲合性能不同. 相似文献
8.
识别位碱基G73,为tRNA^Trp的主要个性元件之一,tDNA^Trp-NCCrA的氨酰化活力测定及圆二色谱均表明在相同的pH条件下,识别位碱基的改变将影响到tRNA3′端的构象,而具有同一识别位碱基的tDNA^Trp在不同pH条件下,亦显示出不同的构象及氨酰化活力,tDNA^Trp的研究表明,是tRNA的构象而不是碱基本身决定了tRNA与其相应合成酶之间的精确识别。 相似文献
9.
tRNA在相应的氨酰合成酶(以下简称合成酶)的催化作用下与其对应的氨基酸发生特异性连接是保证蛋白质正确翻译的首要前提。这种特异性主要是由tRNA上的一个或几个非连续的碱基或碱基对所组成的个性元件(identityelement)决定的。这些个性元件是... 相似文献
10.
精胺对牛肝tRNA^lle氨基酰化的刺激作用 总被引:3,自引:0,他引:3
本实验用纯化的牛肝异亮氨酸tRNA(tRNA^Ile)和异亮氨酰tRNA合成酶,研究了精胺对Ile-tRNA复合物形成及IleRS活性的作用。结果表明:精胺能特异地促使牛肝tRNA^Ile氨基酰化反应;对IleRS活性无影响;能明显地增加形成Ile-tRNA复合物反应的Vmax和tRNA^Ile的Km值。 相似文献
11.
利用荧光光谱方法研究了红花菜豆凝集素(Phaseoluscoccineusvar.rubronanuslectin,简称PCL),结果表明PCL分子各亚基中的两个色氨酸(Trp)残基分别位于PCL分子表面和分子内。标记了DNS的PCL荧光偏振研究指出,致使PCL在10mmol/LSDS条件下失活的主要原因可能是亚基解离。荧光偏振研究还表明,甲状腺球蛋白、甘露聚糖、海参多糖硫酸酯可与PCL结合。荧光探针bis-ANS与PCL的结合可引起明显的荧光增强和发射谱蓝移,表明PCL分子中存有疏水区域。结合了的bis-ANS还可和PCL中的Trp发生能量传递。 相似文献
12.
核蛋白体上有3个tRNA的结合位点,A位、P位和E位。蛋白质合成过程中,核蛋白体移位,脱氨酰tRNA只从P位点移到E位点,而不脱落,只有当A位点与新的氨酰tRNA结合后,脱氨酰tRNA才与E位点脱离。如果错误的氨酰tRNA进入A位,则结合不稳定,就会脱落下来,这样保证蛋白质合成的准确性。 相似文献
13.
编码大肠杆菌(E.coli)精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)的基因(argS)和编码亮氨酰-tRNA合成酶(LeuRS)的基因(LeuS)分别插入pUC18后,各自在E.coli TG1转化子中的表达有很大的差异(高表达倍数分别为1000和35倍)。为了调查造成其表达差异的原因,用argS的5'上游非编码区取代leuS的5'上游非编码区,构建了融合基因parg-leuS;将它插入质粒pUC18 相似文献
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一个高效表达,快速纯化大肠杆菌精氨酰—tRNA合成酶的 … 总被引:1,自引:0,他引:1
编码大肠杆菌精氨酸-tRNA合成酶的基因argS被克隆到pMFT7-5载体上。将此质粒转化的大肠 力JM109(DE3)中,该转化子粗抽液的比活是宿主菌的2500倍。通过DEAE-Sepharose CL-6B FastFlow和BlueSepharose CL-6B两步柱层析在一天内即可将精氨酰-tRNA合成酶纯化至电泳一条带,比活为36000u/mg,总收率可达69%。 相似文献
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膜上tRNA结合蛋白的分离与初步鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
用TritonX-114分相法分离啤酒酵母的膜总蛋白,经过酵母tRNA分子交联的Sepharose4B亲和层析,用0-0.8mol/L(NH402SO4梯度缓冲液洗脱tRNA结合的蛋白质。凝胶阻滞电泳实验室鉴定出两种主要的与tRNA分子特异性结合的蛋白质。 相似文献
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大肠杆菌精氨酰—tRNA合成酶的Lys306为酶活力所必需 总被引:2,自引:2,他引:0
将大肠杆菌精氨酰tRNA合成酶(ArgRS)上Lys306用基因点突变的方法分别变为Ala和Arg的密码子,得到变种基因args306KA和args306KR。变种基因重组在pUC18上,转化到大肠杆菌TG1中,转化子中ArgRS及其变种ArgRS306KA和ArgRS306KR所表达的蛋白量生活为TG1表达ArgRS蛋白量的100倍。细胞粗抽提液中ArgRS的比活TG1,转化子pUC18-arg 相似文献
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大肠杆菌精氨酰—tRNA合成酶变种ArgRS381KA的基本性质 总被引:1,自引:1,他引:0
本文研究了Ly381变为Ala的精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)变种ArgRS381KA的最适pH和稳态动力学性质;比较了此酶与天然酶ArgRS的荧光光谱性质和热稳定性。实验结果表明ArgRS381KA的氨酰化活力和ATP ̄PPi交换活力的最适pH分别为8.0和7.0,与天然酶相同;ArgRS381KA的氨酰化活力对精氨酸、ATP和tRNA^Arg的Km分别为12μmol/L、0.3mmol/ 相似文献
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大肠杆菌亮氨酰—tRNA合成酶基因表达和酶的纯化 总被引:2,自引:0,他引:2
在克隆含大肠杆菌氨酰-tRNA合成酶基因的3.2kbDNA片段,并leuS在大肠杆菌和中高表达提高35倍的基础上leuS改造,分别将两处不同长度的leuS1和leuS2分别构建在表达载体PKK-233-2和pTrc-99B中,其中leuS1比leuS2多一段130bp的3非翻译区。构建在表达载体pTrc-99B中的基因片段leu32可将酶的表达量提高135倍,经DEAE-Sepharose和HA- 相似文献
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用点突变的方法将大肠杆菌精氨酰—tRNA合成酶(ArgRS)的基因args上相应于Lys378和Lys381的密码AAA分别变为两氨酸的密码GCA和精氨酸的密码子CGT,得到了4个args的突变体args378KA,args378KR,args381KA和args381KR,将它们分别连接到pUC18上,转入大肠杆菌TG1,在TG1转化子中,ArgRS及其变种的表达量约为TG1中的120倍以上。结果表明Lys378为Arg和Ala取代分别使活力下降0%和10%;Lys381变为Ala和Arg后,活力分别下降33%和10%左右。Lys378不为酶活力必需。Lys381部位的正电荷对酶活力是重要的。 相似文献
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RNA在翻译中的功能关键词RNA,翻译mRNA翻译为蛋白质需要氨酰tRNA与mRNA上的相应密码子相互作用。密码子和反密码子间的Watson-Crick碱基配对的稳定性不足以保证有效、准确的解码,而要有核糖体的帮助。这种功能是由核糖体蛋白还是核糖体R... 相似文献