不同年龄小鼠精原干细胞系的建立

精原干细胞（spennatogonial stem cells,SSCs）是雄性动物体内能进行终生自我更新并能将亲代基因遗传给予子代的一类细胞。不同年龄段的小鼠有不同的建系方法。6-7d幼鼠,可以用差异贴壁或直接贴壁法;5-6周成年鼠,一般采用差异贴壁法;31周老年鼠,最好种于饲养层细胞上。通过对精原干细胞系的甲基化和特异基因分析以及睾丸体内移植验证分析,成功建立了具有功能的不同年龄段的小鼠精原干细胞系。     

生产人抗体用小鼠开发合同延期

日本eisai公司与美国GenPlarm International公司(加利福尼亚州Mountain View)公司更新利用重组小鼠(HuMab小鼠)继续开发人抗体的合同。 HuMab小鼠是用一种剔除实验技术破坏小鼠抗体基因而导人人抗体基因的重组小鼠。一旦给这种小鼠注射抗原,就可激活小鼠的免疫系统,产生与抗原结合的特异性抗体。但是与普通小鼠不同,用HuMab小鼠诱导的抗体是人化抗体分子。利用HuMab小鼠有可能开发出用普通免疫法不能得到的与人抗原结合的     

条纹原海豚mtDNA控制区序列变异分析

条纹原海豚( Stenella coeruleualba )是一种暖水性的小型鲸类,在50°N～40°S之间有分布,在其分布区内的许多水域,均受到渔业误捕或直接捕捞的影响(Jefferson et al .,1993).但由于缺乏该物种全面而系统的种群生物学知识,IUCN红皮目录将其保护生物学地位定为"不清楚"(Hilton-Taylor,2000),需要进一步开展保护生物学研究.     

美国成功培养小鼠精原干细胞

美国宾夕法尼亚州大学兽医学院通过改进培养介质成功地在实验室中培养了小鼠的精源干细胞，并将这种细胞移植给不育小鼠，结果这些受体小鼠不但能够产生精子，而且产生了具有捐献小鼠遗传特征的后代。该研究成果发表在Proceedingc 0f the National Academy 0f Sciences网络版上。     

白春礼等首次观察到新的DNA变异结构

1990年11月20日凌晨4时,中国科学院化学研究所,青年科学家白春礼领导的实验室,用自己研制的扫描隧道显微镜在世界上首次清晰地观察到变性噬菌体DNA的一种新结构——三链辫状缠绕结构。这一发现大大拓宽了人类对DNA这种重要遗传物质的认识。 1986年,首先研制成功扫描隧道显微镜的科学家获得了诺贝尔物理奖。3年后,美国科学家第一次用这种显微镜观察到了DNA的双螺旋结构,开创了人类直观地看到遗传物质的真实形貌的新纪元。白春礼等人的发现更显示了扫描隧道显微镜,在对包括生命科学在     

批准新的工程化作物试验

美国环保局(EPA)准许American Cyanamid进行以粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)、烟芽夜蛾(Heliothisvirescens)及其它为害虫作物的蠋类害虫为目标的遗传工程生物杀虫剂的田间试验。据称,此经遗传改良的生物杀虫剂(一种棒状病毒)可加速某些昆虫的死亡,而且此病毒的杀虫特性得到了改良。第一种耐除草剂玉米,即AgrEvo USA公司的产品,已得到美国农业部(USDA)的批准。同样获得批准的还有Monsanto公司     

人工合成甘蓝型油菜特长角变异系的选育

用中国西藏东部采集的1个白菜型油菜地方品种与云南甘蓝类蔬菜白花芥蓝远缘杂交,人工合成了甘蓝型油菜新材料,从杂种后代中通过系统选育,获得了1个特长角变异系,其主花序中部角果平均长度20cm左右,果身长16～18cm,果喙长3cm左右.从中获得的极端最长角果达31.5cm,果身长26.1cm,果喙长5.4cm.这是迄今芸苔属植物中很少见到的长角果油菜材料.该材料的平均角果长度大约为普通甘蓝型油菜的3倍左右,遗传已基本稳定,定名为川农特长角.本文报导其选育经过和主要特征特性,并对其育种和研究利用价值作了简要分析.     

小鼠胚胎干细胞建系技术研究进展

目前,对小鼠胚胎干细胞的研究较为深入,并已成为研究细胞分化及信号转导、新基因发现及功能鉴定、器官发生、人类疾病和药物开发等的有效手段。胚胎干细胞建系是一项基础性工作。虽然技术日趋成熟,有些品系小鼠的胚胎干细胞建系已是常规技术,但不同品系小鼠胚胎干细胞的建系效率仍有很大差异,建系途径和方法各有特点,一个品系胚胎干细胞的建系方法不一定都适用于其他品系。本文从小鼠胚胎干细胞建系的途径、分离操作技术、培养体系等方面进行综述,并就与之相关的有些问题提出思考和对策。     

《自然-通讯》:新的测序技术发现银屑病新的非编码变异

<正>新一代测序技术发现银屑病非编码变异。安徽医科大学皮肤病研究所张学军银屑病研究团队,联合复旦大学皮肤病研究所、深圳华大基因研究院、香港中文大学等科研单位,首次利用银屑病大规模全外显子测序发现疾病易感基因非编码变异。该研究的另一个科学意义在于,此前通过外显子测序技术发现编码变异在疾病发病过程中起着重要的作用,但这些看似没有意义的非编码变异,可能形成特殊的DNA结构,以此对附近功能基因的调节具有重要意义。世界著名学术期刊《自然-通讯》在线发表了这一新     

用组织培养筛选耐盐变异体

美国Colorado州立大学Nabors等人从烟叶栽培种的悬浮培养细胞,筛选出耐0.88％NaCl的细胞系,分化出再生植株,经有性繁殖两代仍显示对NaCl具有抗性。Purdue大学的Hasegawa等及以色列Hebrew大学的Watad等亦分别获得栽培种烟叶耐1.0—1.16％NaCl的细胞系,Lerner去年报道悬浮培养的烟草细胞耐盐能力高达500mmol/L,但均未获得再生植株。上海植生所经六年试验,亦采用逐步增加NaCl浓度方法,获得烟叶“革新一号”耐2.0％NaCl的愈伤组织变异体,并且获得再生植株。变异体     

用小鼠生产人类胶原蛋白

Collagen Corporation公司已申请了一个在转基因动物奶中生产重组人类胶原蛋白的世界专利(WO94/16750,PCT)。GenPharm公司附属的欧洲子公司Gene Pharming Europe已与Collagen Corporation公司签定合同,生产出在其动物乳腺中表达人胶原蛋白并在其乳汁里分泌人胶原蛋白的转基因小鼠。目前,Collagen Corporation公司已投资160多万美元给GenPharm,以扩大其合同协议,使转基因奶牛奶液产生的人胶原蛋白商品化。这项投资有助于GenPharm公司在1994年期间提高资本800多万美元。     

澳大利亚开发新的植物遗传工程技术

澳大利亚联邦科学和工业研究组织(CSIRO)开发了一种新的植物遗传工程技术,这将使澳大利亚的羊毛生产在10年内提高20～30％。 CSIRO的研究内容是将豌豆的基因转入烟草。研究小组给自己制定的任务是培育一种牧草,例如苜蓿或地三叶草,其叶象豌豆叶一样含有富含硫的蛋白质。从研究中发现羊吃了含硫量高的氨基酸后能生产更多的羊毛,但羊吃下的许多含硫产物都因瘤胃中的细菌作用而损失了。氨基酸通过瘤胃并在真胃中消化掉。研究工作的首要一步是应用转移基因的方法将豌豆蛋白质基因转入烟草,在烟草的籽粒中得到表达。这就使科学家确信分离到了基因,并对重要的DNA调控因子进行了操作,这     

Monsanto开发新的植物抗虫性途径

Monsanto Co.(St.Louis,MO)发现了一种新的可使植物具备抗虫性的途径,即经遗传工程使植物表达胆甾醇(CO)基因。 CO技术为Monsanto提供了一种利用苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素蛋白防治害虫的替代性方法。称CO可保护植物免受棉象虫和棉铃虫等害虫为害的Monsanto正积极地寻求美国和欧洲对此技术的专利保护。 Monsanto在Mycogen Corp.(San Diego,CA)囊括在植物中使用杀虫Bt基因的美国专利后仅一     

应用蛋白工程开发新的筛选法

蛋白工程研究所(PERI)第4研究部金谷茂则等运用蛋白工程开发了高效率筛选因置换氨基酸残基而提高耐热性的大肠杆菌RNaseHI的方法,12月17日在福冈市召开的日本分子生物学会上发表这项研究。这种方法是高效率地选拔出提高了耐热性的衍生物,有可能大大加快与结构活性有关的研究。用聚合酶链反应法改变氨基酸残基的方法已普及。现在日本很多研究室又都计划在天然蛋白质的氨基酸序列中导入变异基因,利用蛋白工程了解其活性。但是要找出具有目的特性的导入变异蛋白,不得不测定所有衍生物活性,而花费大量劳力。金谷等的方法会逐渐得到适应。温度感受性依附于RNaseH的大肠杆菌MIC3001株是第一种办法。这种菌株如不用野生型大肠杆菌RNaseHI的表达载体转化,在42℃下不能生长。所以首先用含定位诱变低稳定性变异RNaseHI的表达载     

体内精原干细胞转染法建立转基因小鼠

将人Bcl-2 cDNA与小鼠乳清酸蛋白(WAP)5’上游调控序列融合后,与脂质体按一定比例混合,再加入适量的台盼蓝制成转染液,注入到小鼠睾丸中的曲细精管中,转染精原干细胞以探讨建立转基因小鼠的可行性。共注射了3只公鼠,4天后将公鼠与发情母鼠合笼交配。共生仔鼠20只。检测结果表明,有3只呈PCR阳性,Southern blot检测,阳性鼠2只,1只公鼠,1只母鼠,其中,公鼠意外死亡;Western blot证实,1只母鼠的乳腺组织表达了Bcl-2蛋白,其F1代的16只小鼠中。有7只呈PCR阳性。证实了体内精原干细胞转染建立转基因动物的可行性。     

体内精原干细胞转染法建立转基因小鼠

将人Bcl-2 cDNA与小鼠乳清酸蛋白(WAP)5’上游调控序列融合后,与脂质体按一定比例混合,再加入适量的台盼蓝制成转染液,注入到小鼠睾丸中的曲细精管中,转染精原干细胞以探讨建立转基因小鼠的可行性。共注射了3只公鼠,4天后将公鼠与发情母鼠合笼交配,共生仔鼠20只。检测结果表明,有3只呈PCR阳性,Southern blot检测,阳性鼠2只,1只公鼠,1只母鼠,其中,公鼠意外死亡;Western blot证实,1只母鼠的乳腺组织表达了Bcl-2蛋白,其F1代的16只小鼠中,有7只呈PCR阳性。证实了体内精原干细胞转染建立转基因动物的可行性。     

小鼠精原干细胞与胚胎干细胞样细胞

近年来,通过培养小鼠精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)获得了胚胎干细胞样细胞(,embryonic stem cell-like cells,ES样细胞).这些研究表明小鼠精原干细胞不仅具备特异分化为精子的干细胞潜能,而且具备胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)分化为三胚层的多向分化潜能.因此.这将有助于研究干细胞的分化调控机制,并且这些研究成果延伸至人类精原干细胞,也将为再生医学获取特殊的胚胎干细胞样细胞或特异分化的精子细胞开辟了蹊径.     

免疫磁珠纯化小鼠精原干细胞的研究

精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSCs）富集纯化是利用SSCs进行基因修饰新方法等研究的前提基础。采用免疫磁珠分选法,使用干细胞抗体CD90.2进行小鼠SSCs的纯化富集,并采用流式细胞分析法和定量PCR验证了磁珠分选效率。流式细胞分析结果：免疫磁珠分选后SSCs纯度为50.11%。荧光定量PCR检测结果：磁珠分选后支持细胞特异表达基因 GATA4 显著下调（6倍）、SSCs表达基因 GFRα-1 上调（6.5倍）、生殖干细胞特异表达基因 OCT4 极显著上调（5.9倍）,3个基因相对表达量的变化说明,免疫磁珠分选效率为6倍。流式细胞分析法所产生的偏差可能是受到了未解离磁珠及SSCs本身转基因荧光的影响。     

小鼠精原干细胞冻存后体外培养

目的:研究冷冻后精原干细胞体外培养时的生物学行为.方法:体外培养冻存后的6日龄小鼠生精上皮细胞,并利用碱性磷酸酶活性及细胞形态,检测其中的精原干细胞.结果:当有BRL饲养层时,冻存后的精原细胞在贴壁、存活及增殖等生物学行为方面与新分离的精原细胞均无明显不同.培养25～30 d,培养体系中仍保留有少量精原干细胞及其最初几代分化细胞.结论:冷冻保存后的精原干细胞能在BRL细胞饲养层上正常地贴壁、生长和分裂.