激肽释放酶—激肽系统

新近的研究证明,激肽释放酶-激肽系统(Kallikrein-kinin系统,简称K-K系统)是机体的一个重要的体液调节系统。它参与循环、血液凝固、水盐代谢、免疫活动以及许多器官的功能。特别是肾脏的激肽释放酶-激肽系统,构成与肾素-血管紧张素的平行系统。虽然早在20年代就知道了激肽的存在,但直到最近十多年来,这个系统才引起人们的广泛注意。随着研究的深入,愈来愈显示出激肽释放酶-激肽系统在生化、生理、病理、药理和临床上的重要性。激肽释放酶-激肽系统包含激肽释放酶和激肽两个基本成份,可区分为血浆激肽释放酶-激肽系统和     

激肽系统活性产物

随着研究的不断深入,发现激肽释放酶-激肽系统参与了机体众多的生物学过程,除了对机体心血管系统、凝血系统、纤溶系统和肾功能等正常生理过程的调节作用外,在高血压、炎症、疼痛、血管生成、细胞增殖、凋亡和肿瘤发生等诸多的病理生理过程中也陆续发现有着不可替代的作用。有关激肽释放酶等上游活性物质的生理功能报道较多,本文从人激肽释放酶-激肽系统开始,重点对下游活性产物缓激肽、活性高分子量激肽原等在生理及病理过程中的作用和调节作一综述。     

血管肽酶C及其心血管生物学

血管肽酶C（Angiotenase C,Ang C）是一种脯氨酰羧基肽酶（prolylcarboxypeptidase,PRCP）能水解血管紧张素II,III分别生成血管紧张素1-7,2-7,也可以通过激活高分子激肽原和前激肽释放酶参与缓激肽的释放。许多临床研究和基础实验证实血管肽酶C涉及到先兆子痫、类风湿性关节炎和高血压的病理生理过程,并具有保护心血管的作用。     

舒缓激肽体系的生理生化特性及其临床意义

舒缓激肽是属于多肽类的组织激素,在各种动物体内起着很重要的生理作用。它能使毛细血管舒张和通透性增加,从而导致血压降低;又能使离体平滑肌收缩;还能致痛。因而在烧伤、炎症、水肿和休克等病理过程中起着重要的作用。在生物体内除舒缓激肽外,尚有各种与其性质类似的物质,统称为激肽(kinin)。它们系由激肽原(kininogen)经激肽释放酶(kallikrein)降解后产生。     

浙江蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)毒激肽释放酶Ⅰ酶解产物激肽的鉴定

至今已知的蛇毒激肽释放酶作用于激肽原后都释放舒缓激肽,仅食鱼蝮(Agkistrodon piscivorus piscivorus)蛇毒激肽释放酶既释放舒缓激肽,又释放胰激肽(Iwanaga,1979)。今对浙江蝮蛇毒激肽释放酶Ⅰ作用于激肽原后的产物作了鉴定,证实也是舒缓激肽。因此蝮蛇毒激肽释放酶不同于哺乳动物的组织激肽释放酶,后者释放胰激肽(Fiedler,1979)。     

组织激肽释放酶相关肽酶的作用和治疗潜力的研究进展

组织激肽释放酶家族由15种分泌型丝氨酸蛋白酶组成,是由人类基因组中最大的蛋白酶基因簇编码。在过去10年间,关于激肽释放酶的底物、内源性抑制剂以及在体内功能方面的研究已取得巨大进步。研究表明,这些蛋白酶在不同组织中具有病理生理学作用,并且目前认为激肽释放酶是研发气道、心血管、牙齿、皮肤和肿瘤疾病新型药物的潜在靶点。因此,阐述激肽释放酶生理功能和病理意义方面认识的新进展,并了解鉴定激肽释放酶抑制剂中的进步,有助于我们在特定疾病环境下更好地靶向激肽释放酶。     

蛇毒类激肽释放酶的研究进展

蛇毒丝氨酸蛋白酶是蛇毒中一类丰富的蛋白水解酶,具有重要的临床应用价值。其中一种丝氨酸蛋白酶一类激肽释放酶,作用于激肽原释放激肽,引起血管舒张,改善微循环,从而逐渐受到关注。对蛇毒中类激肽释放酶的分布、分离制备、生化性质、结构研究和药效研究等方面进行了综述,同时指出了目前存在的问题及今后的发展方向,以期为进一步的基础研究提供理论基础。     

心房肽存在一种负反馈内分泌环路调节

注射药理剂量精氨酸加压素(AVP)和其相关肽以及其他加压物质,能使心房肽免疫活性物质(APir)释放入血,这种心房肽(AP)受激释放与动脉压增加有关。非加压性的加压素类似物1-脱氨-D-AVP(dDAVP)和AVP 合并使用特异性加压拮抗剂都不能使AP 释放入血。生理水平的AVP,抑制利尿并使血管收缩,其药理剂量则刺激心脏内分泌系统释放AP,AP 可导致利尿和血管舒张,拮抗加压素的生理效应。     

组织型激肽释放酶及相关肽酶在中枢神经系统中的作用

组织型激肽释放酶1(kallikrein1,KLK1)和激肽释放酶相关肽酶(kallikrein-related peptidase 2～15,KLK2～15)是一类丝氨酸蛋白酶,具有广泛的生物学活性。在中枢神经系统中,它们不但在脑的生长、发育和学习记忆等方面起重要作用,同时也在多种脑部疾病中起重要作用,如帕金森病、痴呆、多发性硬化、肿瘤等,并在这些疾病的诊断、治疗和预后方面显示出潜在的应用价值。     

人组织激肽释放酶成熟蛋白在大肠杆菌中的高效表达

将编码人组织激肽释放酶成熟蛋白的基因片段扩增并分别克隆到原核表达载体pET2 8(b)及分泌型表达载体pET2 0 (b)中 ,使其C端融合 6×HisTag序列 .转化不同受体菌 ,IPTG诱导表达后利用SDS PAGE、免疫印记等方法对重组蛋白进行分析 .在 6株基因工程菌株中 ,均表达出分子量约30kD的激肽释放酶融合蛋白 ,其中激肽释放酶在pET2 8载体中的表达水平高于pET2 0载体 .pET2 8和pET2 0载体表达的重组激肽释放酶蛋白分别占菌体总蛋白约 2 6 %和 10 % .Western印迹分析表明 ,目的蛋白可与抗人血清KK单克隆抗体发生特异性反应 .未经纯化的激肽释放酶融合蛋白具有一定的水解苯甲酰精胺酸乙酯 (BAEE)的能力 .在大肠杆菌中获得了人组织激肽释放酶的高效表达 ,表达产物具有免疫原性和生物活力 ,这为研究其生物功能和开发基因工程药物奠定基础     

人组织激肽释放酶基因在哺乳动物细胞中的表达

克隆人胰腺组织激肽释放酶基因 (hKK) ,构建融合荧光蛋白基因的真核表达载体 ,在CHO细胞中表达 ,为开发激肽释放酶基因工程产品以及开展基因治疗高血压研究奠定了基础。提取人胰腺组织总RNA后 ,RT PCR扩增KK ,构建中间载体KSKK。从KSKK中切出激肽释放酶基因 ,插入真核表达载体pEGFP C2 ,构建出激肽释放酶带有荧光蛋白报告基因的表达载体pEGC KK ,测序分析后转染CHO细胞 ,荧光显微镜观察激肽释放酶基因表达。并进行SDS PAGE及Westernblot分析。成功克隆激肽释放酶基因 ,并在CHO细胞获得表达 ,克隆的人组织激肽释放酶基因可用于激肽释放酶基因工程产品开发以及基因治疗研究。     

浙江蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒激肽释放酶Ⅰ的分离纯化及其性质的研究

浙江产蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒中含有激肽释放酶,不需活化即可水解激肽原,释放激肽,并具有较弱的精氨酸酯酶的活力。粗毒经DEAE纤维素(DE-22,DE-52)和Sephadex G-75分离纯化后,可得到两个激肽释放酶的组分:Ⅰ与Ⅱ,二者电泳行为与酶活力有所不同,激肽释放酶Ⅰ在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈一条带,而组分Ⅱ中还杂有少量组分Ⅰ。激肽释放酶Ⅰ为一糖蛋白,含糖量20.3%,约由221个氨基酸残基组成,凝胶过滤和SDS电泳测定其分子量分别为31,000和30,000。此酶具有严格的底物专一性,能作用于激肽释放肽的专一底物Z-Phe-Arg-MCA及Bz-Pro-Phe-Arg-PA,不作用于一般蛋白质底物酪蛋白,对TAME的水解速度仅是对BAEE的14%。以BAEE为底物时,其最适pH为8～9,K_m值为2.85×10~(-4)M。本文测定了不同pH和不同温度下酶的稳定性,pH低于5或大于9,温度在40℃以上,酶活力迅速下降。其精氨酸酯酶及激肽释放酶的活力均能被丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF和DFP所抑制,两者呈平行关系,但都不被胰蛋白酶的专一抑制剂TLCK所抑制,慈菇抑制剂与大豆(Kunitz)抑制剂对此酶有部分抑制作用。经磷酸纤维素等阳离子交换树脂层析或交联的慈菇抑制剂Sepharose-4B亲合层析也能提纯激肽释放酶Ⅰ,但提纯后精氨酸酯酶活力下降,激肽释放活力几乎全部丧失。经圆二色光谱测定表明,酶的构象已发生改变。     

BK通道功能性复合体的研究进展

离子通道可以与其他蛋白质耦合形成稳定的大分子复合物,以确保信号转导的效率和准确性。大电导、钙离子激活的钾离子通道(BK通道)的核心是由形成孔区的α亚基组成的四聚体,它具有BK通道的基本生理功能。在不同的组织内,BKα可以与不同的辅助性亚基结合,使通道功能变得复杂多样。BK通道可以将细胞兴奋性与细胞内的钙离子信号联接在一起,在血流、泌尿、免疫、神经递质释放等许多生命过程中发挥着重要的调节作用。近年来,大量的研究工作表明,BK通道可以与钙离子通道、细胞骨架蛋白、蛋白激酶等生物大分子形成功能性复合物,这对通道功能调控和信号转导等生命活动具有重要的生理意义。本文综述了这些BK通道功能复合体的主要分类、功能特性以及生理学意义,并对其未来的研究前景进行展望。     

肺循环调节的研究进展

近年来的研究表明,肺血管除接受交感、副交感神经支配外,还接受肽能神经支配,其末梢释放血管活性肠肽(ViP),当其兴奋时,可使肺血管舒张.此外,肺血管壁本身具有一套主动的自身调节系统.体内某些活性物质如乙酰胆碱、舒缓激肽等舒张肺血管作用是通过肺血管内皮细胞释放内皮细胞舒张因子(EDRF)而实现的.血栓素A_2(TXA_2)和前列腺环素(PGI_2)是花生四烯酸的代谢产物.前者可使肺血管收缩,后者可使肺血管舒张.二者间的平衡,对调节肺血管紧张性有重要作用.     

eNOS基因多态性与原发性高血压相关性的研究进展

EH是一类由多基因和环境因素共同影响导致的复杂遗传性疾病,遗传因素对血压变化的影响占30%-50%.自1992年JeuneMaitre等首次报道血管紧张素原(angiotensinogen,AGT)基因多态性与EH相关,开创了EH基因多态性关联研究的先列.在众多的EH候选基因中,围绕肾素-血管紧张素-醛固酮系统、交感神经系统、下丘脑-垂体轴、内皮素、利钠肽、激肽释放酶-激肽系统等至少150种EH候选基因进行了广泛研究[1].在众多候选基因中内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)基因由于对血压调节的重要作用而倍受重视.现就eNOS基因多态性与EH的相关性做一综述.     

昆虫激肽的生理功能及机制

昆虫激肽是一类高度保守的小分子神经活性物质,自其从马德拉蟑螂脑中分离得到至今,人们在多种无脊椎动物体内均发现了这一激肽家族成员。它们具有促进昆虫后肠收缩、马氏管扭动、原尿分泌,调节血淋巴量和水盐平衡,使马氏管跨膜电位去极化,抑制昆虫体内消化酶释放、幼虫体重增长等功能。然而,天然的昆虫激肽很容易被蛋白酶所降解,因此须对其进行结构改造及构效关系研究,以开发出更有潜力的假肽和非肽模拟抗酶解昆虫激肽类似物,对今后实现环境友好型害虫防治策略具有重要意义。     

血浆激肽释放酶新底物PK—120的研究

血浆激肽释放酶新底物ＰＫ┐１２０的研究蒲小平（军事医学科学院基础医学研究所,北京１００８５０）关键词血浆激肽释放酶底物１．发现补体系统由２０余种血浆蛋白组成,在机体防御和炎症应答反应中起重要作用。１９８９年Ｈａｍｍｅｒ等在用Ｃ４ｂ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ...     

人体激肽释放酶2与前列腺癌

人体激肽释放酶2(human kallikrein 2,hK2)是一种主要在前列腺中表达的丝氨酸蛋白酶,近年作为前列腺癌的血清标记物受到广泛关注.随着对hK2结构特征、组织表达、生物学活性和调节,及其与前列腺癌病理过程的关系的研究更一步深入,hK2在前列腺癌诊断、病理分期及治疗中的潜在应用价值将越加瞩目.     

酶的酰胺化作用一步法

<正> 美国 Unigene 实验室发现一种酶,这种酶能够迅速有效地使肽的羧基终端酰胺化。细菌和酵母不能使蛋白质酰胺化,但许多重要的人类蛋白,包括降血钙素、生长激素释放因子、促皮质素释放因子、胰酶分泌素和其它神经肽和胃肽。(可以通过 rDNA 来制造),需要酰     

BK通道功能性复合体的研究进展

离子通道可以与其他蛋白质耦合形成稳定的大分子复合物,以确保信号转导的效率和准确性。大电导、钙离子激活的钾离子通道（BK通道）的核心是由形成孔区的d亚基组成的四聚体,它具有BK通道的基本生理功能。在不同的组织内,BKα可以与不同的辅助性亚基结合,使通道功能变得复杂多样。BK通道可以将细胞兴奋性与细胞内的钙离子信号联接在一起,在血流、泌尿、免疫、神经递质释放等许多生命过程中发挥着重要的调节作用。近年来,大量的研究工作表明。BK通道可以与钙离子通道、细胞骨架蛋白、蛋白激酶等生物大分子形成功能性复合物,这对通道功能调控和信号转导等生命活动具有重要的生理意义。本文综述了这些BK通道功能复合体的主要分类、功能特性以及生理学意义,并对其未来的研究前景进行展望。