金属硫蛋白与红细胞的相互作用

根据金属硫蛋白(MT)对标记在膜上的马来酰亚胺自旋标记物的ESR波谱的影响,研究了MT与红细胞膜的相互作用,发现不同种属的MT对膜构象的影响不同.体外实验表明,MT可以吸附在红细胞的表面,用CdCl₂诱导家兔,对血浆和红细胞溶血液中的MT组分进行色谱分离,发现血液中的MT主要存在于血细胞中.进而对血液MT的来源、分布及其重要的生物学意义进行了讨论.     

蟾蜍红细胞与网织红细胞染色质蛋白的比较研究Ⅲ·HMG蛋白质

从亚洲蟾蜍(Bufo bufo asiaticus)与鸡红细胞核内分离纯化了HMG蛋白(Highmobility group proteins),经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,证明两者的电泳图谱不完全相同,在蟾蜍的红细胞内也能观察到与鸡HMG_(17)相对应位置上的蛋白质区带,但在鸡HMG_(14)相对应的位置上,却能观察到两条显著的蛋白质区带(A及B带)。此外,我们已把蟾蜍成熟红细胞与苯肼诱发后的网织红细胞内的HMG蛋白进行比较,证明两者有显著的差异。网织红细胞内HMG_A和HMG_B蛋白在含量上起了变化,却与成熟的红细胞相反。另外还出现了二条新的蛋白区带(C与D带)。初步的结果暗示了,HMG蛋白类似于非组蛋白、染色质蛋白,在量上的变化将会引起功能上的变化。     

红细胞血影的制备及装载蛋白质分子和噬菌体的试验

遗传学、细胞学和医学等方面的研究工作,已注意应用红细胞血影(ghost cell)装载遗传物质、蛋白质、酶和抗体等,通过类似于细胞融合的过程,把所包含的物质“注入”或转移到受体细胞。哺乳动物红细胞制成的红细胞血影由于不含细胞质和细胞核,在装载转移物质时,不会被细胞内含物“污染”,所以是很合适的“注射器”和运载体。在已经过试验的哺乳动物红细胞中,人、狗和兔的红细胞表现出很高的融合能力。我们用人体红细胞制     

血吸附法浓缩NDV病毒及与其他几种方法的比较

用人O型红细胞吸附－释放病毒的方法纯化被感染的鸡胚尿囊液中的新城疫病毒（NDV）,然后分别对纯化的病毒液及弃去的上清进行血凝检测。结果表明,使用1％的红细胞悬液只能吸附部分病毒,损失较大,只有将红细胞悬液的浓度增加到20％时,才基本将病毒全部吸附住。同时还比较了差速离心,PEG沉淀,PEG包埋等方法。     

力学因素对人红细胞葡萄糖运输和阴离子交换的影响

机械应力在心血管系统的正常生理和病理中都起着重要的作用。实验中观察到当提高红细胞悬浮液的旋转速度时会导致葡萄糖跨膜输入的速率增加。改变溶液渗透压及用使细胞膜曲率变化的药物（氯丙嗪）是对红细胞作用的另二种力学因素。研究发现它们同样也能对葡萄糖和阴离子的运输有影响,根据运输速率的温度特性给出了这些力学因素作用下葡萄糖、阴离子运输时活化能的变化,活化能的减小和运输速率的增加有很好的对应关系;活化能减小使膜上运输蛋白在运输过程中的构象变化更为容易,对红细胞血影的内禀荧光淬灭测量量表明,机械应力是通过影响膜上葡萄糖运输蛋白（GLUT1）和阴离子交换蛋白（带3蛋白）物构象起作用的,当用抑制剂抑制了阴离子的运输后。观察到此时葡萄糖跨膜运输对机械应力的响应发生改变,这再次表明在红细胞膜上GLUT1和带3蛋白之间存在着信号连接。     

草鱼血液学的研究 Ⅰ.九项血液常数的周年变化

用741尾健康草鱼种作红细胞、血红蛋白、红细胞比积、红细胞平均体积、红细胞平均血红蛋白量、红细胞平均血红蛋白浓度、红细胞沉降率、血浆总蛋白和血浆葡萄糖浓度等九项血液常数的测定。所得的年均值经变异系数分析,除红细胞沉降率和血浆葡萄糖浓度外,其余各项常数的可靠性基本一致。另从周年变动的规律分析,高值出现在冬夏季,低值出现的月份较为分散。水温仅对总蛋白含量的变动呈现显著的负相关(P<0.01)。而体重与血液常数存在着一定的相关因素,在10—90克之间的鱼种中,血红蛋白、红细胞比积、红细胞平均体积、红细胞平均血红蛋白量与体重呈现直线正相关;红细胞沉降率为负相关。     

傅里叶变换红外技术研究Cl~-通过红细胞膜带Ⅲ蛋白时的构象变化

用傅里叶变换红外光谱技术研究Ｃｌ-通过完整红细胞、红细胞血影、重组带Ⅲ蛋白脂质体三种体系中的膜带Ⅲ蛋白时的二级结构变化。结果证明：Ｃｌ~-通过膜带Ⅲ蛋白,导致其ａ-螺旋增加,β-结构减少,以扫描隧道显微术直接观察到Ｃｌ~-通过前后、膜带Ⅲ蛋白的分子形态有改变。     

禽流感病毒血凝素HA的可变性解析

以重组的蒙古鸭H5N2禽流感病毒A/Duck/Mongolia/54/01的血凝素HA蛋白的cDNA为模板,进行PCR随机突变,表达只有单个氨基酸突变的H5HA基因共计38个.根据红细胞吸附反应,分析这些突变HA的功能,仍然具有红细胞吸附活性的单个氨基酸突变的HA约占89%,说明H5HA单个氨基酸突变的容许率是相当高的.HA1区突变数目大约是HA2区的两倍.对失去红细胞吸附功能和某些仍然拥有红细胞吸附功能的HA及单个氨基酸突变的位置与结构的关系进行探讨.有两个位点氨基酸突变了两次,但都不影响红细胞吸附功能,对红细胞吸附功能的影响,似乎主要由位置决定,而不是取决于取代的氨基酸的种类.位点179位和122位的突变是不允许的;位点179位于H5N1的受体结合区域RBD内,122位位于A抗原决定簇区附近,推测在H5HA三维结构上,这两个位点位于HA分子的内部,维持着H5HA的结构.HA1Cys位点4和HA2Cys位点148的突变是不允许的.这两个Cys正好形成HA1和HA2连接的桥梁,对维持H5HA结构也是相当重要的.本实验中HA先后失去了三个糖基化位点,但并不影响吸附红细胞的功能.总之,通过实验分析以研究某些氨基酸改变的效果,寻找关键位点是否突变,可以作为评估H5N1野毒株大流行潜力的分子标志.     

大强度训练及恢复后大鼠红细胞变形能力和红细胞膜蛋白的变化

目的 :探讨运动对红细胞变形性和红细胞膜蛋白的影响及其相互关系。方法 :设计不同强度的训练方案 ,用激光衍射法测定红细胞变形能力 ,用SDS PAGE方法测定一定体积大鼠红细胞膜中的重要蛋白带 3蛋白 (band 3)和肌动蛋白 (actin)的含量 ,研究运动即刻和恢复后红细胞变形性及膜蛋白的变化。结果 :长期的运动训练会促进大鼠红细胞变形能力的改善和红细胞膜band 3蛋白和actin的良好发展 ,一次大强度训练会引起红细胞膜band 3蛋白和actin含量的减少 ,大鼠红细胞变形能力降低 ,一周和二周的大强度训练会提高恢复期大鼠红细胞的变形能力和红细胞膜band 3蛋白和actin含量。结论 :运动训练造成的红细胞膜蛋白含量的变化 ,导致了红细胞膜结构的改变 ,从而影响红细胞变形能力 ,可能是训练对红细胞变形能力的作用机制之一。     

傅里叶变换红外技术研究Cl^—通过红细胞膜带Ⅲ蛋白时的构象变化

用傅里叶变换红外光谱技术研究Ｃｌ＾－通过完整红细胞、红细胞血影、重组带Ⅲ蛋白脂质体三种体系中的膜带Ⅲ蛋白时的二级结构变化。结果证明：Ｃｌ＾－通过膜带Ⅲ蛋白,导致其α－螺旋增加,β－结构减少,以扫描隧道显微术直接观察到Ｃｌ＾－通过前后、膜带Ⅲ蛋白的分子形态有改变。     

单克隆抗体制备的亲和填料在血浆高丰度蛋白分离中的应用研究

分离去除高丰度蛋白成为血浆蛋白质组研究的关键问题之一。我们从已建株的17株抗人血浆白蛋白单克隆抗体库中选出一株合适抗体。该抗体用Protein G Sepharose 4B吸附,然后用交联剂DMP（Dimethyl pimelinediimidate chloride）使之与Protein G 蛋白共价交联。实验结果显示600µL（结合1mg抗体）胶能分离10µL血浆中的白蛋白和球蛋白。填料进行重复使用10次后吸附能力变化无显著改变。对填料的吸附蛋白进行MALDI-TOF/TOF 鉴定主要为白蛋白和球蛋白,及其碎片,但发现吸附的蛋白有转铁蛋白,纤维蛋白原,抗胰蛋白酶,前脂蛋白,Vitamin D 结合蛋白,Keratin 10和 CD5 antigen like蛋白。实验结果表明该方法能在固定目的抗体同时最大量地保持抗体活性,该方法有望在蛋白质组学研究的高丰度蛋白分离中得到广泛应用。     

微紫青霉CBHI酶的CBD蛋白编码区在大肠杆菌中的亚克隆及表达

对插入质粒pUC18－181上的微紫青霉（Penicilliumjanthinellum）CBHI酶的cDNA基因进行一系列DNA体外操作,包括进行序列定向缺失,最后将两末端修饰为平端后进行连接使质粒环化。用得到的产生序列定向缺失的重组质粒转化大肠杆菌JM109。利用CBD能吸附到结晶纤维素上的特性,从随机选取的24个缺失转化子中筛选到一株含CBD编码区的转化子JM109（pUC18C）,所表达的CBD融合蛋白分子量为21kD．JM109（pUC18C）所产生的LacZ-CBD融合蛋白可通过对纤维素的吸附-解吸附过程一步纯化。其IPTG诱导的pNPC酶活力为零,表明该菌已不再具有CBHI酶活力。     

棕尾别麻蝇(Sarcophaga peregrina)幼虫与蛹血淋巴凝集素的纯化与特性

用亲和层析法纯化了棕尾别麻蝇幼虫和蛹血淋巴凝集素。以兔红细胞吸附幼虫血淋巴凝集素为抗原制备的抗体、球球蛋白和甲状腺蛋白等三种亲和层析吸附剂纯化得到的幼虫凝集素是相同的,其分子量73kD左右。用甲状腺球蛋白为亲和配基纯化的蛹血淋巴凝集素由二种亚基组成,其分子量分别为30和32kD。幼虫和蛹血淋巴凝集素活性的抑制糖明显不同：乳糖、岩藻糖和N－乙酰半乳糖胺对幼虫血淋巴凝集素活性有抑制作用;而甘露糖胺、半乳糖胺和葡萄糖胺则对蛹血淋巴集素有一定抑制。而且,用兔红细胞吸附幼虫血淋巴凝集素为抗原制备的抗血清对蛹的凝集素活性无交叉反应,表明这两种凝集素是不相同的。虽然本文所纯化的麻蝇蛹血淋巴凝集素的分子量和Komano等报道的麻蝇蛹以及幼虫体壁 伤害诱导的凝集素SPL相同,但其糖的抑制特性有明显差异。     

磷脂酰丝氨酸外翻和磷脂氧化在凋亡细胞被吞噬细胞清除过程中的协作效应

为探讨磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻和磷脂氧化在凋亡细胞被吞噬细胞清除中的作用,用脂质体整合的方法将不同的磷脂整合到红细胞上或用N-乙酰马来酰胺(N-ethylmaleimide,NEM)预处理红细胞然后整合磷脂,制备含不同凋亡信号的红细胞模型,测定巨噬细胞对整合不同磷脂信号红细胞的结合率和吞噬率。结果表明,单独整合PS或用NEM处理造成PS外翻,可显著性提高巨噬细胞对红细胞的结合率,但对吞噬率没有影响;同时整合PS和氧化磷脂(氧化PS或氧化磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)),或用NEM处理造成PS外翻后再整合氧化PS或氧化PC,不仅可显著提高巨噬细胞对红细胞的结合率,而且可显著性提高吞噬率。这些结果提示PS外翻可能参与了巨噬细胞对凋亡细胞的结合,而磷脂氧化可能启动了巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬,二者协作才可能完成巨噬细胞对凋亡细胞的清除。     

一种制备poly(Ⅰ)·poly(C)-滤纸的新方法

poly(1)·poly(C)-滤纸是一种亲和材料,可以用来吸附与双链核酸有亲和力的酶或蛋白。本文介绍用对-β硫酸酯乙砜基苯胺为活化剂制备poly(I)·poly(C)-滤纸的方法。poly(I)·poly(C)的结合容量为10—35μg/cm~2,用来吸附兔网织红细胞裂解液中2’-5’A合成酶效果良好。在一定范围内,酶活与被吸附裂解液量呈线性关系,说明可以用来定量检测未知样品中与poly(I)·poly(C)有亲和力的酶。poly(I)·poly(C)-滤纸在-20℃保存四个月亲和能力不变。本方法与文献报道的方法相比,操作简便试剂易得。     

免疫亲和层析法纯化棕尾别麻蝇(Sarcophagaperegrina)幼虫血淋巴凝集素

 报道了利用免疫亲和层析法纯化棕尾别麻蝇幼虫血淋巴凝集素的结果．哺乳动物红细胞能够特异地吸附凝集素．用兔红细胞与麻蝇幼虫血淋巴凝集素形成的复合体免疫供血家兔,得到麻蝇幼虫血淋巴凝集素的抗体．再利用抗体制备亲和吸附柱,通过免疫亲和层析一次性纯化了麻蝇幼虫血淋巴凝集素． Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ结果显示,该凝集素的分子量约为７３ ｋ Ｄ．这一结果,与用对麻蝇幼虫血淋巴凝集素有抑制作用的糖蛋白—胎球蛋白和甲状腺球蛋白为配基,亲和层析纯化的结果完全相同,表明用这种免疫亲和层析法纯化凝集素是可行的．为不清楚专一性识别糖或专一性识别糖不典型,难于用普通亲和层析纯化的凝集素,提供了一种有效的纯化方法．     

含A蛋白金黄色葡萄球菌菌株比较和培养基的选择

自发现金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)借Fc段与I_gG结合的功能以来,除用协同凝集和吸收试验作受检细菌或病毒分型、检出I_gM、I_gA抗体以外,还结合A蛋白同位素或荧光素标记、A蛋白标记红细胞或标记塑料平皿等技术,广泛用于微生物学、免疫学以及细胞表面抗原分析等方面的实验研究。这些研究均需SPA菌液或纯品A蛋白。近年来,我们在自制SPA菌液过程中,就不同菌株和培养基作了一些比较试验。现将比较结果报道如下。     

黑素转铁蛋白在家兔网织红细胞膜上的表达及其在铁摄取中的作用

目的：研究黑素转铁蛋白（p97）在家兔网织红细胞膜上的表达及其在非转铁蛋白结合铁摄取中的作用。方法：聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS＝PAGE）和放射性同位素法（^59Fe）。结果：①网织红细胞孵育液浓缩后,经SDS－PAGE测定,在分子量97kD位置上可见一条明显的蛋白带;用磷脂酚肌醇磷脂酶C（PI－PLC）300mu/ml预处理网织红细胞后,孵育液浓缩再经SDS－PAGE测定,在分子量97kD处仍有一条明显的蛋白带,且其平均OD值高于未经处理的网织红细胞;而成熟的红细胞在此处却没有明显的蛋白带。②单纯用PI－PLC作用于网织红细胞,其铁摄取无明显变化（P＞0.05）。③去除内源性转铁蛋白后,再用PI－PLC作用网织红细胞,则胸浆内铁及整合到血红素中的铁均较未经处理的网织红细胞明显降低（P＜0.05）。结论：p97可能存在于家兔网织红细胞膜上,且在摄取非转铁蛋白结合铁的过程中可能发挥作用。     

草酸对土壤胶体与矿物表面酶的吸附及活性影响

采用平衡批处理法,研究了模拟根系分泌物--草酸溶液的浓度、pH对酸性磷酸酶在针铁矿、高岭石及黄棕壤和砖红壤胶体(＜2μm)上的吸附及比活的影响.结果表明,针铁矿对磷酸酶的吸附量受草酸浓度的影响较小,其它供试胶体对蛋白的吸附量随草酸浓度的升高,一般表现为先急剧降低(0～5mmol·L^-1),之后逐渐升高到与对照相当或略低.这与草酸在土壤胶体和矿物表面的配位形态及其对载体表面的电荷改变、溶解有关.草酸体系中,供试胶体对磷酸酶的吸附顺序为针铁矿>黄棕壤＞高岭石＞砖红壤.酶在草酸体系中的最大吸附点位一般出现在蛋白的等电点(IEP)和供试胶体的PZC之间,而酶在草酸体系中被固定到供试胶体上之后,其最适比活点随胶体类型的不同而没有变化或有所高移.     

HPV-16L1植物表达载体的构建及HPV-16L1在转基因烟草中表达的鉴定

利用PCR技术克隆人乳头瘤病毒HPV-16L1蛋白编码基因 ,将其重组于pUCmT和pBI12 1中 ,构建含HPV 16L1基因的植物双元表达载体pBI L1,L1基因由CaMV 35S启动子控制表达。采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草 (NicotianatobacumL .) ,获得HPV-16L1转基因烟草植株。经PCR及Southern杂交分析 ,HPV 16L1基因整合到烟草基因组中 ;Westernblot和ELISA分析检测显示转基因烟草叶片蛋白可与HPV 16L1单克隆抗体特异性反应 ,且定位于 5 5kD处 ,其最高表达量占烟草叶片总可溶蛋白的0.076 %。小鼠红细胞凝集试验 (HA)及小鼠红细胞凝集抑制试验 (HAI)显示转基因烟草叶片蛋白可引起小鼠红细胞凝集。结果表明已成功地构建了HPV-16L1的植物双元表达载体 ,并证实了利用转基因烟草植物能够表达出HPV-16L1蛋白 ,所表达的L1蛋白具有良好的抗原性并具有介导小鼠红细胞凝集的生物活性.