荧光原位杂交技术分析栽培种甘薯(Ipomoea batatas cv.XushuNo.18)染色体

为了解栽培种甘薯(徐薯18,Ipomoea batatas cv.XushuNo.18)的染色体结构,文章利用45SrDNA荧光原位杂交、自身基因组荧光原位杂交和银染技术对栽培种甘薯进行分子细胞遗传学研究。银染结果显示,徐薯18间期核有6对、8对和9对银染点;45SrDNA荧光原位杂交结果显示,徐薯18染色体上有8对或9对强弱不一的45SrDNA信号;自身基因组荧光原位杂交结果表明,所有染色体的全长分布强烈而密集的杂交信号,着丝粒区、近着丝粒区和端粒区有增强的信号带。     

荧光原位杂交技术在植物学中的应用

荧光原位杂交技术（fluorescence 〖WTBX〗in situ 〖WTBZ〗hybridization, FISH）是80年代末才发展起来的一种非放射性原位杂交技术。作为一种新型的细胞分子遗传学技术,目前已广泛应用于细胞遗传学、分子生物学等领域。本文简要综述了该技术的基本原理与特点及其在植物学中的应用,包括在异源染色质的鉴定、染色体物理图谱的构建和染色体RNA及植物基因组进化中的应用。     

以地戈辛标记反义RNA为探针的组织原位杂交

原位分子杂交是在液相和固相分子杂交基础上发展起来的,从染色体、细胞或整体水平在原位研究特异核酸的分布、数量、表达形态及其同细胞的分化、生理或病理状态、形态特征演化之间关系的分子生物学技术。随着技术的发展,原位杂交不仅被用来研究特定DNA、RNA的细胞内的分布,而且被用来探索被检mRNA相关基因的表达。可以说,原位杂交技术在分子生物学与形态学研究之间架起了一座桥梁。     

莲藕染色体上荧光原位杂交方法的初探

用酶解滴片法制备莲的染色体标本片,在传统的荧光原位杂交(FISH)的方法上进行改进,得到了一种适合于莲的高效荧光原位杂交方法,为莲的分子细胞遗传学研究提供技术上的帮助。     

细胞内RNA的原位杂交

本文介绍用原位杂交方法测定细胞内的RNA。该方法特异性较高,能保持细胞曲完整性。我们测定了不同细胞的rRNA基因的转录和原癌基因c-myc,c-H-rgs的转录,取得了较满意的结果。RNase处理细胞或质粒pBR322作探针,细胞中显影颗粒很少。本文对原位杂交方法学进行了初步的讨论。     

一种微生物检测的新方法——原位多聚酶链反应的原理和应用

原位多聚酶链反应（ＩＳＰＣＲ）是近几年发展起来的新型ＰＣＲ技术,它能在细胞或细胞切片上对待检的低拷贝基因先行扩增,然后再行原位杂交检测。因而兼具ＰＣＲ快速、灵敏、特异性强和原位杂交精确定位的特点,并已被用于多种病原微生物的检测。     

一种微生物检测的新方法——原位PCR应用

原位PCR(in sztu PCR,ISPCR)是近几年发展起来的新型PCR技术,它能在细胞悬液、细胞涂片和组织切片上对待检的低拷贝或单拷贝基因进行扩增,然后再对待检基因进行原位杂交检测,因而兼有PCR快速、灵敏、特异性强和原位杂交精确定位的特点,具有非常广阔的应用前景。     

荧光原位杂交技术的研究进展

荧光原位杂交(FISH)是在染色体、间期细胞核和DNA纤维上进行DNA序列定位的一种有效手段。近年来,围绕提高检测的分辨率和灵敏性,不断将免疫染色、量子点和微流控芯片等物理化学技术引入到荧光原位杂交中,促进了它的快速发展。本文主要综述了荧光原位杂交的基本原理和发展历程,重点介绍了免疫染色-荧光原位杂交(immuno-FISH)、量子点-荧光原位杂交(QD-FISH)和微流控芯片-荧光原位杂交(FISH on microchip)等多种新技术及其检测特点,如快速、灵敏、动态、多样化等。随着荧光原位杂交技术的不断完善与发展,将在细胞遗传学、表观遗传学及分子生物学等领域发挥更加重要的作用。     

荧光原位杂交技术在植物细胞遗传学和绘制基因图谱中的应用现状与展望

荧光原位杂交是在分子水平上检测外源染色质的一种有效方法。其探针主要有染色体重复序列、总基因组DNA、寡单拷贝序列和染色体涂色集中等,该技术在研究植物细胞遗传学、基因扩增、基因作图及植物进化和亲缘关系的鉴定上已广泛应用。简要概述了荧光原位杂交技术在植物细胞遗传学和绘制基因图谱中的应用现状与展望。     

莲藕染色体上荧光原位杂交方法的初探

用酶解滴片法制备莲的染色体标本片,在传统的荧光原位杂交(FISH)的方法上进行改进,得到了一种适合于莲的高效荧光原位杂交方法,为莲的分子细胞遗传学研究提供技术上的帮助。     

人单拷贝及重复DNA序列的原位PCR

在培养的人小肠癌转移腹水细胞系细胞中进行了Y染色体特异的重复序列及单拷贝序列的原位扩增与检测.结果显示原位PCR法的灵敏度比直接的原位杂交法明显提高.     

一种新型细胞微阵列的制作和应用

为了高通量地检测大量培养细胞中基因原位表达, 发明了一种制作细胞微阵列的新方法,成功地制作含20种细胞系共100个供体细胞石蜡混合物点阵的细胞微阵列.免疫组化检测P53, P21, PTEN、P16基因在细胞微阵列中的蛋白质表达.原位杂交检测BRD7、NGX6 基因在细胞微阵列中mRNA原位表达.建立了P53、P21、PTEN、P16蛋白和BRD7、NGX6 mRNA 在不同培养细胞中的原位表达谱.细胞微阵列为基因功能研究提供一种新的高通量工具.细胞微阵列可广泛用于DNA、RNA和蛋白质水平上的基因原位表达研究.细胞微阵列还可用于筛选药物作用靶标的研究.     

NGX6基因在多种常见癌组织中的原位表达及其临床意义的研究

研究新的候选抑瘤基因NGX6在多种常见癌组织中的mRNA原位表达谱,分析NGX6 mRNA阳性率与肿瘤1临床病理特征的关系并评估其作为肿瘤转移、预后预测分子标志物的有效性.利用已制作的多肿瘤组织和鼻咽癌组织微阵列,原位杂交检测NGX6 mRNA在多种常见癌组织中的阳性率.结果显示.NGX6 mRNA在鼻咽癌、肺癌、胃癌和结、直肠癌中的阳性率低于其对应的正常组织(P＜0.05,P＜0.01).淋巴结转移性鼻咽癌、肺癌、结、直肠癌和喉癌组织中的NGX6 mR.NA阳性率显著降低(P＜0.05,P＜0.01).NGX6 mRNA阳性率与鼻咽癌、肺癌和结、直肠癌临床分期有关,临床Ⅱ期、Ⅲ期或Ⅳ期癌组织NGX6 mRNA阳性率明显低于其相应的临床Ⅰ期癌(P＜0.05,P＜0.01).研究表明,鼻咽癌、肺癌、胃癌和结、直肠癌中存在低水平的NGX6 mRNA,NGX6 mRNA可作为鼻咽癌、肺癌和结、直肠癌侵袭、转移和临床进展预测的分子标志.     

原位PCR技术及其应用前景

原位PCR是分子生物学领域中一种崭新的技术,它结合了PCR技术和原位杂交技术的优点.该文介绍了原位PCR技术的起源、发展及方法学,并简要描述了该技术的应用现状及前景．     

High-resolution mapping of YACs and the single-copy gene Hs1pro−1 on Beta vulgaris chromosomes by multi-colour fluorescence in situ hybridization

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful approach for physical mapping of DNA sequences along plant chromosomes. Nematode-resistant sugar beets (Beta vulgaris) carrying aBeta procumbens translocation were investigated by FISH with two differentially labelled YACs originating from the translocation. At mitotic metaphases, the translocation was identified with both YACs in the terminal region on a pair of chromosomes. Meiotic chromosomes, representing a far more extended hybridization target, were used to determine the orientation of YACs with respect to chromosomal domains in combination with chromosomal landmark probes for telomeres and centromeres. The in situ detection of plant single-copy sequences is technically difficult, and the wild beet translocation was used to explore the potential resolution of the FISH approach and to introduce the chromosomal mapping of single-copy genes into genome analysis of Beta species. An internal fragment of the nematode resistance gene Hs1 ^pro–1, 684 bp long, was detected on both chromatids of different Beta chromosomes and represents one of the shortest unique DNA sequences localized on mitotic plant chromosomes so far. Comparative chromosomal mapping of the 684 bp Hs1 ^pro–1 probe in the translocation line, a monosomic addition line and in B. procumbens revealed the origin of the wild beet translocation leading to nematode-resistant sugar beets.     

原钙黏附蛋白18b基因抑制对斑马鱼神经系统发育的影响

原钙黏附蛋白18b(Protocadherin18b,Pcdh18b)属于钙黏附蛋白家族成员．为了研究pcdh18b基因抑制对斑马鱼神经系统发育的影响,针对pcdh18b的翻译起始位点设计一个吗啡啉修饰的反义寡核苷酸抑制其表达,在斑马鱼受精卵一到二细胞期注射并且验证其有效性．注射后用原位杂交和吖啶橙染色检测神经系统的表型和标志基因的表达．pcdh18b下调使神经前体细胞的标志基因neurog1、神经元标志基因elavl3和神经胶质细胞标志基因gfap的表达均出现下调,中后脑边界的标志基因pax2a和wnt1表达减弱并出现神经管分叉现象,同时与后脑分节相关的基因krox20表达减少．吖啶橙染色显示pcdh18b下调后斑马鱼中脑、后脑及中后脑边界细胞凋亡增多．这些结果表明pcdh18b抑制导致了斑马鱼神经系统发育的异常．     

基于荧光原位杂交的藜属植物核型分析

为精确地识别藜属植物染色体组的核型特征,该文研究了4种来自青海高原的野生藜属植物(灰绿藜、藜、菊叶香藜及杂配藜)和1种从美国引进的栽培藜麦品种PI614932-HX(3)基于染色体荧光原位杂交(rDNA FISH)的核型。利用5S rDNA和45S rDNA对5种藜属植物有丝分裂中期的染色体进行FISH研究。藜属植物的核型分析结果表明:(1)藜属植物中存在二倍体(2n=2x=18)和四倍体(2n=4x=36)两种倍性,藜麦和灰绿藜为四倍体,其余3种为二倍体。(2)藜麦、灰绿藜、藜、菊叶香藜及杂配藜的核型公式分别为2n=4x=36=34m(2AST)+2sm,2n=4x=36=32m(4AST)+4sm,2n=2x=18=16m(4AST)+2sm,2n=2x=18=18m及2n=2x=18=16m+2sm。(3)染色体由大部分的中部着丝粒染色体(m)和少部分近中部着丝粒染色体(sm)组成。(4)核型类型除了菊叶香藜为1B以外,其余均属于2B类型。(5)在藜麦、灰绿藜及藜中具有分布位置不同、数量不等的双随体。5S rDNA、45S rDNA FISH结果表明:(1)藜麦和灰绿藜的染色体上存在2对5S rDNA位点和1对45S rDNA位点,藜、杂配藜的染色体上存在1对5S rDNA位点和1对45S rDNA位点,菊叶香藜的染色体上只存在1对5S rDNA位点。(2)5S rDNA和45S rDNA位点均位于染色体的短臂上。该研究首次获得了藜属植物基于5S rDNA和45S rDNA荧光原位杂交核型,为藜属植物亲缘关系研究和细胞生物学研究提供了分子细胞遗传学依据。     

Detection byin-situ fluorescence of short,single-copy sequences of chromosomal DNA

Short single-copy probes have been widely used in plant molecular biology. However, they have rarely been effective in plant research usingin situ hybridization techniques, possibly due to limitations imposed by the cell wall. We recently developed two fluorescencein situ hybridization protocols for the single-copy sequence detection in soybean. By enzymatically removing the cell wall, single-copy sequences as short as 1 kb were detected by probes using standard fluorescencein situ hybridization or PCR-primedin situ hybridization (PCR-PRINS). Such technology is useful for genome analysis, in plant molecular, cellular, and biotechnological research.     

Visualization of the terminal structure of rice chromosomes 6 and 12 with multicolor FISH to chromosomes and extended DNA fibers

High-resolution fluorescence in situ hybridization (FISH) on interphase and pachytene nuclei, and extended DNA fibers enabled microscopic distinction of DNA sequences less than a few thousands of base pairs apart. We applied this technique to reveal the molecular organization of telomere ends in japonica rice (Oryza sativa ssp. japonica), which consist of the Arabidopsis type TTTAGGG heptameric repeats and the rice specific subtelomeric tandem repeat sequence A (TrsA). Southern hybridizations of DNA digested with Bal31 and EcoRI, and FISH on chromosomes and extended DNA fibers demonstrated that (1) all chromosome ends possess the telomere tandem repeat measuring 3–4 kb; (2) the subtelomeric TrsA occurs only at the ends of the long arms of chromosomes 6 and 12, and measure 6 and 10 kb, which corresponds to 231 and 682 copies for these sites, respectively; (3) the telomere and TrsA repeats are separated by at most a few thousands of intervening nucleotide sequences. The molecular organization for a general telomere organization in plant chromosomes is discussed.