Analysis of RNA Silencing in Agroinfiltrated Leaves of <Emphasis Type="Italic">Nicotiana Benthamiana</Emphasis> and <Emphasis Type="Italic">Nicotiana Tabacum</Emphasis>

In this study we analyse several aspects of cytoplasmic RNA silencing by agroinfiltration of DNA constructs encoding single- and double-stranded RNAs derived from a GFP transgene and from the endogenous Virp1 gene. Both types of inductors resulted after 2–4 days in much higher concentration of siRNAs in the agroinfiltrated zone than normally seen during systemic silencing. More specifically, infiltration of two transgene hairpin constructs resulted in elevated levels of siRNAs. However, differences between the two constructs were observed: the antisense–sense arrangement was more effective than the sense–antisense order. For both double-stranded forms, we observed a relative increase of the 24-mer size class of siRNAs. When a comparable hairpin construct of the endogenous Virp1 gene was assayed, the portion of the 24-mer siRNA class remained low as observed for all kinds of single-stranded inducers. The lack of increase of Virp1-derived 24-mers was independent of the expression level, as demonstrated by agroinfiltration into a transgenic plant that overexpressed Virp1 and showed the same pattern. Using transducer constructs, we could detect within a week transitive silencing from GFP to GUS sequences in the infiltrated zone and in either direction 5′–3′ and 3′–5′. Conversely, for the endogenous Virp1 gene neither transitive silencing nor the induction of systemic silencing could be observed. These results are discussed in view of the current models of RNA silencing.     

RNA介导的转基因沉默:原理及应用

RNA介导的转基因沉默是有dsRNA参与指导的,以外源和内源mRNA为降解目标的转基因沉默现象。本文对植物中RNA介导的转基因沉默的机理做了详细的阐述,并且将各种生物中在此过程中起关键作用的蛋白及其功能进行了总结,最后介绍dsRNA作为一种基因组学研究手段的优势和它实际的应用前景。Abstract:RNA-based transgene silencing is a phenomenon that endogenous and exogenous mRNAs are degraded specifically directed by double-stranded RNA.Here we review the recent advances on its mechanism and summarize related proteins and expatiate their functions.Furthermore,we introduce the enormous potential of dsRNA as a tool in functional genomics research and practical biotechnology.     

RNA干扰作用(RNAi)研究进展

RNA干扰作用 (RNAi)是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象 ,是基因转录后沉默作用 (PTGS)的重要机制之一 .RNAi主要通过dsRNA被核酸酶切割成 2 1～ 2 5nt的干扰性小RNA即siRNA ,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现 .RNAi要有多种蛋白因子以及ATP参与 ,而且具有生物催化反应特征 .RNAi是新发现的一种通过dsRNA介导的特异性高效抑制基因表达途径 ,在后基因组时代的基因功能研究和药物开发中具有广阔应用前景     

RNA干涉分子机制研究进展

RNA干涉（RNA interference,RNAi）是生物体内的一种通过双链RNA(dsRNA)来抵抗病毒入侵和抑制转座子活动的自然机制.双链RNA与同源mRNA互补结合而使特定基因失活,这一过程已经在包括拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到揭示.近来研究表明,21～25 nt的小干涉RNA（small interference RNA, siRNA）可介导哺乳动物细胞特异性基因沉默.RNAi具有高效性和高度特异性,可能成为关闭基因的新技术而在基因功能研究和疾病基因治疗中发挥重要作用.     

RNA干扰用于基因治疗的研究进展

RNA干扰(RNAi)是20世纪末才被人们认识和重视的一种通过双链RNA抵御病毒入侵或抑制转座子活动的生物防御机制。随着RNA干扰分子机制研究的深入及其应用研究的发展,人们发现RNA干扰技术在基因功能研究及人类疾病的基因治疗上具有广阔的应用前景。本文在简述RNAi分子机制的基础上,综述了RNAi在抗病毒治疗及抗肿瘤治疗方面的研究和应用概况。     

利用转hpRNA基因水稻抗水稻矮缩病毒

具有发夹结构的双链RNA(hairpin RNA,hpRNA)能高效诱导转录后基因沉默的发生.以水稻(Oryza sativaL.)矮缩病毒(RDV)基因组中第八片段编码区128～754 bp的序列为臂构建hpRNA,并克隆到植物表达载体pROK-2上.通过农杆菌介导的方法转化水稻\"中花11\".Southern blot分析表明,共获得12株阳性转化体.用带有RDV的叶蝉(Nephotettix cincticeps)接种Tl代转hpRNA水稻,结果表明转基因水稻对RDV具有高抗性或表现为症状延迟.而相同序列的有义链的转基因水稻和空载体的转基因水稻表现为典型的RDV侵染症状.HpRNA在转基因水稻中对RDV高抗性发挥重要作用.     

双链RNA在基因沉默中的作用

介绍依赖于同源识别的基因沉默 .依赖于同源识别的基因沉默 ,是指向生物体内导入外源核酸时引起相应序列的内源基因的表达被特异性抑制的一种基因调控现象 .基因沉默分为转录基因沉默和转录后基因沉默 ,二者都通过双链RNA介导 .它们是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制 .这些机制具有巨大的应用前景 .     

RNA干扰与基因敲除

RNAi是指通过双链RNA介导特异性降解靶mRNA,导致转录后水平基因沉默的现象。其作用途径有RdRP依赖的RNAi的途径与非RdRP依赖的RNAi途径2种。利用RNAi的基因敲除技术在dsRNA序列选择、质粒或病毒为载体的dsRNA体内合成、发夹样siRNA的转录、dsRNA的导入方法等方面取得了很大进展,在研究人类或其他生物基因组中未知基因及蛋白质的功能等领域具有诱人的应用前景。     

植物转基因沉默与病毒抗性

对植物基因沉默的机制及其在植物抗病毒基因工程中的应用作了综述.植物转基因沉默是转基因植株中普遍发生的一种现象,引起植物转基因沉默的原因是多方面的,但主要涉及转录水平的基因沉默和转录后水平的基因沉默.植物对病毒的抗性机制在某些方面与基因沉默有相似之处.