柽柳金属硫蛋白基因(MT2)的过量表达对烟草耐Cd2+性的促进效应

将在柽柳(Tamarix androssowii)中克隆的金属硫蛋白基因MT2(GenBank登录号:AY620987)构建到载体pROKII上。用农杆菌介导的叶盘法转化烟草‘龙江911’,获得了抗卡那霉素的转基因植株。PCR-Southern和Northern blot检测证明外源基因已整合进烟草基因组并可正常表达。Cd2 抗性实验证明柽柳金属硫蛋白基因(MT2)的表达可提高转基因烟草的抗Cd2 性。     

转金属硫蛋白及其突变体αα基因烟草的T1代性状分析

转金属硫蛋白MT及其突变体αα的烟草自交得到T1代,转基因植株的重金属抗性和除草剂抗性在后代中得到保持,不同的转基因株系在含有除草剂的培养基中萌发时表现出不同的抗性分离比,说明外源基因在植物染色体内可能有不同的整合拷贝数。两种转基因烟草在含有不同浓度Cd的培养基中萌发时表现出高的重金属抗性,其中转αα基因烟草对Cd的抗性优势在T1代种子萌发实验中更加明显。以MT cDNA为探针进行Southern blot杂交,在T0代和T1代同时检测到两种转基因烟草外源基因的存在,证明外源基因确实整合到烟草基因组内并稳定传递到后代。Western blot结果证明了外源基因在烟草第二代的表达,纯合株系仍需要进一步的筛选。     

金属硫蛋白(Metallothionein,MT)基因在转基因领域的应用

MT丰富的巯基含量及重金属结合能力决定了它功能方面的多样性。本文综述了其高效可诱导性的启动子及其富含半胱氨酸的结构基因在细胞分子生物学,医学,农业及环保方面的转基因的应用及其发展过程。并对其在疾病诊断,环境保护等方面的前景进行了探讨。     

转金属硫蛋白及其突变体αα 基因烟草的Tl代性状分析

转金属硫蛋白MT及其突变体αα的烟草自交得到T1代,转基因植株的重金属抗性和除草剂抗性在后代中得到保持.不同的转基因株系在含有除草剂的培养基中萌发时表现出不同的抗性分离比,说明外源基因在植物染色体内可能有不同的整合拷贝数.两种转基因烟草在含有不同浓度Cd的培养基中萌发时表现出高的重金属抗性,其中转αα基因烟草对Cd的抗性优势在T1代种子萌发实验中更加明显.以MTcDNA为探针进行Southernblot杂交,在T0代和T1代同时检测到两种转基因烟草外源基因的存在,证明外源基因确实整合到烟草基因组内并稳定传递到后代.Westemblot结果证明了外源基因在烟草第二代的表达.纯合株系仍需要进一步的筛选.     

转星星草金属硫蛋白基因烟草的获得及其抗重金属镉能力分析

用农杆菌介导法将星星草金属硫蛋白基因（MD转化烟草,PCR及PCR—Southern检测的结果表明,该基因已导入烟草中。Real-TimePCR检测显示,该基因在转基因后代中的转录水平高于非转基因植株。Cd2＋胁迫下,转基因植株能够正常生长,鲜重、株高、叶绿素含量、Cd2＋含量和SOD活性均高于非转基因植株,表明MT基因的过量表达可提高转基因烟草的抗Cd2＋能力。     

金属硫蛋白（Metallothionein,MT）基因在转基因领域的应用

ＭＴ丰富的巯基含量及重金属结合能力决定了它功能方面的多样性。本文综述了其高效可诱导性的启动子及其富含半胱氨酸的结构基因在细胞分子生物学,医学,农业及环保方面的转基因的应用及其发展过程。并对其在疾病诊断,环境保护等方面的前景进行了探讨。     

柽柳金属硫蛋白基因的克隆及序列分析

用木麻黄(Casuarina glauca)的金属硫蛋白基因(metallothionein 1)氨基酸序列对柽柳ESTs序列本地数据库进行tBlastn检索,获得了柽柳金属硫蛋白基因全长cDNA序列,去除polyA后该基因全长366 bp,其中5′非翻译区97 bp,3′非翻译区59 bp,开放读码框(ORF)长210 bp,编码70 个氨基酸组成的多肽,蛋白分子量为6.793 kD,理论等电点为4.99,含10个Cys,集中分布在肽链的N端和C端。BlastP同源性分析表明该基因与花生同源性最高,与小豆同源性最低。该基因的EST序列在GenBank登录(登录号：CV792539)。     

植物金属硫蛋白研究进展(二)植物MT基因的表达特征及其功能

阐述了植物金属硫蛋白基因表达的组织特异性、金属离子、激素、化学试剂等对植物金属硫蛋白基因表达的影响及植物金属硫蛋白的功能。     

转柽柳晚期胚胎富集蛋白基因烟草T1代的耐盐性评价

目的:验证转柽柳晚期胚胎富集(LEA)蛋白基因烟草T1代的耐盐性。方法:采用盐胁迫方式,对转柽柳LEA蛋白基因烟草T1代的6个株系及非转基因对照烟草T1代进行不同浓度NaCl胁迫处理,分析了NaCl胁迫下转基因烟草的生长量、根系的发育及盐害程度。结果:各转基因烟草T1代组培苗在150mmol/L的NaCl培养基上根系生长良好,平均增重(鲜重)是非转基因对照的7.72倍,平均高生长是非转基因对照的3.51倍,盐害指数低于或等于50%;而非转基因对照烟草T1代组培苗生长缓慢,根系几乎不能生长发育,盐害指数达65%。结论:柽柳LEA蛋白基因的导入提高了T1代烟草的耐盐性。     

Chlorsulfuron resistant transgenic tobacco as a tool for broomrape control

Broomrape (Orobanche ramosa L.) is the most important parasitic plant that infests tobacco (Nicotiana tabacum L.). Chemical treatment of the soil is not effective and crop rotation is not acceptable to solve this problem because of the long viability period of Orobanche seeds in the soil. Application of systemic herbicides in the field with herbicide resistant tobacco could be a successful tool for broomrape control. Several tobacco cultivars were transformed with a mutant ahas3R gene for resistance to the herbicide chlorsulfuron (Glean^®, DuPont). Transformed plants were selfed and the segregation of resistance was followed in the next generation. The efficiency of the herbicide was demonstrated in greenhouse and field trials. An Orobanche/tobacco growth system was used in order to prove the lethal effect of the herbicide to the attached broomrape plants.     

头孢霉素类抗生素在转基因烟草中作用的初步研究

研究了头孢曲松钠、头孢哌酮钠、头孢西林钠、头孢唑林钠、头孢拉定5种头孢霉素类抗生素对农杆菌EHA105的抑制作用和对烟草愈伤组织的诱导及丛生芽形成的影响,结果表明：5种头孢类抗生素在作为抑菌剂用于烟草遗传转化试验时,头孢曲松钠的抑菌效果最好,浓度以200mg/L为宜,同时该抗生素在低浓度下能提高愈伤组织诱导率和丛生芽诱导率,在高浓度下则抑制愈伤组织和芽的形成 ,有类似植物激素的活性。     

豌豆过氧化氢酶在烟草叶绿体中的过量表达提高了植物的抗逆性

通过构建融合番茄RuBP羧化酶小亚基转运肽基因(rbcS-3)和CAT基因编码阅读框(ORF)的双元表达载体,采用农杆菌介导的叶圆盘转化法将融合基因转入烟草,使其能够定向导入叶绿体中发挥作用。在含有50mg/L潮霉素的培养基上筛选获得转CAT烟草30多个株系,并对其进行了分子生物学的验证和生理指标的检测。对获得的抗性植株用PCR、RT-PCR、植株总蛋白Western blot和叶绿体蛋白Western blot分析表明,目的基因已经整合到烟草基因组中,并能正常表达,且在叶绿体rbcS-3转运肽的作用下能定向进入叶绿体中。对转基因植株生理指标的检测发现,在20% PEG₆₀₀₀模拟干旱条件下,野生型烟草的相对电导率提高幅度为43.4%,而转CAT植株的相对电导率仅提高8.8%,表明在干旱胁迫下转CAT烟草的质膜透性小于野生型烟草;经20% PEG₆₀₀₀处理后,野生型和转CAT基因烟草的叶绿素含量都下降,下降幅度分别为68.0%和20.4%;另外,经20% PEG₆₀₀₀处理的野生型烟草叶片的Fv/Fm下降幅度为5.3%,而转CAT基因烟草叶片的Fv/Fm下降幅度0.9%,这些结果表明,在叶绿体中过量表达CAT对干旱胁迫下的细胞质膜、叶绿素和PSⅡ具有一定的保护作用。此外,经150 μmol/L百草枯处理后发现,处理3h后,野生型烟草和转CAT烟草的相对电导率分别比对照提高67.9%和13.5%,而野生型和转CAT烟草的Fv/Fm都下降,降幅分别为23.7%和3.9%,这表明在百草枯氧化胁迫下转CAT烟草的质膜和PSⅡ的损伤程度都小于野生型烟草。总之,豌豆CAT基因在烟草叶绿体中过量表达,提高了转基因烟草的抗旱性和抗氧化性。     

Expression in transgenic tobacco of the bacterial neomycin phosphotransferase gene modified by intron insertions of various sizes

A plant selectable marker gene consisting of cauliflower mosaic virus expression signals and the proteincoding sequence of bacterial neomycin phosphotransferase was modified by insertion of an intron sequence from a storage protein gene, phaseolin. Correct and efficient splicing of the resulting mosaic RNA was observed in transgenic tobacco plants. The insertion of various linkers or gradual increase of intron size by addition in both orientations of internal intron sequences from another plant gene (parsley, 4-coumarate ligase) had little or no effect on the precision of slicing. The gene activity measured by selectability assay in the protoplast transformation showed that only introns enlarged to 1161 bases and longer caused decreased selectability. The suitability of such mosaic marker genes for studies of RNA splicing, DNA recombination and early events after infection of plants with Agrobacterium is discussed.