着床期淋巴细胞归巢受体的研究

胚胎着床过程中,终体面的蜕膜内有绒毛外滋养层细胞、免疫细胞用蜕膜细胞组成的相互影响、相互制约的网络状免疫微环境。其淋巴细胞中,大颗粒淋巴细胞（NK）的比例高达45％,且处于特定的功能状态。机体淋巴细胞通过其表面的归巢受体与组织中高内皮小静脉（HEV）的内皮细胞结合而归巢到淋巴结或相关淋巴组织,完成淋巴细胞的再循环。目前认为选择素CDS62L和CD44是最主要的淋巴细胞归巢受体,除了参与上述过程外,还在淋巴细胞活化及炎症反应过程中发挥重要作用。以往对蜕膜中细胞组分及表型变化的研究较多,而对着床过程中母体特别是蜕膜局部淋巴细胞归巢特点的研究较少,对淋巴细胞归巢受体在着床过程中的作用、动态变化及表达特点则未见报道。本文以着床期小鼠为动物血淋巴细胞（PBLC）及子宫内膜／蜕膜细胞（EC／DC）中的研究发现：CD62L、CD44在着床期一天（D1）呈一过性降低,D2－D5无明显变化(Fig.2）;CD44在EC／DC中仍呈高表达,但于D3开始呈动态下降,至D5降至最低（Fig.3）。即：着床过程对外周血整体淋巴细胞归巢机制不产生影响;在蜕膜中,着床本身对由CD62L－外周淋巴结标志素（PNAd）介导的淋巴细胞归巢作用无明显影响;而由CD44－粘膜标志素（MAd）介导的淋巴细胞归巢作用自D3开始呈下降趋势;CD62L原低表达和CD44在着床期D3－D5的低表达及动态下降,将不利于NK细胞的活化,降低其自然杀伤活性,从而有利于着床过程中局部免疫耐受的形成。     

CD44的变异性表达和肿瘤转移

跨膜蛋白ＣＤ４４具有多种结构形式,功能复杂,其基因组中的Ｖ区外显子能以变异方式发生拼接,不含有Ｖ区外显子的转录子称为标准ＣＤ４４ｓ,含有Ｖ区外显子的转录子称为ＣＤ４４ｖ变异体。研究表明具有转移能力的癌细胞主要表达ＣＤ４４ｖ,而非转移的癌细胞和正常组织细胞则主要表达ＣＤ４４ｓ．     

结肠癌组织中CD44S和CD44V6基因蛋白的表达及意义

摘要：目的 研究CD44S和CD44V6的表达与结肠癌临床病理特征之间的关系,以明确二者在结肠癌发展和预后中的作用。方法 选取98例结肠癌组织做为实验组,采用免疫组织化学方法,检测组织中CD44S和CD44V6基因蛋白产物表达,与组织学分型、肠壁浸润深度、脉管有无浸润、淋巴结有无转移、预后等相关因素进行实验研究。结果 CD44S和CD44V6的表达与结肠癌组织类型无关,与癌组织浸润肠壁深度、脉管浸润、淋巴结转移、远处转移等密切相关。结论 CD44S和CD44V6异常表达可能参与了结肠癌的发展并可能影响患者的预后。     

绒毛膜促性腺激素和前列腺素F2α抗血清对小鼠胚胎着床效应的研究

本实验用hCG和PGF_(2σ)抗血清对妊娠4天的小鼠胚胎进行体外处理,经过移植后,二个实验组的胚胎着床率(hCG组为25.2±0.37％和PGF_(2σ)组为28.6±0.19％)均显著低于对照组(hCG组为74.9±0.48％,PGF_(2σ)组为73.2±0.17％)P<0.001。研究结果证明;着床前小鼠胚泡能分泌和合成hCG样糖蛋白物质和PGF_(2σ),而hCG和PGF_(2σ)抗血清对小鼠胚泡着床有显著的抑制效应。     

雌激素在兔胚泡着床中的作用——子宫雌激素受体的研究

为了验证雌激素作用存在于完整的和去卵巢兔胚泡着床过程中,本文用~3H—雌二醇交换法测定了早期妊娠 D_3、D_5、D_7子宫组织的雌二醇受体浓度,并与去卵巢后仅补充孕酮的 D_7子宫作比较。结果显示:在 D_3、D_5、D_7的子宫细胞浆和细胞核中都存在雌二醇受体。妊娠7天去卵巢兔的子宫细胞核中雌二醇受体量与妊娠7天卵巢完整的兔作比较,二者无明显差异。这说明去卵巢后子宫细胞核中雌激素受体浓度并未受影响,因此雌激素作用依然存在。关于胚泡是否有雌激素受体的问题,本工作在胚龄5、6、7天胚泡中未测得雌二醇受体。据此,胚泡着床时,雌激素的作用可能主要通过母体子宫组织而发挥其生理效应。     

CD44基因的分子生物学特性及其与肿瘤关系的研究进展

CD44是一种细胞表面跨膜糖蛋白分子 ,在许多细胞上均有分布 ,如淋巴细胞、单核细胞、红细胞、成纤维细胞、上皮细胞、平滑肌细胞、神经胶质细胞及肿瘤细胞等[1-3 ] 。CD44蛋白属于未分类的粘附分子 ,其正常功能是作为受体识别透明质酸(HA)和胶原蛋白 I、II等 ,主要参与淋巴细胞的激活以及细胞 -细胞 ,细胞 -基质之间的特异性粘连过程 ,CD44基因的变异性、多样性表达与肿瘤的生长及转移有密切的相关性 [4～ 7] 。现将 CD44基因的分子生物学特性、主要功能、在常见肿瘤中的表达及其与肿瘤发生、浸润、转移的关系和可能的转移机制作简要…     

鼻咽癌CD44抑制表达细胞株的建立

目的:构建CD44新剪接变异体siRNA质粒表达载体,建立CD44新变异体抑制表达的鼻咽癌细胞株.方法:合成CD44新变异体特异性干扰DNA片段,干扰DNA片段亚克隆于带绿色荧光蛋白的pGenesil -1.3质粒表达载体中,双酶切和测序鉴定重组表达质粒载体;采用脂质体将重组表达质粒载体转染入鼻咽癌5 -8F细胞系,进行G418筛选;Western blot分析CD44表达.结果:重组CD44干扰DNA片段质粒表达载体的碱基序列和插入方向正确;细胞转染效率达70％;G418筛选获得GFP表达的单克隆鼻咽癌5 -8F细胞株;Western blot分析表明CD44表达受抑制.结论:建立了CD44新变异体抑制表达的鼻咽癌细胞株,为CD44新变异体在鼻咽癌中的生物学功能提供了基础.     

Survivin、Dnmt 和CD44 在胃溃疡及胃癌中表达的差异

胃溃疡(Gastric Ulcer GU)和胃癌(Gastrio Cancer Gc)均是我国乃至全世界人群中的常见病、多发病。近年来,虽然胃溃疡的发病率开始呈下降趋势,但仍属消化系统疾病中最常见的疾病之一,目前已被认为是癌前病变之一。据统计,5%左右的胃溃疡可发生癌变,甚至有统计最高达29.4%的胃癌来自胃溃疡[1]。在世界范围内恶性肿瘤中,胃癌位居第4,病死率位居第2,在我国则居第1位。胃癌发生的分子机制研究表明多基因变异是细胞发生癌变的内因[2]。各种癌基因、抑癌基因和错配修复基因、细胞信号传导通路的异常、细胞周期调控改变及相关产物均对胃癌的发生发展产生影响。如Survivin、DNA甲基化和CD44等均是近年来在胃癌组织中发现的并成为研究热点的基因。通过对Survivin、Dnmt和CD44三种基因在胃溃疡及胃癌中表达的差异的了解,有助于加深对胃癌发生、发展及转移机制的认识,更好的为临床应用中胃溃疡及胃癌的治疗提供理论依据和找到更好的治疗方法。     

干细胞标志物CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4在胃癌组织中表达及其临床意义

目的探究在胃癌组织中干细胞标志物CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4表达的临床意义。方法选择重庆两江新区第一人民医院消化内科收治的51例胃癌患者作为研究对象,同时选取门诊治疗的70例患有其他胃部良性、恶性疾病患者,比较胃癌患者与其他胃部良性、恶性疾病患者CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表达阳性率;比较癌干细胞标记物CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表达与胃癌临床特征之间以及淋巴结状态的关系。表达阳性率,癌干细胞标记物的表达与胃癌临床特征之间比较采用c2检验。结果胃癌组CD133、CD44v6、PSCA、Oct-4阳性率分别为64.71%、68.63%、66.67%、60.78%,与慢性浅表性胃炎、萎缩性胃炎、胃溃疡、胃息肉、胃腺瘤比较表达阳性率明显更高,差异有统计学意义(c2值分别为31.583、33.475、30.171、28.751,P值均为0.000)。中+低分化CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4阳性率分别为55.56%、55.56%、55.56%和58.33%,高于高分化的26.67%、33.33%、26.67%和33.33%(c2值分别为3.547、2.092、3.547、2.648,P值分别为0.069、0.142、0.069、0.104);浸润深度T3~T4 CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4阳性率分别为52.94%、70.59%、58.82%和64.71%,高于T1~T2 CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4阳性率23.53%、41.18%、23.53%和35.29%(c2值分别为3.997、4.113、5.667、3.960,P值分别为0.041、0.032、0.014、0.046);肿块最大径≥5 cm CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4阳性率分别为48.57%、57.14%、45.71%和48.57%,高于<5cm CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4阳性率18.75%、25.00%、12.50%和18.75%(c2值分别为4.097、4.554、5.304、4.097,P值分别为0.037、0.024、0.019、0.037)。转移灶CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表达阳性率分别为50.00%、50.00%、46.15%和53.85%,原发灶CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4的表达阳性率64.00%、48.00%、40.00%和52.00%,两组比较差异无统计学意义(c2分别为1.018、0.020、0.197和0.017,P值分别为0.376、0.894、0.769和0.913)。结论肿瘤干细胞标志物CD133、CD44v6、PSCA和Oct-4表达,在胃癌的临床诊断中作为分子标记使用,与胃癌的分化程度、浸润深度与肿块最大径有关,但与胃癌的淋巴结转移无关,对胃癌的发病情况有指示作用,具有临床使用价值。     

早期胚胎各器官CXCR4和CD44表达的观察

目的通过观察早期胚胎中CXCR4和CD44在全身各脏器的表达,了解不同器官干细胞的表面标志物特性。方法免疫组化SP法检测输卵管妊娠5例完整早期胚胎组织中CXCR4和CD44的表达情况。结果CXCR4大部分器官都见有表达,尤其在骨细胞和神经细胞中为强阳性表达。CD44主要表达于间叶组织中,如舌肌和胃肠的深肌层,以及各器官的纤维组织中,但不表达于骨、神经组织和髓外造血组织。另外,在少数上皮组织中也见有表达,如胸腺上皮细胞强表达和肺粘膜弱表达。在部分组织中CD44和CXCR4的表达模式相反。结论通过免疫组化法观察的CXCR4和CD44早期胚胎发育中特殊的表达为研究干细胞特性提供了良好直观的依据和线索。     

CD44v6、MMP-9、VEGF在胃癌的表达及临床意义

目的:检测胃癌组织中CD44v6、MMP-9、VEGF表达情况及其与胃癌临床病理因素的关系,并探讨其表达与胃裸区侵犯的临床意义。方法:采用免疫组化方法测定60例胃癌组织CD44v6、MMP-9、VEGF表达情况,并结合患者的临床病理资料进行分析。结果:CD44v6、MMP-9、VEGF的表达与胃癌的TNM分期、浸润深度、淋巴结转移有关。胃裸区受侵组与未受侵组胃癌组织的CD44v6、MMP-9、VEGF的表达无明显差异。结论:CD44v6、MMP-9、VEGF的表达与胃癌的浸润转移密切相关,胃裸区是否受侵与胃癌组织的CD44v6、MMP-9、VEGF的表达无关,胃裸区这一解剖结构可能是胃癌预后较差的原因。     

STAT2、CD24和CD44在卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌临床病理特征的关系

目的 探讨卵巢癌癌组织信号转导及转录活化因子2(STAT2)、肿瘤干细胞标记物CD24和CD44的表达与临床病理资料相关性.方法 选取2017年1月至2020年2月我院病理科确诊的卵巢癌患者69例(卵巢癌组)、同期卵巢良性肿瘤患者32例(对照组),采用免疫组织化学法检测两组患者卵巢组织STAT2、CD24和CD44表达...     

CD44V6和MMP-2在甲状腺肿瘤中的表达及其临床意义

目的:研究黏附分子CD44V6和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在甲状腺癌中的表达、相互关系及其与甲状腺癌侵袭转移的相关性.方法:采用SP免疫组化法检测114例甲状腺肿瘤组织中CD44V6和MMP-2的表达.结果:CD44V6和MMP-2在35例甲状腺乳头状癌(Papillary Thyroid Carcinoma,PTC)中阳性表达率分别为70.6%和73.5%,在41例甲状腺滤泡癌(Follicular Thyroid Carcinomas,FTC)中阳性表达率分别为70.7%和75.6%,均高于甲状腺腺瘤和结节性甲状腺肿组织中的表达,差异具有统计学意义(P＜0.05).在甲状腺癌组织中MMP-2和CD44V6的表达具有显著相关性(r=0.4828,P＜0.001).且两者表达与甲状腺癌的临床分期及有、无淋巴结转移显著相关.结论:CD44V6和MMP-2的表达与甲状腺癌分化程度、浸润和转移关系密切.CD44V6和MMP-2检测对甲状腺癌的诊断、分化程度、转移趋势和预后评估具有重要参考价值,是甲状腺癌侵袭、转移和预后判断的分子标志物.     

鲤主要免疫器官CD4L、CD8α和CD8β表达细胞的分布特征

自1975 年在硬骨鱼类中发现T 细胞存在的证据1以来, 单克隆抗体技术、免疫组化和原位杂交等技术的应用, 使鱼类T 细胞及其亚群和功能的研究成为可能。从20 世纪80 年代起, 人们开始尝试通过各种方法例如用胸腺细胞、多聚甲醛固定的胸腺细胞(DLT15)、胸腺细胞膜(WCL9)、肠白细胞膜(WCL38)免疫小鼠进而制备抗鱼类T细胞的单克隆抗体。       

蛋白激酶C对血管内皮细胞锚蛋白、CD44表达及亚细胞分布的影响

通过外源性底物对[γ-32P]-ATP的摄入量来测定豆蔻酰佛波醇乙酯(phorbol-myristate-acetate,PMA)处理后的人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)膜蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)的活性;利用间接免疫荧光标记和Western印迹方法分析蛋白激酶C活性对锚蛋白及CD44的亚细胞分布及蛋白质表达的影响。结果发现HUVECs的锚蛋白及CD44表达水平趋势与PKC活性变化相吻合;PKC活化导致CD44在细胞膜上呈聚集状,而锚蛋白则移位并聚集于CD44处;PKC抑制剂能抑制PKC活化所带来的上述作用。结果表明PKC活化通过磷酸化作用能上调锚蛋白及CD44表达,并同时导致二者发生一致性运动及共分布。     

反义RNA抑制人黑色素瘤细胞表面粘附分子CD44的表达及抑瘤效应

将细胞表面粘附分子ＣＤ４４Ｓ的ＣＤＮＡ反向插入到真核细胞表达载体ＰＭＡＭｎｅｏ－ＣＡＴ和ＭＭＴＶ－ＬＴＲ启动下游,构成ＣＤ４４Ｓ的反应ＲＮＡ载体,将其用电击法导入ＣＤ４４的人黑色素瘤细胞系ＨＭＭ２３９,转录出的反义ＲＮＡ能不同程度地换制ＨＭＭ２３９表面ＣＤ４４的表达,ＣＤ４４的表达被抑制后,瘤细胞与透明质酸的结合力下降,细胞的体外生长速率不受影响,将其接种裸鼠皮下,发现其致瘤性明显降低。     

标准型CD44基因蛋白在78例非小细胞肺癌中表达的定量研究

目的　探讨标准型CD44 (CD44s)基因表达与非小细胞肺癌 (NSCLC)的组织学类型、分化程度以及转移等之间的关系。方法　应用微波 -LSAB免疫组化染色及图像分析 ,测定了 78例NSCLC中CD44s阳性产物的光密度值(IOD)与组织学类型、分化程度和淋巴结转移间的关系。结果　 78例NSCLC的CD44s阳性细胞IOD值 (12 9.8± 12 .2 )与 10例癌旁组织IOD值 (91.3± 11.5 )之间差异非常显著 (P <0 .0 1) ;有淋巴结转移组 (10 9.8± 13.2 )与无淋巴结转移组 (136 .5± 14.8)间差异非常显著 (p <0 .0 1)。组织学类型、不同分化程度之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　CD44s强阳性的病人转移率低、预后良好 ,CD44s可作为预测NSCLC病人预后的指标。     

CD63/ME491在植入前小鼠胚胎及延迟着床小鼠子宫的表达

目的 研究肿瘤转移抑制因子CD63/ME491 mRNA和蛋白在植入前小鼠胚胎及延迟着床小鼠子宫中的表达规律,探讨其在胚胎着床过程中的作用以及雌激素对其表达的调节.方法 应用RT-PCR、免疫荧光、免疫组化技术观察CD63/ME491 mRNA和蛋白的表达规律.结果 在植入前小鼠胚胎中均有CD63/ME491 mRNA及其蛋白表达.CD63/ME491 mRNA在桑葚胚及囊胚期表达较丰富,CD63/ME491蛋白表达于各期胚胎细胞的胞膜和胞浆;CD63/ME491 mRNA在延迟着床小鼠子宫均有表达,但从D5到D8呈下降趋势,雌二醇(E2)激活后mRNA的表达显著上升(P<0.05).CD63/ME491蛋白在延迟着床D5弱表达于上皮下基质细胞,D6～8表达不明显,E2激活后该蛋白明显表达于上皮下基质细胞的胞膜和胞浆.结论 1. CD63/ME491在植入前小鼠胚胎中呈动态表达,提示它参与了胚胎的发育过程;2. CD63/ME491在小鼠子宫中的表达可能受雌激素调节.     

三阴性乳腺癌干细胞的富集及CD44+CD24-/low、CXCR4表达测定

目的:探讨MDA-MB-231细胞经无血清培养富集三阴性乳腺癌干细胞,观察再成球、集落形成及CD44+CD24-/low、CXCR4表达。方法:将MDA-MB-231乳腺癌细胞进行微球体培养,取培养第7-9天的微球体,判断干细胞富集的程度;比较不同细胞浓度对癌球细胞成球率影响;流式细胞仪测定CD44+CD24-/low含量;Western blot法分析CXCR4蛋白表达;单个癌球细胞再成球能力;观察癌球与贴壁细胞集落形成。结果:1).在含20 ng/m L EGF,10 ng/m L b FGF,2%b27无血清培养基中可培养三阴性乳腺癌癌球,1×104/m L、2×104/m L、3×104/m L、4×104/m L、5×104/m L细胞浓度癌球细胞成球率分别为(5.61±0.02)%、(3.23±0.54)%、(2.28±0.48)%、(1.05±0.13)%、(0.91±0.01)%,组间比较差异有统计学意义P值均0.05。2).贴壁MDA-MB-231细胞与癌球细胞CD44+CD24-/low含量分别为(38.54±2.00)%VS(66.35±2.06)%,差异有统计学意义P=0.003。3).癌球细胞CXCR4蛋白表达高于贴壁MDA-MB-231细胞,灰度扫描分析差异有统计学意义,P=0.03。4).单个癌球细胞具有再成球能力。5).软琼脂糖集落形成能力癌球需200个细胞即可见集落形成,而贴壁细胞需1 000个MDA-MB-231细胞。结论:1.通过无血清培养可以富集三阴性乳腺癌干细胞,低细胞密度有利于癌球形成。2.癌球中CD44+CD24-/low含量高于贴壁MDA-MB-231细胞。3.CXCR4在癌球中表达高于贴壁MDA-MB-231细胞。