芽孢杆菌E2菌株纤维素酶性质的研究

芽孢杆菌EZ菌在55C下生长良好．在培养液中能大量积累胞外纤维素酶(190m㈣／L培养液),所产生的纤维素酶为单一的羧甲基纤维素酶((CMCase)。羧甲基纤维素钠(CMC—Na)为其专一性底物。该酶作用的pH为4．5 8．0;最适pH为6．5 7．0;在pH4.0- 8．0范围内较稳定。酶作用的最适温度为55C、;在60C、处理 10、30、60、90以及120分钟后,残余酶活分别为95％、80.3％、41．4％,19.3％和7.0%;在65C和70C处理10分钟后残余酶活分别为59％N 19％。M2+、Ca2+对酶促反应稍有促进作用;Ag-、Mn2-、Cu2-、Fe2-和Zn2+有明显的抑制作用。     

嗜热菌的耐热L-乳酸脱氢酶的研究

从广东各地的热温泉(55—95℃)水样中,分离到200余株最适生长温度高于70℃的极端嗜热菌。其中一株编号为HG25,具有耐热胞内L-乳酸脱氢酶(L—Lactate dehydrogenase EC．1．1．1．27．,简称LDH),有栖热菌属(Thermus)的特征,革兰氏阴性,无芽孢,好氧,不运动,产黄色素,最适生长温度为65—75℃,最高生长温度为85℃,最低为40℃,不水解淀粉,不从葡萄糖产酸,DNA的G+c百分含量为65mol％,L-乳酸脱氢酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素生层析作了初步提纯,比活提高7倍,LDH还原丙酮酸反血的最运温度为6 0℃,最适PH为8 0,酶在70℃稳定,保温10分钟后,仍保留85％的原始酶活力。失活半寿期(t1/2)为85℃10分钟。     

碱性蛋白酶产生菌209的发酵及其酶的基本特性

为了适应皮革工业上酶法脱毛的需要,筛选到一株碱性蛋白酶产生菌209菌株,经鉴定为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。其产酶的发酵培养基成分是：豆饼粉2．5—3.5％,麸皮3.5一4.5％,NaaHPO4 0.4％,KH2PO4 0.03％,CaCl2 0.3％,Na2CO,0．5％。pH9.0(灭菌后)用50升罐,在35—36℃,通气量1：0.5—1：1,发酵31小时,酶活达到5000单位左右,该酶作用的最适PH是9一11,最适温度(反应20分钟)50℃,延长反应时间在40℃以下为宜,塑料袋贮藏11个月酶活力不变,对小白鼠试验无毒。     

苯甲酸1，2-双加氧酶高活力菌株的筛选和发酵条件的研究

从176株细菌中,筛选出苯甲酸1,2-双加氧酶的高活力菌株假单胞菌(Pseudomonas)137。进行了该菌产酶的发酵条件试验。产酶的最适温度为32℃,最适起始pH为6．5—7．0。葡萄糖、麦芽糖和甘油对产酶有明显的抑制作用,苯甲酸钠对产酶有促进作用。氨态氮对菌体生长和产酶是必需的。琥珀酸钠是酶形成的有效诱导物,采用0．1％苯甲酸钠和0．2％琥珀酸钠培养基(pH6．5—7．0),于32℃振荡培养72小时,可获得高活力的苯甲酸1,2-双加氧酶,每克菌体酶活力可达5-8单位。     

嗜碱菌碱性淀粉酶的研究

分离自内蒙古自治区察汗淖碱湖的嗜碱菌株No．1 0-1,好气,运动,细胞杆状,革兰氏染色阴性。该菌生长pH范围为8．0—13．0,最适生长pH1 0.0-ll.0,为专性嗜碱菌。在含淀粉培养基中产生胞外碱性淀粉酶,最适产酶条件是： 碳源为土豆淀粉,氮源为复合蛋白胨,Nacl浓度为2．O％,Na2CO3浓度为1．0—1．5％(pH9．9-10．5)。 酶的最适反应pH为10．0,稳定pH8．0,最适反应温度为50℃。作用于直链淀粉其水解产物为β-构型,主要产物是麦芽糖,其次为麦芽三糖、葡萄糖和麦芽四糖。嗜碱菌No.10-1产生的酶为碱性β-淀粉酶。     

固定化诺卡氏菌细胞生产L(+)酒石酸的研究

用明胶包埋酒石酸诺卡氏菌(Nocardia tartaricans SWl3—57)得到顺式环氧琥珀酸开环水解酶活力较高的固定化细胞。固定化细胞的最适温度为30～45℃,而游离细胞的最适温度为35～45℃。两者的最适pH均为8．0～9．0,固定化细胞的表观米氏常数Km为0．256mol／L,而游离细胞有底物抑制作用,在底物浓度小于0．45mol／L时Km为0．246mol／L。用固定化细胞装柱(y=100ml),pH8．S,温度37℃,稀释速率D=0．25h^-1,以0．5mol／L浓度顺式环氧琥珀酸钠溶液为底物,连续运转53d,平均产L(+)酒石酸66．95g／L,克分子转化率为92．09％,反应器生产能力达到16．58g／L·h。     

产胞外邻苯二酚1，2-双加氧酶的菌种筛选和发酵条件的研究

从112株细菌中筛选出两株产胞外邻苯二酚1,2一双加氧酶的假单胞菌(Pseubomonassp.)。 进行了该菌产酶的发酵条件试验。产酶的最适温度为30℃,最适起始pH为6．8—7-0。葡萄糖、麦芽糖和甘油对产酶有明显的抑制作用,苯甲酸钠对产酶有促进作用。氨态氮对菌体生长和产酶是必需的。琥珀酸钠是酶形成的有教诱导物。采用0.15％苯甲酸钠培养基(pH6.8—7.0),于30℃振荡培养72h,每毫升发酵液酶活力可达10单位。     

产气气杆菌甘油脱氢酶诱导形成的培养条件

筛选出一株产气气扦菌(Aerobacter aerogenes)AS1．490，经甘油诱导培养能在细胞内形成NAD—甘油脱氢酶，每毫升培养液菌体含1—1．4单位酶活力。酶形成的最适发酵条件研究表明：培养基中含3％甘油时酶形成量最高。添加少量葡萄糖或果糖对酶形成有促进作用。无机氮源——铵盐对酶形成是必需的，以硫酸铵最佳，加入0．2％硫酸铵酶活力最高，添加硫酸铵到0．3％或0．4％时，不再增加生物量，酶量略有下降。其他铵盐效能依次为氯化铵、硝酸铵、磷酸氢二铵等。单加有机氮源不利产酶。酶形成的培养基最适起始PH为7．0，生物量亦最高。酶形成的最适温度为30℃，但在20—40℃范围内，生物量随温度的升高而增加。用250ml三角瓶以35mL装液量最适。在上述最适条件下，发酵培养18小时后，细胞生长不再增加。培养至26小时，培养基中甘油基本上完全消耗，这时酶形成量达到最高峰，以后随时间延长酶形成量迅速下降，在42小时后几乎完全消失。     

海洋细菌Bacillus sp．HN07的分离鉴定及所产碱性纤维素酶性质研究

从渤海海域（121°30′00″E,40°25′00″N）海泥中筛选到一株产碱性纤维素酶的海洋细菌。通过形态观察、生理生化特性及16SrDNA序列分析,鉴定该菌株属于芽孢杆菌属（Bacillus）,命名为Bacillussp．HN07。研究表明：HN07最适生长温度30℃,适宜在pH7．0～8．0、含2．0％～3．0％NaCl的培养条件下生长和产酶,并且具有较好的遗传稳定性。酶学性质初步研究显示,HN07所产碱性纤维素酶最适反应温度为45℃,最适pH为8．0,在碱性条件下具有较好的稳定性,具有潜在的工业应用价值。     

新的生化试剂——碱性蛋白酶

碱性蛋白酶(Proteinase BP),是由短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)产生的。它的最适pH为8.5—9.5,稳定pH范围为6—10,最适作用温度为40—50℃,50℃处理10分钟,或50℃处理60分钟     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)降解菌Devosia sp. A8和Paracoccus yeei A9的生理生化及生长特性

由菌株A8和A9组成的人工混菌能够有效地降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)毒素。为了对双菌降解系统进行深入了解,对这2株菌进行严格的生理生化试验,并通过单因素设计,探究不同培养条件(时间、培养基、温度、pH、NaCl质量浓度、抗生素及摇床转速)对其生长状况的影响。通过生理生化试验,进一步确认了菌株A8和A9分别为Devosia sp.和Paracoccus yeei。生长特性研究结果表明：Devosia sp. A8最适宜生长的培养基为多价蛋白胨-酵母粉(PY)培养基,最适pH为8.0,最适培养温度为30℃,最适NaCl质量浓度为5 g/L;而P.yeei A9的最适培养基则为超优肉汤(SOC)培养基,最适pH为7.0～8.0,最适培养温度为35℃,最适NaCl质量浓度为2 g/L。Devosia sp. A8和P.yeei A9的培养条件较为温和,为以后大规模发酵生产以开发DON降解菌剂或酶制剂提供了有利条件。     

一种崂山百合的离体快速繁殖技术

以崂山百合的鳞茎为外植体,通过植物组织培养技术成功获得了再生植株,建立了该植物的快速无性繁殖体系。整个组织培养过程分为芽的诱导、根的诱导和移栽三个阶段。适合芽诱导的最佳外植体是：鳞茎基部,最适培养基是：1／2MS＋0．5mg／LNAA＋0．8mg,LKT＋3％蔗糖。用于生根的最佳培养基是：1／2MS＋0．4mg/LIBA＋3％蔗糖。最适培养温度为25℃．不同基质对组培苗移栽的成活率有一定影响,其中在珍珠岩上的移栽成活率为98％。     

纤维素酶水解糠醛渣生产酵母I．纤维素酶的形成和酶解糠醛渣

本实验研究了康氏术霉AS．3．4290(白色突变株)纤维素酶产生和糠醛渣酶解的适宜条件。在稻草粉固体培养基上,纤维素酶产生的最适条件是：稻草粉细度为0．35厘米筛孔的筛下物;培养基含水量67％左右;pH 6.0—6.5;添加氪源是必要的,其中以磷酸氢二铵(4％)和硫酸铵(2％)为佳;培养温度28℃;时间为3天;葡萄糖在浓度低时,对纤维素酶产生有好处,而浓度过高时(大于6％),反而对酶形成有抑制作用。上述培养物直接用于糠醛渣的酶水解,其酶作用的最适条件是：pH5．0,温度50℃,作用时间48小时。葡萄糖和单宁对纤维素酶有抑制作用。     

脂肪酶产生菌Geofrichum sp. AS 2.1135产酶条件及酶一般性质的研究

在92株能同化油的地霉属菌株中,Geotrichum sp. AS2．1135菌株产脂肪酶活力为50—60u／ml,对其产酶条件的研究表明,不饱和长链脂肪酸和油类有利于酶的形成。在4％豆饼粉作为有机氮源的培养基中,加入0．2％尿素,酶活力显著增加,酶活达150u／ml。用聚乙二醇橄榄油乳化系统测定酶的作用最适pH为8．0,最适温度为4O一42℃。在pH4一9时5℃下存放24小时,或在pH 5和8时45℃保持15分钟,酶活力不变。     

高活力β-淀粉酶菌种的选育和发酵条件的研究

产β一淀粉酶的腊状芽孢杆菌(Bacillus cereus)Asl．447,通过紫外线、亚硝基胍和利福平的反复处理诱变,获得一株具有高活力β-淀粉酶的变异菌株M一3,产酶活力从74u／ml提高到5000—7000u／ml。牛肉汁液体培养基成分为：每100ml牛肉汁中加人蛋白胨1g,可溶性淀粉1g,酵母膏0．5g,NaCl 0．5g pH6．0。该变异菌的最适培养条件是：pH6—6．5 30℃48小时。酶的最适反应条件是：温度40℃,pH7 0,pH稳定范围是6—9,酶的抗热性较差,对可溶性淀粉水解率达85％以上。     

Ferrobacillus sulfooxidans 氧化亚铁离子活力的影响因素

(一)控制Ferrobacillus sulfooxidans 培养液的最适pH1.6—3.0,最适温度25—28℃和充入足量氧和CO2,该菌可以具有较高的氧化亚铁的活力。 (二)7．25×10-7克分子磷酸盐可以促进F．Sulfooxidans 氧化亚铁和固定CO2的作用。 (三)所研究的这株菌,通过对重金属离子浓度的连续适应性培养,可提高对金属的耐力,忍耐金属离子的浓度2％Cu++、Mn++、Zn++和Ni++,1．5％Co++和1％A1++。     

温度、相对湿度和pH对蜜蜂球囊菌孢子萌发的影响

研究了温度、相对湿度和pH对蜜蜂球囊菌(Ascosphaeraapis)孢子萌发3个阶段(活化、膨大、产生萌发管)的影响．结果表明,孢子活化和膨大在15～40和(25～40)±0．5℃范围内受温度的影响不明显(P＞0．05);萌发管仅发生在25～37±0．5℃,最适温度位于(31～35)±0．5℃．相对湿度越大,越有利于孢子萌发,而相对湿度低于80％对孢子萌发极为不利．孢子萌发的3个阶段在pH为5～7．8时几乎不受pH变化的影响,而在pH值较低影响很大．可见,A．apis是一种高度专一的蜜蜂幼虫病原体．     

嗜酸乳杆菌P302菌株产类细菌素最佳条件的研究

目的对产类细菌素嗜酸乳杆菌P302的发酵条件进行研究。方法采用琼脂扩散法测定发酵上清液对大肠埃希菌O139的抑菌活性。结果通过正交试验确定P302产类细菌素的最佳培养基组分为牛肉膏4％、胰蛋白胨0．2％、酵母粉0．8％、碳酸钙0．4％和蔗糖1％,0．4％复合维生素,0．3％Tween-80有利于类细菌素的产生。发酵工艺条件为最适初始pH7．0,最适温度37℃,最佳接种量0．3％,种龄14h,厌氧培养22h。结论通过优化发酵条件和发酵工艺,类细菌素的产量提高了35％。     

海枣曲霉木聚糖酶的提纯和性质

通过硫酸铵分段、异丙醇分段、Sephadex G一100凝胶过滤、及DEAE-Sephadex A-50离子交换柱层析等提纯步骤,从海枣曲霉(Aspetgillu,phornicis)的麦麸培养物抽提液中分离到4个成份的木聚糖酶,分别称之为X一1、X—II、x—III和X—IV。 经7％凝胶浓度的圆盘电泳及薄层等电聚焦分析,x一1、X．IJ和x—Ill皆为均一成分,x—Iv中则仍杂有少量X~llIo X-I的最适pH为4．0,最适温度45℃,在pH 5．0--9．0之间稳定,保温30分钟时的半失话温度t为90℃。X一和x一 的最适 分别为{．及5．,最适温度均为,稳定pH范I 11 IlI pH 50 50~(3画分别为6．0—10．0及7．0--10．0,t1分别为60及55"C。SDS一凝肢电泳法测得x一’、x-r／和x—111的分子量分别为26,500、35。,500及22,000。薄层凝胶等电聚焦法测得三者的等电点分别为{．7、{．4和4．0。在所测定的化学试剂中,Ag’、Hg’’和Mn冲对这三个酶均有较强烈的抑制作用。sDS对x—I活力影响较小,对x_I】和x—Ill则有强烈的抑制作用。脲对X-1的抑制作用大,对X-II和X—Ill的抑制作用小。     

蔗糖酶和葡萄糖氧化酶的共固化

＃ 本文研究了用吸附交联技术共固定化蔗糖酶和葡萄糖氧化酶(GOD)的方法,考查了共固定化酶的动力学性质。试验结果表明:与溶液酶相比较,固定化蔗糖酶和GOD的响应滞迟期分别为3分钟和2分钟,稳态响应时间增加了6分钟和4分钟,Km值增大,pH—活力曲线变宽,最适pH值分别增大0.7和0.64,最适温度则降低7.3℃和16℃。 以活性氧化铝作载体,戊二醛作交联剂制备的共固定化蔗糖酶和GOD,其蛋白质固定化率为62.9％,分解葡萄糖的总速度为441.6IU,当蔗糖浓度为0.2％,以内时其反应速度与蔗糖的浓度呈正相关(r=0.996),使用半衰期1623次,在4℃下保存120天活力残存为83.7％。