卡门柏青霉-PG3脂肪酶的研究

从242株青霉属菌株中筛选出脂肪酶产生菌青霉-PG3。经鉴定,定名为卡门柏青霉(Penicillium camembertii Thom)。卡门柏青霉-PG3在由4％豆饼粉,0.5％糊精,0.75％橄榄油,0.5％K_2HPO_4,0.1％(NH_4)_2SO_4组成的液体培养基中,28℃,振荡培养96小时,发酵液脂肪酶活力(39℃,pH7.0)达60U/ml。PG3脂肪酶以橄榄油为底物,水解反应最适温度为48℃,最适pH为8.0。pH稳定范围6.0—11.0。Cu~(2+),Ca~(2+),Fe~(2+),Pb~(2+)等金属离子对酶活力有抑制作用。PG3脂肪酶对椰子油、菜籽油、亚麻油等油脂的水解率分别达到96％,94％和90％。     

圆弧青霉PG37脂肪酶的生物信息学分析

利用生物信息学软件对GenBank上登录的圆弧青霉PG37碱性脂肪酶(LipⅠ)进行预测和分析。结果表明,PG37LipⅠ全肽含多个疏水区域,无明显跨膜结构域,定位于胞外,N-末端20个氨基酸为信号肽;PG37LipⅠ成熟肽是等电点为6.16的疏水性稳定蛋白质,包含一个Lipase_3的结构域,属于α/β水解酶超家族,含磷酸化位点等多种功能性位点,具有脂肪酸代谢的功能;α-螺旋和不规则卷曲是其蛋白质二级结构的主要结构元件,在三级结构中,Ser132-Asp188-His2413个氨基酸残基组成酶活性中心。     

青霉浅谈

青霉(Penicillium)是世界分布最广的几类真菌之一,对人类非常重要。为配合中学《植物学》“菌类植物”一章的教学,使学生在掌握菌类植物的形态,结构,生活特点等有关知识的基础上,对与人类生活关系密切的菌类有所了解,本文着重对青霉的生活习性、形态、生活史和分类,以及与人类的关系作一叙述。(一)生活习性青霉通常在柑桔及其他水果上,冷藏的干酪及被它们的孢子污染的其他食物上均可找到,其分生孢子在土壤内、空气中及腐烂的物质     

中温碱性脂肪酶的研究Ⅱ.扩展青霉PF868变株产酶条件

本文报道中温碱性脂肪酶高产变株扩展青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｅｘｐａｎｓｕｍ）ＰＦ８６８的产酶条件。研究结果表明ＰＦ８６８最适产酶条件为：碳源玉米粉,氮源黄豆饼粉,起始ｐＨ７．５,产酶培养温度２６℃,移种量１０％;亚适量的豆油有利于产酶;７００ｐｐｍ的泡敌不抑制菌丝生长且有利于产酶;适量的非离子表面活性剂Ｔｗｅｅｎ和Ｓｐａｎ类有利于菌丝生长和脂肪酶的释放。     

中温碱性脂肪酶的研究：Ⅰ.高产菌株—扩展青霉PF868的选育

以扩展青霉(Penicillium expansum)uN-503作为出发菌株,经UV,DES和NTG多代诱变,选育成功产酶水平高达1200u/ml的优良变株——扩展青霉PF868,其酶活力较出发菌株提高了111%;连续传代10次PF868变株的产酶性能并没有衰退,是一个稳定的变株;PF868变株产酶的最适碳氮源和pH与出发菌株有显著的差异;其酶学特性与出发菌株相比也得到显著改善,最适作用温度由42℃降至32℃,更加适合于洗涤剂和工业脱脂用酶的要求.     

分离自赤豆的青霉新种

本文报道青霉属一个新种,分离自赤豆,特点是分子孢子无色,命名为无色青霉模式和自模式的活培养物都保存在中国科学院微生物研究所。     

由扩展青霉PF86产生脂肪酶催化油脂水解的研究

研究了由扩展青霉ＰＦ８６８产生脂肪酶催化水解三种油脂的影响因素与工艺条件,其中包括：水解时间、温度、ＰＨ、酶量、油水比及添加剂,并用气相色谱对产品脂肪酸进行了分析鉴定,初步分析其催化水解的脂肪酸的特异性。     

马尔尼菲青霉的研究现状

本文较系统地介绍了目前国内外有关马尔尼菲青霉(Penicillium marneffei)的研究概况。由于包括艾滋病在内的各种获得性免疫缺乏症易感人群数量的扩大,以及在东南亚及中国南部等马尔尼菲青霉疫源地的经济发展和国际人员交流日益增大的情况下,使这个条件性高致病性真菌感染的疫情有可能出现更大范围的扩散。目前,全球艾滋病患者的马尔尼菲青霉条件性感染已成为判断HIV感染的临床征象,其在HIV感染者中的发病率高达10%～25%左右。所以,有必要对这种区域性高致病性真菌病原和其条件性感染病症进行全面的研究和制定系统的防治措施。现从马尔尼菲青霉的菌学特点、双相形态转换的基因特性、临床流行病学、分子生物学菌种鉴定及临床诊治等方面进行扼要阐述,同时,也将介绍最近相关的研究方向。     

中温碱性脂肪酶的研究：V.扩展青霉PF868碱性脂肪酶在皮革及皮毛脱…

本文报导扩展青霉ＰＦ８６８产生的碱脂肪醇在动物皮革及皮毛脱脂工艺上的应用。试验结果表明：碱性脂肪酶２０￣３０ｕ／ｍＬ的浓度在ｐＨ９．０和温度３０￣３５℃条件下对猪皮、绵羊皮、兔皮及旱獭、狐狸和水貂皮毛具有良好的脱脂效果,脱脂率在８０％以上,高于传统碱法（Ｎａ２ＣＯ３）和表皮活性剂法（ＪＦＣ）。碱性脂肪酶不仅可脱尽皮板深层油脂,而且可以软化皮板。酶法脱脂的成革其抗张强度、伸长率、撕裂强度以及崩裂高度     

中温碱性脂肪酶的研究——Ⅲ.扩展青霉PF868变株碱性脂肪酶的纯化及其酶学性质

扩展青霉PF868变株发酵液经硫酸铵盐析和Sephadex-G-200及Sepharose4B柱层析纯化,获得纯化倍数为32.4的酶粉.该酶分子量为23442Dal.酶学特性表明:该酶的最适作用温度为32℃,50℃保温30min仍保留50%酶活性,最适pH为9.0,作用pH稳定范围在7.0—10.0之间.Ca~(2+)Mg~(2+)对酶有激活作用.Fe~(2+)、Cu~(2+)和Mn~(2+)对酶活力有抑制作用.     

碱性脂肪酶产生菌扩展青霉W—1382的诱变育种

以扩展青毒（Ｐｅｎｉｃｉｌｕｍｅｘｐａｎｓｕｍ）Ｓ－１４作为出发菌株,分别比较ＵＶ、Ｃｏ６０－γ射线、ＮＴＧ单因子的诱变效应和以ＮＴＧ、Ｃｏ６０－γ射线、ＵＶ＋ＮＴＧ作为诱变剂及自然分离在内四代的诱变育种。单因子诱变剂最适剂量分别为ＵＶ１５０ｓ,Ｃｏ６０－γ射线４８０００ｒａｄ,ＮＴＧ３００μｇ／ｍｌ８０ｍｉｎ,比较诱变效果表明：ＮＴＧ最佳,Ｃｏ６０－γ射线次之,ＵＶ较差;连续三代诱变各代诱变剂及剂量分别为ＮＴＧ３００μｇ／ｍｌ１００ｍｉｎ,Ｃｏ６０－γ射线２００００ｒａｄ,ＵＶ３０ｓ＋ＮＴＧ１５０μｇ／ｍｌ,４０ｍｉｎ。复合处理比单因子处理效果好。实验中选育成功高产酶变株Ｗ－１３８２,结合自然分离和诱变育种,其酶活力较出发菌株提高了５３．６％。     

圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化的特性

圆弧青霉突变株ＰＧ３７发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质５２００ｕ的碱性脂肪酶,纯化倍数１６．５,得率３３．２％,在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）上均呈现单一 白质条带。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和凝胶过滤分别测得酶的分子量为２７．５ｋＤ和２９．ｋＤ,表明该酶以单体形式存在。Ｎ末端１０个氨基酸的序列测     

扩展青霉脂肪酶K56R叠加突变对热稳定性的影响

目的:扩展青霉脂肪酶随机突变体ep8是一株热稳定性比野生型有所提高的突变体.获得热稳定性提高的优良菌株.方法:在ep8的基础上利用重叠延伸PCR构建叠加突变重组质粒pPIC3.5K-ep8一K56R,将该质粒电转毕赤酵母(Pichia paaoris)GS115进行异源表达.结果:该叠加突变脂肪酶在毕赤酵母中获得了活性表达.15%SDS-PACE结果分析表明突变脂肪酶PEL-ep8-K56R-GS分子量与野生型PEL-GS一致,约为28kDa.叠加突变脂肪酶在37℃时酶活为852U/mL、野生型为760u/mL、随机突变体为824u/mL,叠加突变体酶活相比野生型提高了21.1%,相比随机突变体提高了3.4%.热稳定性分析数据表明叠加突变脂肪酶Tm值为40.1℃、野生型为38.7℃、随机突变体为39.9℃,Tm值相比野生型提高了1.4℃,相比随机突变体提高了0.2℃.     

分离自海藻的青霉属三个中国新记录种

报道了分离自青岛沿海潮间带海藻的青霉属3个中国新记录种:产红青霉Penicillium rubens、苏门答腊青霉P.sumatrense和葡萄生青霉P.viticola,并对其进行了形态学描述和系统发育分析。研究菌株保存于中国海洋大学海洋生物标本室(OUCMB)。     

K202A突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的影响

利用易错PCR定向进化扩展青霉脂肪酶（PEL）,获得了一株热稳定性有所提高的随机突变体（ep8）,ep8包含有一个氨基酸的改变。为进一步提高其热稳定性,作者利用重叠延伸PCR法,以ep8基因为模板,将第202位赖氨酸突变为丙氨酸（K202A）,构建表达质粒pAO815-ep8-K202A。并将其引入毕赤酵母GS115构建叠加突变体(PEL-ep8-K202A)。同时以野生型lip07为模板构建单点突变体:PEL-lip07-K202A。15% SDS-PAGE 结果分析表明突变体分子量与野生型一致,约为28KD. 表达产物热稳定性分析结果表明: 野生型（PEL）的Tm值为39.03℃,而以野生型为模板进行定点突变得到的单点突变酶（PEL-lip07-K202A）,其Tm却降低了2℃,为37.08℃。叠加突变酶(PEL-ep8-K202A)的Tm为41.66℃, 比野生型酶提高2.63℃,比随机突变体ep8生产的酶（PEL-ep8）的Tm提高了1.21℃。     

E83V对扩展青霉脂肪酶最适作用温度的影响

利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因作了体外定点突变,获得了最适作用温度有所提高的突变体。含突变基因的重组质粒pPIC3．5K-lip-E83V在Pichia pastoris GS115中表达。对突变体表达产物PEL-E83V-GS与野生型表达产物PEL-GS作了比较：前者最适作用温度为45℃,比野生型提高了5℃;其热稳定性基本不变;突变体在37℃下的表达量为188U／mL,约为野生型的80％。最适作用温度的提高可能是由于83位亲水性的Glu用疏水性的Val取代,增加了脂肪酶表面的疏水作用,使其在高温下更适于与底物的结合。     

淡紫拟青霉右旋糖酐酶的形成条件

比较了各种碳水化合物对淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)右旋糖酐酶形成的影响,右旋糖酐是最好的碳源,也是最佳诱导物。不同分子量(17．2—1000kD)的右旋糖酐对酶形成的诱导作用不同,酶的产生随右旋糖酐分子量的增大而增加。用分子量为1000kD的右旋糖酐作碳源时比用17.2kD的右旋糖酐作碳源时的产酶量高40％以上。用右旋糖酐和其它糖的混合物作碳源时,酶的形成受到不同程度的抑制。右旋糖酐酶形成的其它适宜条件：氮源为牛肉蛋白胨,培养基初始pH6．0—7.0.种龄为48小时,在250ml三角瓶中装50ml培养基,于28℃在200r／min摇床上培养6天。     

马尔尼菲青霉凸玻片小培养方法

马尔尼菲青霉是免疫受损人群常见的一种机会性感染真菌,在我国卫生部颁发的真菌危险度分级中属于2类菌,在缺少防护设备的一般真菌实验室是限制操作的[1]。本实验室使用凸玻片小培养观察马尔尼菲青霉生长形态,该方法不仅操作简单、方便、省时,还保证实验人员的安全,也避免实验室污染。现介绍如下。