随机扩增多态性对白色念珠菌分型的估价

利用随机扩增多态性(RAPD-PGR)的方法对48株白念珠菌Candida albicans(Robin)Berkh进行了分析。由初步试验中,随机选用了18种引物,筛选出OPA-14引物,该引物扩增的带型清晰可辨,不同菌株之间扩增的带数6—12条不等,共有6条主带。扩增片段的长度粗略估计在300—2000bp左右。除个别菌株的带型相同以外,大多数菌株之间呈多态性分布,其带型的数目和扩增的片段存在差异。对简单的DNA制备方法,以及RAPD-PCR在临床应用和流行病学调查中的可行性进行了初步探讨。     

随机扩增DNA多态性及其在微生物分型中的应用

用于微生物分型的现代技术包括表型和基因型方法。随机扩增多态性ＤＮＡ是在聚合酶链反应技术基础上发展起来的一种新的基因分型法。主要特点是利用随机寡核苷酸引物扩增基因组ＤＮＡ片段,进而通过凝胶电泳分析其指纹图特征,借以显示不同菌株间存在细微差别。这种方法简单,快速,现已在许多微生物分型中得到运用。     

鲍曼不动杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型的研究

目的 利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对鲍曼不动杆菌进行基因分型建立DNA指纹图谱,调查该菌在各临床科室的流行情况,并将其与药敏谱进行比较.方法 随机收集中南大学湘雅二医院2007年9月到2008年9月分离出的86株鲍曼不动杆菌,采用WHO推荐的K-B法对鲍曼不动杆菌进行药物敏感试验,建立药敏谱,同时利用随机扩增多态性DNA法(RAPD)技术进行基因分型,建立DNA指纹图谱,对二者进行比较,然后结合药敏谱和指纹图谱分析各临床科室鲍曼不动杆菌的感染情况.结果 药物敏感试验将86株鲍曼不动杆菌分为47型,RAPD技术将其分为14型,其中A、F、D、B和L型为5种优势型,其菌株数分别为22、15、11、9和7株.本院ICU,老年病科,神经内科,呼吸内科,神经外科鲍曼不动杆菌检出率较高.结论 RAPD分型方法优于药敏分型,其在流行病学研究上更能证实菌株的相关性,在早期发现和预防感染暴发流行中起重要作用.     

家族传播的口腔白色念珠菌基因型多态性分析

目的检测家族传播的口腔白色念珠菌基因多态性。方法采集35个家庭（119个样本）的口腔牙菌斑,采用PCR ITS1-ITS2基因分型方法,检测、分析家族传播的口腔白色念珠菌基因多态性。结果 18个家庭（18/35,61%）,34个样本（34/119,28.6%）有白色念珠菌感染,11个家庭存在家族传播（11/18,61%）。在5个母子（父子）垂直传播的家庭成员中,白色念珠菌基因型均不一致。在3个呈水平传播的家庭成员中,两家基因型一致,1家不一致。在3个垂直-水平传播的家庭成员中,两家基因型一致,1家不一致。白色念珠菌家族传播基因型差异有显著统计学意义（χ2=26.571,P〈0.01）。白色念珠菌感染与年龄、性别、学历、吸烟、饮酒、义齿和龋病均无显著相关。结论白色念珠菌在口腔定植,受宿主自身遗传背景影响较大,在家族垂直传播中呈明显的基因多态性。呈水平传播的白色念珠菌菌种具有较高的传染性,基因型可保持不变。     

鸡随机扩增多态性DNA最优化体系探讨

以鸡基因组DNA为模板,对RAPD反应程序中一些重要参数进行摸索和优化实验,建立了随机扩增多态性DNA分析反应体系。即反应体积为25μl,Mg^2 浓度为3．0mM,dNTP浓度为0．1mM,模板DNA最为100mg,随机引物浓度为0．3μmol,Tap酶2．0单位;反应循环过程为92℃变性30s,36℃复性40s,72℃延伸1min,共40个循环。该体系可有效地应用于鸡遗传育种研究中,重复性好。     

番茄随机扩增DNA多态性体系的条件优化

利用改进的SDS法提取代号为03748的栽培番茄叶片基因组DNA。对影响番茄随机扩增DNA多态性（RAPD）扩增结果的因素进行了分析,确定了模板、Mg^2＋、dNTPs、引物和Tap DNA聚合酶的适宜浓度及反应的最佳循环次数。实验结果表明,在以下条件下,番茄的RAPD扩增效果较好：20μL反应体系中使用20-40ng的模板、1．5-2．0mmol／L的Mg^2＋、0．15＋0．20μmol／L的dNTPs、0．15-2．0μmol／L的引物、1．0U的Taq DNA聚合酶;94℃预变性5min,然后经94℃变性1min、360℃ 1min、720℃ 1．5min,进行35个循环,最后在72℃时再延伸10min。     

白色念珠菌粘附的研究进展

本文论述了白色念珠菌（简称白念菌）粘附的分子机理和实验模型观察,从病原菌和宿主两方面探讨了白念菌感染的发病机理,并从阻断白念菌对宿主细胞的粘附着手,展望防治白念菌感染的新途径和措施。     

枇杷栽培种的随机扩增DNA多态性(RAPD)研究

运用RAPD(Random Amplified Polylnorphic DNA)分析技术,对江苏省常绿果树研究中心16个枇杷(E．japonic Thunb Lindl)品种的基因组DNA进行了分析,从50个随机引物中筛选出19个引物,可从各个品种的基因组DNA扩增出谱带,总数为233个,其中多态性DNA片段176个,公共性DNA片段57个,表明这些枇杷品种间存在着丰富的遗传多样性。根据DNA片段的电泳结果,计算出品种间遗传相似系数及遗传距离,应用UPG—MA方法建立了品种遗传关系的系统树,将16个品种分成5类。从随机引物中筛选出2个随机引物能从各个品种的基因组DNA扩增出DNA片段,在16个枇杷品种中2个引物扩增出19个DNA片段,其中3个为公共,16个为多态性或单态性DNA片段。这些结果可为枇杷品种鉴定、分类、亲缘关系确立及品种选育中杂交组合亲本选配提供一定的依据。     

野生稻基因组随机扩增多态性DNA(RAPD)分析

用18个随机引物对2份栽培稻、12份包含有六个基因组型的野生稻DNA进行了扩增,共获得147个多态性DNA片断,把这些多态性DNA片断作为遗传位点用UPGMA法计算出各材料间的遗传相似性系数,并作了聚类分析．主要结果如下：1普通野生稻同栽培稻的亲缘关系很近,其中江永普通野生稻更接近于粳稻．2．CCDD组的Oryzalatifolia和EE组的O．australiensis遗传多态性相似。3．B、C、D、E组的遗传多态性相似,组成一个复合体,此复合体与A组的遗传多态性也相似,而F组则相距较远．4．O．mcyeriana和Rhynchofyzasabulata尚未确定组型,RAPD测定结果表明,前者与其它组型的种亲缘关系较远,后者则与AC复合体的种较近．     

小麦随机扩增多态性DNA的反应体系探索

随机扩增多态性DNA(RAPD)是近年来发展起来的一种DNA多态性检测技术。通过以小麦基因组DNA为模板 ,对RAPD反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化试验 ,建立了随机扩增多态性DNA分析应用反应体系。即反应体积为 2 5μ1,Mg2 浓度为 2 0mM ,dNTP浓度为 150 μM ,模板DNA量 5ng～2 5ng ,随机引物量 30ng～ 4 5ng ,Tap酶 1单位 ;反应过程为 90℃变性 30s ,38℃结合 1min ,72℃延伸 2min(最后一个循环 10min) ,共 4 0个循环。该体系可有效地应用在小麦遗传育种研究中 ,重复性好 ,可靠性高。     

肺病患者呼吸道曲霉随机扩增多态性DNA基因型分析

目的：了解肺病患者呼吸道曲霉基因分型状况,寻找肺部曲霉感染的可能来源,为曲霉感染的防治提供参考。方法：选择有呼吸道症状的患者925例作受试对象,收集其鼻腔、咽部分泌物及支气管肺泡灌洗液（bronchoal veolar lavage fluid,BALF）进行真菌培养、鉴定及随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD）基因分型分析。结果：在烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉的RAPD带形图中,扩增条带数在1～11条之间,片断大小在150bp～2kb不等,不同菌株之间扩增条带的数量和扩增片断的大小均存在差异,即使带型完全一致的菌株,有些片断也存在亮度的差异。对分离自同一患者呼吸道不同部位的同种曲霉种内相似性比较的结果显示：虽然来自同一患者呼吸道不同部位的同种曲霉的形态学特征相同,但是基因型特征却存在差异。结论：通过呼吸作用进入肺组织内部的曲霉与患者鼻腔定植的同种曲霉存在差异,提示肺部曲霉的感染可能来源于患者周围的环境中,有效的控制环境中曲霉的污染程度是预防肺部曲霉感染的最有利的手段。     

白色念珠菌对6种抗霉菌药物的敏感性探讨

白色念珠菌对６种抗霉菌药物的敏感性探讨广东省雷州市人民医院检验科湛江５２４２００朱道广东省雷州市人民医院内科吴琴中山医科大学第一附属医院检验科陈菊香念珠菌是霉菌感染中最常见的疾病，感染不同部位可引起不同的疾患，除皮肤念珠菌病外，还有念珠菌性口腔炎、肺...     

幽门螺杆菌临床分离株的随机扩增多态性DNA指纹图分析

目的:建立武汉及周边地区幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染病人胃内分离的Hp的DNA指纹图谱,并进行数理统计分析,探讨Hp基因型与疾病的相互关系,为临床诊断、防治及致病机制提供理论与实践基础.方法:采取随机扩增多态性DNA指纹法(Random amplified polymorphic DNA,RAPD)对48例病人Hp基因组DNA进行PCR反应,其随机引物为:1290 5'-GTGGATGCGA-3'.反应产物经2%琼脂糖凝胶电泳,成像存盘.用统计分析软件(Statistic analysis software,SAS)对Hp DNA指纹图的相似性以及与疾病的相关性进行分析.结果:每个菌株都有其独特的DNA指纹图,显示其基因的多态性;计算机聚类分析显示:Hp DNA指纹图可分为两大类,其与宿主疾病之间有一定程度的相关性(P＜0.05).结论:(1)RAPD对 Hp DNA扩增结果是稳定、可靠的,是一种较好的分型方法.(2)幽门螺杆菌感染所致疾病可能与其基因型相关.     

白色念珠菌对上皮细胞粘附性的观察

念珠菌性口腔炎是口腔的常见疾病 ,病原体以白色念珠菌多见。据报道 [1、2 ] ,口腔粘膜上皮细胞对念珠菌的粘附性与上皮细胞的分化程度有关。我们从健康人的口腔粘膜获取上皮细胞标本 ,与白色念珠菌混合孵育后 ,应用巴氏染色方法来观察念珠菌对各类上皮细胞的粘附性能。1　材料与方法1.1　粘膜上皮细胞的制备　选择 2 0例健康人 (男性 10名 ,女性 10名 ,年龄 30～ 4 0岁 ) ,用无菌棉拭子在口腔粘膜表面反复轻擦 ,将棉试子浸入无菌磷酸盐缓冲液内 (PBS;0、0 1mol/ L ,p H7、2 ) ,摇动棉拭子使上皮细胞落于 PBS中 ,细胞悬液离心 15 min(10…     

大蒜素对白色念珠菌生长的抑制作用

探讨大蒜素对白色念珠菌生长的抑制作用。以NCCLS方案检测了胡桃楸提取物和伊曲康唑(ICZ)、氟康唑(FCZ)、两性霉素B(AMB)和5-氟胞嘧啶(5-FC)对133株白念珠菌体外生长抑制作用。标准菌株JC1A的M IC结果表明大蒜素提取物对白念珠菌的抗菌作用相当于FCZ,略低于ICZ、AMB和5-FC;临床分离株对ICZ和FCZ的耐药率很高,对大蒜素提取物的耐药率较低。大蒜素提取物对白色念珠菌生长有强力抑制作用。     

白色念珠菌蛋白酶与其毒力关系的研究

目的 探讨白色念珠菌蛋白酶活动与其毒力关系。方法的采用牛奶平地检测５４株白色念珠菌蛋白酶的分泌能力,然后选择６侏菌分别经摇瓶培养测定其蛋白酶活力,并以静脉内注射方式感染小鼠进行毒力试验,以小鼠平均生存时间来评价菌株毒力。结果 ５４株白色念珠菌全部能分泌蛋白酶,检出率为１００％。动物试验表明蛋白酶活力愈高的菌株,相应小鼠平均生存时间愈短;蛋白酶活力与菌株毒力直接正相关（γ＝０．９３４,Ｐ＜０．０１）     

胡桃楸提取物对白色念珠菌生长的抑制作用

目的 探讨胡桃楸提取物对白色念珠菌生长的抑制作用。方法 以NCCLS方案检测胡桃楸提取物和伊曲康唑（ICZ）、氟康唑（FCZ）、两性霉索B（AMB）和5-氟胞嘧啶（5-FC）对133株白色念珠菌体外生长抑制作用。结果 标准菌株JC1A的MIC结果表明胡桃楸提取物对白色念珠菌的抗菌作用相当于FCZ,略低于ICZ、AMB和5-FC;临床分离株对ICZ和FCZ的耐药率很高,对胡桃楸提取物的耐药率较低。结论 胡桃楸提取物对白色念珠菌生长有强力抑制作用。