大熊猫精子体外获能的研究

本文通过１６次大熊猫精子体外获能和精子穿透试验,建立起一套大熊猫精子体外获能的有效方法,特别是促获能物质的筛选,将为今后开展大熊猫胚胎移植提供可靠的参考资料。     

大熊猫精子低渗膨胀试验与其他精子质量评估试验相关性研究

利用解冻后的大熊猫冷冻精液,分别进行体外存活试验、顶体反应试验、异种穿卵试验和低渗膨胀试验,并对低渗膨胀试验与其他试验作相关性分析.结果显示:各试验之间存在一定的相关性.精子低渗膨胀率与精子的体外37℃存活时间呈显著正相关,r=0.79(P＜0.05);与体外异种受精率呈极显著正相关,r=0.90(P＜0.01).说明大熊猫精子的低渗膨胀试验可以作为精子质量评价的重要指标.     

大熊猫冷冻精液解冻速度和解冻液中添加Pentyoxyfilline对其解冻后活力的影响

建立大熊猫的精子库,进行远距离圈养大熊猫种群间的人工授精和遗传物质的转运,维持遗传多样性,是目前大熊猫遗传管理的优先方法。要成为最有效的工具,精子库保存的精子解冻后的活力必须很好。本文对大熊猫冷冻精液的解冻速度和解冻液中添加化学激活剂Pentyoxyfilline(PF)后的精子活力进行了试验。试验用的精液采自11只成年大熊猫,精液冷冻速度为每分钟-40℃～-100℃。试验Ⅰ:将冷冻精液放入3种不同温度的水浴中解冻:(1)22℃(慢速解冻);(2)37℃(中速解冻)(3)50℃(快速解冻)。将冷冻前精子活力(78 1±2 9%)和解冻后的平均精子活力进行比较,快速解冻后的精子活力(57 5±5 4%)显著地降低(P<0 05),而中速解冻的精子活力(67 5±3 1%)和慢速解冻的精子活力(73 33±2 1%)与冷冻前的活力接近。试验Ⅱ:使用中速解冻方法解冻精液后,分别加入最终浓度为0mM、1mM、5mM和10mM的PF,然后分别保温15min和24h。在PF(0mM、1mM、5mM和10mM)中分别孵育15min的解冻精子活力,运动状态,活率和顶体正常率在试验期的90min内都很相似(P>0 05)。在1mMPF中孵育24h的精子活力没有变化(P>0 05)。在5mM和10mMPF中孵育过的精子活力(5mM:24 0±4 7%;10mM19 5±3 6%)比没有加PF的对照组的精子活力(38 3±5 2%)显著地低(P<0 05)。而且,在10mM     

黑玛丽精子包特性及pH和温度对其精子活力的影响

通过研究黑玛丽Poecilia latipinna精子包破裂的过程和影响因素、精子运动的情况及影响因素,结果发现,当精液用Hank’s平衡盐溶液(HBSS)稀释约5 min后精子包开始破裂,约12 min后全部破裂。释放出的精子暂时处于休眠状态,约50 min后,处于HBSS稀释液中的精子会被激活。应用计算机辅助精子分析系统对黑玛丽精子在不同pH和不同温度下HBSS中的精子运动百分数、运动时间和平均运动速率进行观察。在pH7~8的中性或弱碱性溶液中,精子运动活力较强;而在酸性(pH<7)或碱性较强(pH>9)的溶液中,精子的运动活力都会降低。在不同温度下的HBSS中精子的活力不同,精子在低温(4℃)条件下的运动时间显著长于在室温(20℃)条件下,但运动速度较慢。本研究初步探讨了黑玛丽的精子包特性以及pH和温度对精子运动活力的影响,旨在对黑玛丽等卵胎生鱼类的人工授精,以及生殖生物学特性等的研究提供更丰富的基础资料。     

大熊猫精子获能和顶体反应过程中钙分布变化规律的研究

应用焦锑酸钾原位定位法对大熊猫精子获能和顶体反应过程中进行钙定位研究,发现未获能精子的 Ｃａ２＋主要结合于顶体前区和赤道段质膜外侧和顶体内膜内侧（核膜侧）;随着获能的进行,Ｃａ２＋进入精子内部并主要结合于顶体区质膜内侧和顶体外膜外侧;顶体反应的精子,Ｃａ２＋结合于顶体内膜外侧、顶体后区质膜外侧和分散存在于释放的顶体内容物中,有些顶体反应精子的顶体内膜外侧结合的Ｃａ２＋特别丰富。精子尾部的Ｃａ２＋主要分布于中段线粒体内,且其内所含Ｃａ２＋含量随着获能和顶体反应而增加。另外尾部致密纤维和轴丝处也有少量Ｃａ２＋分布。     

大熊猫精液品质的研究：精子和非精子的细胞成分超微结构观察

本文对刚接近性成熟大熊猫的精液在电子显微镜下进行精液品质鉴定,观察结果,除少量完成变态的精子外,多数是处在精子发生的各阶段并发育不正常,精液中伴随着大量巨噬细胞和被吞噬的衰亡精子及其碎片。镜检结果不仅说明这只雄性大熊猫性尚未成熟,其生殖系统可能还伴有生理或病理现象,这样的精液建议不能用于配种。     

宽体沙鳅精子超微结构及Na~+、K~+、Ca~(2+)对其精子活力的影响

选取健康的性成熟雄性宽体沙鳅,运用JSM 6510LV型扫描电镜、H-7500型透射电镜及Motic-BA210数码显微镜分别观察了宽体沙鳅精子的超微结构及不同浓度Na~+、K~+、Ca~(2+)对其精子活力的影响。结果显示,宽体沙鳅精子头部圆球形,无顶体,细胞核后端有一植入窝凹陷,凹陷深度为细胞核长径的1/6。中片由中心粒复合体和袖套组成。中心粒复合体分为近端中心粒和基体,两者呈"L"型排列;袖套呈两侧不对称分布,一侧狭长,另一侧肥厚。尾部主要由轴丝组成,为典型的"9+2"型双联微管结构,微管动力蛋白臂明显。以Na Cl、KCl和Ca Cl_2浓度分别为75 mmol·L~(-1)、0.5 mmol·L~(-1)和5 mmol·L~(-1)作为宽体沙鳅精子的激活介质,效果最佳。建议实际生产中选取合适的激活介质进行人工授精。     

哺乳动物精子质量的评价方法

精子的各种功能状态反应了精子的受精能力。检测精子质膜完整性的荧光探针有SYBR－14,SYTO－17,CFDA、CDMFDA、CAM、PI、Hoechst33258、Hoechst33342,其中以SYBR－14结合PI使用效果最好,检测线粒体活性的荧光探针有JC－1、MITO、Rh123,JC-1比MITO和Rh123更适用于检测精子线粒体功能,检测顶体状态的荧光探针有PNA－FITC、PSA－FITC、LYSO－G及CTC等。检测获能状态的荧光探针有CTC。此外,还可以通过检测精子与透明带的结合能力、精子穿入去透明带卵子的能力以及使卵子受精的能力和其后胚胎的发育能力等方面来评价精子的功能状态。     

拯救大熊猫赢得主动,保护大熊猫有了希望──“双控”措施是人工繁殖大熊猫的最佳选择

总结了十余年大熊猫生殖轴系垂体促性腺细胞、睾丸、卵巢、精子、卵子和受精机理以及生殖激素测定经验;分析了大熊猫生殖能力低的根本原因是生殖内分泌失调;提出了“双控”措施,即对雌性大熊猫采用补充外源促性腺激素,促进滤泡发育、卵子成熟和发情排卵,而对雄性大熊猫,采用了人工采精,精液冷冻保存的方法。采用“双控”措施的六年里圈养大熊猫空怀明显下降,获双胎7次,单胎9次,出现了大熊猫繁殖史上空前繁荣的大好形势,从此宣告拯救圈养大熊猫已赢得了主动,保护大熊猫有了希望。     

环境因子变化对平鲷精子活力的影响

进行梯度试验，观察环境条件变化对平鲷精子活力的影响。结果表明，平鲷精子在盐度２５左右，ｐＨ８．２及２０℃时的活力最强，低温保藏２４ｈ后，精子失去涡动能力，注射ＨＣＧ，对成熟雄鱼精子活力没有明显的影响。     

哺乳动物精子冷冻的抗氧化研究进展

人工授精是迄今为止应用最广泛并最有成效的辅助生殖技术,而高品质的精液是提高人工授精受胎率的关键。近年来在家畜精液冷冻保存技术中应用抗氧化剂的研究受到广泛关注,通过添加抗氧化剂降低了精子在冷冻保存过程中所遭受的氧化损伤,提高了冷冻精液质量和母畜的受胎率。可添加的抗氧化剂种类很多,通常有维生素类和酶类抗氧化剂等。针对目前抗氧化剂在大熊猫精液上应用研究甚少的现状,该文对哺乳动物精子的氧化损伤机制和常用的抗氧化剂进行综述,期望对大熊猫的相关研究提供理论依据和参考。     

圈养大熊猫食物丰容对其行为影响的研究

于2006年3、4、7、8月选用成都动物园圈养的两只雄性大熊猫进行了3 种以食物不同投喂方式的丰容试验,即在其生活环境中分别加入装有食物的PVC管和轮胎以及冰冻食物,采用瞬时取样法对其行为变化进行观察,并对所有刻板行为采取行为取样法进行观察记录.结果 表明,冰冻食物丰容显著增加了大熊猫与运动相关的行为,而轮胎和PVC食物丰容对大熊猫的日常行为影响不显著,但是3种丰容方式对减少刻板行为发生频次有不同程度的积极作用.     

低剂量三聚氰胺对小鼠精子质量影响的研究

采用灌胃法,研究了三聚氰胺在1.0 mg/kg、2.0 mg/kg、4.0 mg/kg浓度下染毒35 d时,小鼠体重、精子运动参数和精子形态的变化.结果显示,4.0 mg/kg 处理组小鼠部分精子运动参数显著性降低(P＜0.05),1.0 mg/kg 和2.0 mg/kg 浓度组各项精子运动参数与对照比较变化不显著(P＞0.05);在染毒一周后,2.0 mg/kg 浓度组小鼠体重增长显著性下降(P＜0.05),4.0 mg/kg 浓度组小鼠体重极显著降低(P＜0.01);3个处理浓度组对小鼠精子形态影响均不显著.总之,食物中低浓度三聚氰胺对小鼠精子活性和形态无明显的影响.     

环境因子及超低温冻存对黄姑鱼精子活力的影响

通过测定精子的激活率、运动时间及寿命研究了环境因子变化对黄姑鱼精子活力的影响及超低温冻存后黄姑鱼精子的活力。结果表明,黄姑鱼精子激活与运动的适宜盐度为25～35、适宜pH为7.5～8.5。在pH 8.0～8.5、盐度25条件下,精子激活率达(85.33±2.52)%,运动时间及寿命分别为(336±14.02)s及(405.33±12.22)s。精子激活与运动的适宜NaCl、KCl、MgCl₂及葡萄糖溶液浓度分别为300～500 mmol·L^-1、600 mmol·L^-1、800～1000 mmol·L^-1及900mmol·L^-1;精子在缺少HCO₃^-的人工海水中未能被激活;精子在无Ca²⁺或无Mg²⁺的人工海水中激活率均大于80%,但运动时间及寿命均有所缩短。以Cortland及HBSS溶液为稀释液、10%EG为抗冻剂冻存黄姑鱼精子,冻精激活率>80%,运动时间均超过200s。     

氯化钠浓度对宽口光唇鱼精子活力的影响

本文观察了不同氯化钠浓度对宽口光唇鱼Ａｃｒｏｓｏｃｈｉｌｕｓｍｏｎｔｉｃｏｌａ精子活力的影响,并进一步建立数学模型进行分析论证,得出结论：在氯化钠浓度０—０５１％的范围内,精子快速运动时间和寿命相对延长,但在浓度超过０５１％,精子活动开始受到抑制,活动强度减弱,寿命缩短。     

重金属对滩涂贝类缢蛏精子的毒性作用

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放牧对大熊猫影响的研究进展

大熊猫Ailuropoda melanoleuca作为我国特有的珍稀野生动物,其生存状况及栖息地的状况均受到国内外的高度关注。近年来,大熊猫保护区内放牧活动愈发普遍,其相关研究已成为大熊猫保护方面的热点。本文对已有相关研究进行梳理、总结与讨论,主要从放牧家畜对大熊猫食物资源的影响、大熊猫与放牧家畜的空间分布与利用、大熊猫与放牧家畜的生境选择、大熊猫对放牧干扰的响应以及畜牧业相关政策的影响进行总结,力图归纳已有研究发现,为制定更科学合理的保护管理建议提供依据。同时,也对已有研究存在的问题进行探讨,希望能对今后的相关研究提供参考。     

由大熊猫的年龄结构看其种群发展趋势

四川卧龙自然保护区“五一棚”的大熊猫种群年龄结构已有报道,现据此数据通过Leslie矩阵预测该种群的发展趋势。按3年一个年龄组调整了1978年的数据,估计了各年龄组内1只大熊描3年内出生的幼仔数。并以魏辅文同学的数据,计算出各年龄组的存活率。 预测到2011年,发现该种群增长缓慢。在其种群年龄结构发展到正常状态,即呈金字塔形后(1978年2-5岁组数量太低,结构不正常),年增长率也不过1.66%或1.64%。 “五一棚”是大熊猫最好的栖息地, 保护措施又最得力,增长尚如此缓慢,其他地区恐还达不到这个数字。因此,动物保护事业必须加强,保护措施必须严格执行。