大鳍Hu促性腺激素分泌调控的研究

用非洲鲶鱼促性腺激素放射免疫测定方法测定了Ｃｈａｎｇ科鱼类样品中的促性腺激素含量。用这种方法和鲤鱼促性腺激素β－亚基放射免疫测定法测定大鳍Ｈｕ同一批血清样品结果也相当吻合。通过注射促黄体素释放激素类似物和／或多巴胺的Ｄ２受体拮抗剂地欧酮后,定时取样测定血清促性腺激素含量,证明大鳍Ｈｕ促性腺激素的释放同时受到下丘脑分泌的促性腺激素释放激素和多巴胺的双重调节。但是,多巴胺只能抑制由促性腺激素释放激素诱     

电场刺激对离体温育垂体前叶促肾上腺皮质激素分泌的影响

本实验应用离体温育大鼠垂体前叶组织块结合电场刺激及放射免疫测定方法,观察了垂体前叶内的神经纤维兴奋对促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）分泌的影响以及其它因素的作用。结果表明,一定参数的电场刺激使温育的大鼠四分之一垂体前叶组织块ＡＣＴＨ分泌增加,能被河豚毒素（ＴＴＸ）和藜芦碱部分阻断,此效应也可被地塞米松显著抑制,而同一参数的电场刺激与促肾上腺皮质激素释放激素（ＣＲＨ）诱发的ＡＣＴＨ分泌没有相互作用。经典神经递质受体阻断剂阿托品、心得安、酚妥拉明对电场刺激诱发的ＡＣＴＨ分泌没有显著影响;ＧＡＥＡ＿Ａ受体拮抗剂荷包牡丹碱明显促进此效应。该作用不受Ｐ物质拮抗剂ｓｐａｎｔｉｄｅ的影响,而降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）受体拮抗剂ＣＧＲＰ片段８－３７能部分阻断这一作用。上述结果提示电场刺激所诱发的ＡＣＴＨ分泌可能部分由垂体前叶内ＣＧＲＰ能神经纤维介导。     

大鳍促性腺激素分泌调控的研究

用非洲鲶鱼促性腺激素放射免疫测定方法测定了科鱼类样品中的促性腺激素含量。用这种方法和鲤鱼促性腺激素β亚基放射免疫测定法测定大鳍同一批血清样品结果也相当吻合。通过注射促黄体素释放激素类似物和／或多巴胺的Ｄ２受体拮抗剂地欧酮后,定时取样测定血清促性腺激素含量,证明大鳍促性腺激素的释放同时受到下丘脑分泌的促性腺激素释放激素和多巴胺的双重调节。但是,多巴胺只能抑制由促性腺激素释放激素诱导的促性腺激素分泌,而不能直接抑制基础的促性腺激素分泌,这与非洲鲶鱼相似而与金鱼和鲤鱼等鲤科鱼类明显不同。     

放射对流免疫电泳自显影术测定血清甲种胎儿蛋白

本文介绍放射对流免疫电泳自显影术测定甲种胎儿蛋白(简称AFP)。此方法具有快速、敏感、简易等特点,是一种比较适合农村的放射免疫测定方法。它的检测范围在25毫微克-25微克/毫升之间, ~(131)I-AFP的有效使用期限较长。用此方法进行普查得到了较为满意的结果。对偶尔发生的非特异性反应,可用放射免疫双向扩散自显影术鉴别。近年来,放射免疫测定血清甲种胎儿蛋白已在临床上广泛应用。饱和分析和放射对流免疫电泳定量法,虽可精确定量10毫微克/毫升左右,但操作过程较长,需要计数仪。为了更好地落实毛主席“把医疗卫生工作的重点放到农村去”的伟大号召,简化放射免疫测定是必要的。标记抗原参人火箭电泳自显影法(简称放射火箭自显影)的建立和应用,为普及放射免疫测定AFP开创了新的途径,但建立多种敏感度高、特异性强、并适合于普查用的放射免疫测定法,仍是临床和研究的需要。本文介绍的放射对流免疫电泳自显影术(简称放射对流自显影),可能成为简单、易行,便于普及的放射免疫测定方法之一。     

蛋白磷酸酯酶抑制剂冈田酸对人神经母细胞瘤 SK-N-SH细胞系tau蛋白磷酸化水平的影响

观察蛋白磷酸酯酶-1和蛋白磷酸酯酶-2A的抑制剂冈田酸(okadaicacid,OA)对人神经母细胞瘤系SK-N-SH细胞tau蛋白磷酸化水平的变化,确定tau蛋白过度磷酸化细胞模型的合适剂量和时间。用不同剂量OA与SK-N-SH细胞共温育不同时间,用显微镜观察细胞形态变化,用Western印迹法检测磷酸化tau蛋白和非磷酸化tau蛋白在Ser202位点和Ser404位点磷酸化水平的变化。10～160nmol/LOA与SK-N-SH神经细胞温育3～24h,可引起细胞形态损伤呈剂量依赖性和时间依赖性的变化,起效剂量和时间为10nmol/L和3h。10nmol/LOA与SK-N-SH细胞温育6～24h,磷酸化tau蛋白Ser199/Ser202位点和Ser404位点的表达明显增高,非磷酸化tau蛋白Ser202位点和Ser404位点的表达明显降低,总tau蛋白含量无明显变化。OA可以作为很好的研究tau蛋白过度磷酸化的工具药,10nmol/LOA与SK-N-SH神经细胞共温育6h可以作为制备细胞模型的适宜条件。     

猴肝细胞膜脂蛋白(a)受体的研究

猴肝细胞膜蛋白经 SDS- PAGE和蛋白转移电泳后用免疫印迹法测定 ,硝酸纤维素膜分别与抗牛肾上腺皮质 LDL受体的抗体、LDL、Lp( a)和 PLG温育后见有 3条不同的蛋白条带 ,分子量分别为 370 kd、2 90 kd和 80 kd.用酶标法测定猴肝细胞膜蛋白 ,发现经 Lp( a) + PLG温育后用 Lp( a)抗体反应的结果与 Lp( a)温育后用 Lp( a)抗体反应的结果比较无显著差异 ,而经 Lp( a) + PLG温育后用 PLG抗体反应的结果比单独用 PLG温育后用 PLG抗体反应的作用强 ;同样经 Lp( a) +LDL温育后用 Lp( a)抗体反应的结果与经 Lp( a)温育后用 Lp( a)抗体反应的结果比较无显著差异 ,而经 Lp( a) + LDL温育后用 LDL抗体反应比单独经 LDL温育后用 LDL抗体的反应强 ,排除Lp( a)与 PLG和 LDL的交叉反应 ,实验认为猴肝细胞膜上可能同时存在 LDL受体、PLG受体和Lp( a)受体     

利用草鱼CIK细胞和MTT法测定镉和铬毒性试验的优化

本文利用主要养殖鱼类草鱼的肾脏细胞系CIK为靶细胞,从MTT法的细胞接种浓度、MTT 浓度及温育时间等几个重要参数,研究了对CIK细胞应用MTT法进行化合物毒性测定的条件,并根据最适条件,测定了氯化镉(CdCl2) 和重铬酸钾(K2Cr2O6) 对草鱼CIK细胞的毒性,建立了一种利用鱼类细胞系(草鱼CIK细胞) 进行化合物毒性测定的方法。由于每种细胞系各具有不同的生物学特性及对有毒物质不同的敏感性,因此该测定方法的建立,在水产养殖环境毒理的领域中,将具有一定的应用价值。       

五羟色胺和褪黑素对红细胞悬浮液粘度及红细胞形状的影响

探讨五羟色胺(5-HT,serotonin)和褪黑素(melatonin)对红细胞悬浮液粘度及红细胞形状的影响.建立五羟色胺温育的红细胞-血浆体系、红细胞-HEPES缓冲溶液体系及褪黑素温育的红细胞-血浆体系、红细胞-HEPES缓冲溶液体系;观察各体系中红细胞悬浮液粘度的改变及其形态变化.用正常的红细胞悬浮液作对照进行比较时发现,五羟色胺和褪黑素温育后的红细胞悬浮液粘度显著下降;五羟色胺温育后的红细胞形状呈梭形,而褪黑素温育后的红细胞形状变化不明显.结果提示:神经内分泌系统对血液粘度有直接影响.这对于揭示血瘀症的分子本质和人体在多种生理及病理状态下的血液流变学异常提供了实验依据.     

大鼠胰多肽首次分离提纯

以往由于大鼠胰多肽(RPP)尚未分离提纯,没有纯RPP作为标准和标记物,因而无法建立RPP的放射免疫测定方法。因为没有RPP,人们不得不用牛PP代替RPP,而种属特异性的存在又使实验结果的分析复杂化。为了进一步探讨PP的生理功能,急需分离提纯RPP。RPP分离工作的困难在于缺少敏感的RPP测定方法,因而无法对分离过程进行监测。最近Taylor等制备出一种抗牛PPC-末端6肽的抗体,与RPP有较好的交叉反应,可用于对RPP进行放射免疫测定。作者便是以上述方法作为监测手段,应用凝胶过滤、离子交换层析及高压液相层析等技术,由大鼠胰腺成功     

香烟焦油中稳定性自由基等物质对细胞DNA合成的影响

用苯、乙烷及异丙醇(7:2:1)萃取烟焦油得到含有稳定性自由基的萃取物.萃取物能损伤DNA模板,从而强烈抑制细胞DNA合成.萃取物具有强还原力.升温(20,45和85℃)不但使自由基浓度下降,同时使萃取物还原能力下降,把萃取物与细胞温育后,细胞内出现了一个新的稳定自由基信号,它随温育时间延长而增大,g值为2.0008,不同于萃取物本身的ESR信号(g=2.0032).     

低浓度锌离子对不同细菌病毒的抗性

为了深入研究Zn^2 的抗病毒特性,试验比较了Zn^2 对3种细菌各自噬菌体的复制增殖能力的影响。结果表明：在[Zn^2 ]为20μmol/l时,将Zn^2 与大肠杆菌噬菌体E23温育90min可导致对该噬菌体增殖能力的69．3％的抑制,当[Zn^2 ]为25μmol时,90min的类似温育对北京棒杆菌噬菌体C2复制能力的抑制率为90．0％;而当[Zn^2 ]达150μmol/l,类似的处理对解淀粉芽孢杆菌噬菌体B5m复制增殖能力关性;对一定浓度的Zn^2 ,随着作用时间延长,其抑制作用增强。通过温育作用时间与抑制率关系的分析,表明Zn^2 抑制作用的位点在细菌病毒内部,而不在其外表。     

家鱼下丘脑中LRH含量的一种放射免疫测定方法

以一种新的佐剂葡聚糖硫酸钠为LRH 的载体,加福氏全佐剂和百日咳疫苗免疫动物可以得到与鲤鱼下丘脑LRH 抽提液有交叉反应的抗血清,并以此建立了放射免疫测定方法。鲤鱼二月份和十月份采集的下丘脑LRH 含量有明显的差别。     

大熊猫精子37℃温育时间对其质量的影响

选用活率、运动速度、活力这三个指标对37℃下温育的大熊猫新鲜精液每隔15 min做一次镜检和质量评估.运动速度从第45 min后开始大幅降低(P＜0.05),105 min时活率开始显著降低(P＜0.05);0～45 min内活力为78.8%～75.5%(P＞0.05), 60～90 min内活力为69.5%～64%,变化显著(P＜0.05);90～120 min内活力及运动速度均显著降低(P＜0.05).认为37℃温育时间应该控制在75 min以内;45 min以内精子运动速度、活率、活力处于最佳状态,此时段为首选输精时间.     

肺隐球菌病标本在六胺银染色中的最佳温育时间

目的探索肺隐球菌在六胺银染色中的最适当温育时间,以期获得最佳染色效果,提高病理标本肺隐球菌病的诊断率。方法收集厦门大学附属第一医院病理科2017年1月—2017年12月确诊的30例肺隐球菌感染病例,每例病例选取最具代表意义的一个蜡块连续切片3张,不同蜡块为区组因素,将每个蜡块切取的3张切片简单随机化分为3组,每组1张,通过区组随机化将90张切片随机分为A、B、C 3组,A组切片在六胺银染液步骤中采用水温箱60℃温育20～25min,B组切片在六胺银染液中温育30～35min,C组切片在六胺银染液中温育40～50min。以10分制对90张六胺银染色片进行评分,比较3组切片得分情况、显微镜下的染色效果与诊断准确率。结果 B组切片镜下显示:隐球菌染成空心黑色,细胞核呈蓝色,周围肺纤维组织呈淡棕色至棕色,隐球菌与周围肺纤维组织染色对比清晰,染色效果显著高于A组与C组。结论在六胺银染色中,采用六胺银染液在水温箱60℃温育30～35min,病理切片六胺银染色评分结果得分更高、六胺银染色效果更好、肺隐球菌病的诊断准确率更高。     

关于吖啶橙测定溶酶体H~＋－ATPase转运H~＋的研究

揭示了吖啶橙的吸收光谱和荧光光谱对其浓度依赖性上的区域性特征,分析了测定溶酶体Ｈ￣＋转运时合理选用吖啶橙浓度及溶酶体用量的重要性、机理和原则,探讨了其与溶酶体的温育时间和Ｋ￣＋／Ｈ￣＋交换对测定Ｈ￣＋转运的明显影响。     

不同钙离子浓度对日本沼虾感光器细胞超微结构的影响

为了进一步研究细胞外钙离子浓度变化对甲壳动物感光细胞超微结构的影响,应用透射电子显微镜显示了日本沼虾感光细胞,在暗适应时高钙离子浓度中温育的感光器细胞的感杆束直径下降,微绒毛排列零乱;多囊体、板膜体数量增加;色素颗粒散布在细胞质中,呈现出光适应的结构特征。而温育在低钙离子溶液和生理溶液中的感光器细胞结构相同,呈现出暗适应的结构特征。另外,细胞器中储存的钙离子也受细胞外钙离子浓度的影响,在高钙离子溶液中温育后细胞器储存的钙离子量增加,膜下储泡囊、多囊体、线粒体、色素颗粒等细胞器中的焦锑酸钙结晶颗粒比温育在低钙溶液中的细胞明显增多。结果显示,细胞外钙离子浓度变化引起细胞内钙离子浓度变化,从而影响感光器细胞的结构而影响其生理功能。     

G_(M1)介导的体外培养神经元对CT-HRP的内吞

本实验用霍乱毒素辣根过氧化物酶复合物(CT-HRP)与培养的新生大鼠小脑细胞直接结合的电镜细胞化学方法,表明神经节苷脂G_M1只分布在细胞膜的外侧面;神经细胞表面的G_M1含量比胶质细胞高。通过电镜还观察到神经细胞和少突胶质细胞对结合在膜上的CT-HRP的不同内吞过程。培养的细胞在4℃与CT-HRP孵育1小时后,CT-HRP仅结合在细胞膜的外表面,无内吞现象出现。如将标本再移入36.5℃中温育,15分钟内即出现神经细胞对结合在膜上的CT-HRP的内吞,称为受体介导的细胞内吞(RME)。RME不仅发生在神经细胞的胞体部位,在突起上也多见。神经细胞RME的特点是包含G_M1-CT-HRP的内吞小泡必先进入与膜的再循环有关的GERL区。当温育延长至3小时,细胞膜上的结合CT-HRP的数量与温育初期无明显差异,内吞小泡仍在GERL区,并可见胞体和树突内若干阳性小泡成串地沿微管排列,在细胞膜内侧的胞浆内也有较多的阳性小泡分布。少突胶质细胞在温育15分钟内吞入大部分结合在膜上的CT-HRP,形成大量内吞小泡,弥散地分布在细胞质内。随着温育时间的延长,内吞小泡彼此融合,最终与溶酶体融合。本文就这两种细胞对CT- ??HRP的不同内吞的可能原因及其生物学意义进行了讨论。     

黄花蒿中青蒿素含量的RP-HPLC法测定

建立黄花蒿中青蒿素的高效液相色谱测定方法,采用柱前衍生RP-HPLC法测定黄花蒿中青蒿素的含量,采用ZORBAXXDB-C18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱,甲醇-0.01mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液(pH5.8,体积比62∶38)为流动相;检测波长:260nm;流速:0.8mL/min;柱温:30℃。对广西、沈阳、北京、郑州、苏州和杭州等不同产地的野生黄花蒿样品、以及同一产地不同采集时间黄花蒿样品进行检测,结果表明不同地区青蒿素含量差异很大,同一地区不同采集时间黄花蒿样品的青蒿素含量也有差异。该法准确可靠、重现性好,能准确地反映青蒿素含量的检测。     

巨噬细胞、内皮细胞对高密度脂蛋白的氧化修饰

为了探讨高密度脂蛋白 (HDL)在体内发生氧化修饰的部位及机制 ,分别观察了培养人动脉平滑肌细胞 (SMC)、动脉内皮细胞 (EC)及巨噬细胞 (MΦ)与HDL共同温育过程中 ,HDL的琼脂糖电泳相对迁移率 (REM)、硫代巴比妥酸反应物质 (TBARS)以及溶血卵磷脂 卵磷脂 (LPC PC)值等氧化指标的变化 .结果发现 ,HDL与 3种细胞温育 12h时 ,HDL几乎不发生氧化修饰 ,而HDL与MΦ和EC温育 2 4h后 ,其REM、TBARS、LPC PC值均显著上升 (p <0 0 1) ;而HDL与SMC温育后 ,其REM、TBARS值无显著改变 ,LPC PC值增加 (p <0 0 1) .结果提示 ,活体内HDL可能主要在动脉壁的内皮细胞及巨噬细胞的作用下发生氧化修饰     

诸葛菜去膜精子在爪蟾卵提取物中实现非细胞体系核重建

动物爪蟾(Xenopus laevis)卵提取物诱导植物诸葛菜(Orychophragmus violaceus)去膜精子实现非细胞体系核重建. 诸葛菜去膜精子在爪蟾卵提取物中温育30 min左右开始膨大, 随着温育时间的延长, 膨大的精子染色质逐渐去凝集. 电子显微镜观察和荧光显微镜观察均表明重建核有核膜的装配, 膜泡在去凝集的染色质周围逐渐融合形成双层核膜. 用细胞分级抽提整装电子显微镜技术观察到重建核中有核纤层和核骨架结构的装配.