L-异白氨酸发酵的研究II．用糖质原料直接发酵生产L-异白氨酸

由钝齿棒状杆菌(Corynebacterium crenatum) AS 1.542经亚硝基脏诱变获得抗弘氨基a-氨基-β-羟基戊酸的突变株AS1.998,它的生长不再受外加的L-异白氨酸抑制。在含葡萄糖10％,硫酸铵4．0％,磷酸氢二钾0．1％,玉米浆0．75％,麸皮水解液0．5％,碳酸钙4.5%的培养基中,接种置2．5％,28℃振荡培养3天,L-异白氨酸的积累量达14毫克／毫升以上。用铜盐法制备的产品,经纸上层析,聚酰胺薄膜层析、比旋光度测定和生物鉴定,确证是L一异白氨酸。     

L-异白氨酸发酵的研究IV．L-异白氨酸生物合成调节机制的初步研究

钝齿棒状杆菌新种AS 1．542,及其诱变株AS 1.998均含有Tdase、AHAase及Taase活性。试验了二价离子及pH对酶活性的影响。测定了Tdase及AHAase受末端氨基酸反馈抑制的程度,及表观米氏常数。结果表明,Tdase及AHAasc均有两个酶反应最适pH。Leu、Ileu、Val及KB对酶活性均有负反馈抑制作用。AS 1.998的Tdasc受Ileu、Val的负反馈抑制作用减少;其AHAase总活性明显增加。由此认为诱变株AS 1.998受到的末端氨基酸反馈控制作用被部份解除,从而导致该菌积累Jleu．     

直接利用糖质原料生产L-苹果酸菌种的选育

从土壤中筛选到一株产L－苹果酸的黄曲霉菌,经紫外线、亚硝基胍（NTG）、硫酸二乙酯（DES）和^60Co辐射等诱变处理,并经多次分离得到一株性能稳定的高产L－苹果酸突变株黄曲霉HA5800,35℃,200r/min摇瓶发酵120h,产L－苹果酸72g/L、糖酸转化率为74．22％,经山东省卫生防疫站检定,该菌株不产黄曲霉素素B1。     

直接利用糖质原料产L-丝氨酸谷氨酸棒杆菌glyA基因序列分析

以能够利用糖质原料产L-丝氨酸的谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）SYPS-062 glyA基因为研究对象,比较cglutamicum SYPS-062与C．glutamicum模式菌株ATCC13032的glyA基因的异同。分别以SYPS-062及ATCC13032基因组为模板,利用PCR技术获得丝氨酸羟甲基转移酶编码基因glyA。核苷酸序列分析结果表明,来源于SYPS-062和ATCC13032的glyA基因片段全长均为1305bp,编码434个氨基酸,分子量为46．5kD,基因的同源性为99．54％,存在6个核苷酸的差异,引起一个氨基酸残基的突变。将获得的基因分别在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中诱导表达。酶活测定结果显示,2种不同菌株来源的重组SHMT的比活力稍有差异,说明SYPS-062 glyA基因的差异对其表达产物SHMT蛋白构型及功能影响不大。提示对于C.glutamicum SYPS-062能够利用糖质原料产L-丝氨酸的机制解析应进一步从glyA基因的转录水平、翻译水平及胞内SHMT辅酶的供给情况等方面进行深入研究探讨。     

产L-白氨酸突变株的选育及发酵条件的研究

钝齿棒状杆菌(Corysebacterium crenatum) AS 1.542经亚硝基胍连续诱变处理,选育出产大量L-白氨酸的突变株AS 1.1004。该菌以生物素为必需生长因子,酪蛋白水解物对生长有促进作用。当培养基中含生物素5—50徽克／升时,L-白氨酸的积累随生物素含量增加而提高;葡萄糖和醋酸铵是大量产生L-白氨酸的最适碳源和氯源。在含葡萄糖1 0％,硫酸铵2％,醋酸铵2％,KH2PO40．1％．MgSO47H2O 0.04％,FeSO4 7H2O2毫克／升,MnSO4 4H2O2毫克／升,生物素50微克／升,硫胺素·HCl 300欹克／升,蛋白胨0.3％,酵母膏0.3％,CaCO,2％,pH7.0的培养基中,于旋转式摇床上,28℃培养4天,产L-白氨酸14毫克／毫升以上。用强酸性阳离子交换树脂(H+型)提取的产品,经红外吸收光谱,薄层色谱,比旋光度,元素分析和生物测定法检定,证明该产品系L．白氨酸。     

谷氨酸棒杆菌一步法发酵糖质原料生产γ-聚谷氨酸

γ-聚谷氨酸在食品、化妆品、生物医药等领域具有广泛的应用,目前主要的生产菌株是谷氨酸依赖型菌株,在生产过程中需要添加谷氨酸作为前体,因而生产γ-聚谷氨酸的成本较高。文中主要研究从糖质原料一步法发酵合成γ-聚谷氨酸的生产工艺。首先,从产γ-聚谷氨酸的菌株枯草芽孢杆菌中克隆γ-聚谷氨酸合成酶的基因簇pgs BCA,在谷氨酸棒杆菌模式菌株ATCC13032中进行诱导型和组成型表达,结果显示,仅诱导型表达菌株可以积累γ-聚谷氨酸,产量为1.43 g/L。进一步对诱导条件进行优化,确定诱导时间为2 h,IPTG浓度为0.8 mmol/L,γ-聚谷氨酸产量为1.98g/L。在此基础上,在一株高产谷氨酸的谷氨酸棒杆菌F343中外源表达pgs BCA,对重组菌进行发酵,结果表明,在摇瓶发酵中γ-聚谷氨酸产量达到10.23g/L,在5L发酵罐中产量达到20.08g/L;继而对γ-聚谷氨酸进行分子量测定,结果显示,产自F343重组菌的γ-聚谷氨酸的重均分子量比产自枯草芽孢杆菌的提高34.77%。文中构建了一步法发酵糖质原料生产γ-聚谷氨酸的新途径,同时为开发其潜在应用奠定了基础。     

L-正白氨酸的立体控制合成

本文报导了立体控制合成 L-正白氨酸的新方法。由“+”-2—羟基蒎烷-3-酮与(-)—甘氨酸(艹孟)脂缩合,而得双不对称诱导体系。在-78℃下与碘代正丁烷反应,水解,得到 L-正白氨酸,e、e 值高达96%。该体系在0℃下反应,所得的正白氨酸,e、e 值达91%。     

L-赖氨酸的发酵生产

<正> 赖氨酸是一种有机酸,又名2.6一二氨基巳酸,因其带有氨基,故属于氨基酸类。赖氨酸有L-型和D-型两种构型,微生物产生的为L-型。L-赖氨酸(以下略称赖氨酸)是人和动物最重要的必需氨基酸,在蛋白质营养中     

L-赖氨酸的发酵生产

<正> 赖氨酸是一种有机酸,又名2.6一二氨基巳酸,因其带有氨基,故属于氨基酸类。赖氨酸有L-型和D-型两种构型,微生物产生的为L-型。L-赖氨酸(以下略称赖氨酸)是人和动物最重要的必需氨基酸,在蛋白质营养中     

糖质溶液中发酵生产灰树花胞外多糖的研究

研究了葡萄糖浓度和pH值调控对糖质溶液中发酵生产灰树花胞外多糖的影响。葡萄糖浓度为5％时胞外多糖产量最高;发酵液pH控制为3．5－4．0时有利于胞外多糖的合成;并守试了重复使用菌丝体在糖质溶液中发酵生产灰树花胞外多糖的新方法。     

提高L-胱氨酸生产效益的方法

<正> L—胱氨酸是从废杂毛中提取的重要的生化产品,它有着广泛的用途,国内外的需求量较大,近年一直供不应求。我国有着丰富的胱氨酸生产资源,从事胱氨酸生产的企业逐年增加(特别是乡镇、个体企业)但总的看来效益不是很好。究其原因。管理不善,操作粗,原材料涨价和技术不过关,是主要的因素。     

L-胱氨酸生产中铁质的脱除

本文从理论上研究人发水介生产L-胱氨酸工艺中用EDTA除铁,实际上是不可行的;控制精制中和终点pH2,使收得率下降;而用H_2S除铁是行之有效的办法,具有成本低、效果好的优点。     

糖蜜原料发酵生产谷氨酸 Ⅱ.表面活性剂法

废糖蜜由于含有大量生物素,如直接用作谷氨酸发酵原料只能使菌体徒长而不产酸,因此必须进行处理,以除去生物素,或者采用生长抑制剂的方法,才能得到正常的谷氨酸产量。有文献报道在生物素过量的培养基中添加某些表面活性剂可以达到正常的谷氨酸产量,这引起了     

糖蜜原料发酵生产谷氨酸 Ⅰ.糖蜜流加法

废糖蜜是发酵工业的廉价碳源,一向被用于酒精、丙酮丁醇、酵母和柠檬酸等的发酵生产。考虑到我国味精工业发展的需要,从节约粮食、降低成本出发,我们曾对黄色短杆菌617以糖蜜为原料发酵生产谷氨酸进行了一系列的研究。通过大量试验,最后确定采用糖蜜流加法对以糖蜜为原料发酵生产谷氨酸是适宜     

利用天然纤维废弃物发酵生产L-乳酸的研究

为了降低L-乳酸的生产成本,更好的实现生物质秸秆的资源化,利用天然纤维素依次接种经离子注入诱变处理的木聚糖酶高产菌黑曲霉P602和米根霉RL6041高产菌进行固、液体二次发酵的方法,将其转化成用于工业生产的L-乳酸。结果表明:本实验条件下,未经过任何化学预处理的秸秆等物质接种黑曲霉P602进行固体发酵,产生的木聚糖酶活力为6 320 IU/g干(培养)基,纤维素酶活力为29 IU/g干基;加入100 mL水浸提后,产生的还原糖浓度为14.07 g/L,纤维物质糖化率为79.45%。取滤液接入米根霉RL6041进行液体发酵后,生成乳酸的量为7 g/L,糖酸转化率为47.6%,以(NH4)2SO4作为氮源时,最佳氮源浓度为3 g/L。     

L-乳酸发酵的研究

本文报导了L-乳酸产生菌筛选、发酵条件以及发酵产物鉴定的结果。从56株根霉中筛选出10株产L-乳酸较高的菌株,其中根霉R47产L-乳酸最高,产酸稳定。发酵条件试验结果表明,该菌最适发酵培养基组成(％)：葡萄糖15,尿素0．2,KH 2PO40．02,MgSO4·7H2O0．025,ZnSO4·7H2 0 0．0044,CaCO3,6,7;pH6．7。在摇瓶培养条件下,35℃48小时,产L-乳酸达11．84 g／100 ml,对糖的重量转化率达78,9％。发酵液经离子交换等方法纯化,得到无色或微黄色透明糖浆状液体。经纸层析、比旋光度测定、紫外光谱和红外光谱分析证明确系L-乳酸。