植物遗传工程

921080转化植物细胞的物理方法仁英」/Oard,J.H。jB ioteehnol.Ady一1991,9(i)一i~12〔译自DBA,1991,10(15),91一08688」 综述了植物细胞转化的物理方法,包括微注射;粒子枪(微弹射)法;放电粒子加速法和其它转化法(如花粉管途径、针头注射分孽、超声波、气枪粒子轰击法、DNA的隋性浸溃和激光法)。用粒子加速或微注射技术已使外源基因在转基因植株及比子代中转化并表达。一可用细胞映养物或胚状 体作导人选择性标记(如乙酞乳酸合酶、氯霉素乙 酞转移酶、声一葡糖若酸酶等G种)基因的靶子, 这些基因在核或叶绿体中稳定表达。以将玉米(Zoa …     

新的单子叶作物高效表达载体

微弹导入系统(包括向细胞中射入覆盖DNA的颗粒)是一种成功的转化手段,却在单子叶植物如禾谷类作物上遇到麻烦,这导致人们研究寻找更加有效的启动子。CaMV(花椰菜花叶病毒组)35S RNA启动子和玉米乙醇脱氢酶启动子已被广泛用于植物转化,但在水稻细胞中效果不佳。Cornell大学由Ray Wu牵头的研究小组报导,用肌动蛋白基因启动子可使转化成功。 Act1肌动蛋白基因启动子在所有水稻细胞中均大量表达。初步实验表明,Act1启动子可促进β-葡糖     

最新专利文摘

CN1712518:微生物转化异丁香酚制备香草醛的菌种和方法本发明涉及一株从土壤中筛选获得的纺锤芽孢杆菌CGMCC1347(SW-B9)及其培养发酵,并用于转化异丁香酚制备香草醛的方法。在优化条件下发酵培养,发酵液或游离细胞或其固定化细胞用于异丁香酚转化24~96 h,转化液中含香草酸2~4 g     

烟草花叶病毒外壳蛋白嵌合基团的重组

普通烟草花叶病毒外壳蛋白基因已和花椰菜花叶病毒35S启动子及3′未端重组成嵌合基因。在连接了用于筛选在土壤杆菌中导入外源基因的新霉素磷酸转移酶Ⅰ(NPT Ⅰ)基因和用于筛选在植物细胞中导入外源基因的嵌合的新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NPT Ⅱ)基因后,已导入一个去致瘤基因的Ti载体T-DNA区中。这种在Ti载体T-DNA区带嵌合的烟草花叶病毒外壳蛋白基因的土壤杆菌菌株,可以用来转化植物。观察在转化植物中表达的这种外壳蛋白能否延缓或减轻烟草花叶病毒对它们的危害。     

微轰击及“致死区”

今年植物组培协会(TCA)年会的座谈会似乎更加致力于战争新闻,在整个会议期间每天都能重复地听到"致死区"这个术语,似乎已成为一具重要意义的话题.显然,在TCA会议和关于植物组织及细胞培养的国际会议两周后,微轰击已成功地用于植物细胞、组织及植物的遗传转化,并已成为许多研究人员选择的方法.Dekalb-Pfizer Genetics公司的W.J.Gordon-Kamm描述了利用此技术获得稳定的抗Bialaphos的转     

VP7/IFNα-2b融合蛋白防治轮状病毒腹泻的可行性

轮状病毒(RV）外壳蛋白VP7可用作抗原;通过构建植物表达载体,将该抗原基因导入植物细胞,最终在植物细胞中获得抗原蛋白的表达;这种蛋白能保持自然免疫特性,口服能诱发粘膜免疫反应,从而达到对RV的预防作用。干扰素作为一种广谱的抗病毒蛋白质,能对RV引起的肠炎起治疗作用。本提出利用干扰素与轮状病毒表面抗原融合蛋白用于防治轮状病毒腹泻的构想,并对其可行性作了探讨。     

利用微束激光穿刺法将抗真菌基因导入棉花的研究初报

以棉花感受态萌动种胚作为外源基因转化的受体,用激光微束穿刺法将β-1,3-葡聚糖酶及几丁质酶双价基因导入棉花,所构建的植物表达载体pB IBGC携带有筛选标记npt-Ⅱ(新霉素磷酸转移酶)基因。激光转化处理的种胚经卡那霉素筛选,已经获得抗性小植株。研究了微束激光转化法用于棉花感受态萌动胚转化预培养的时间、高渗液对材料的处理等。研究表明:用微束激光转化处理种胚是一种操作简便、重复性好的转化方法,用该法可将外源基因导入植物感受态萌动胚,避开植株离体再生的困难。     

农杆菌介导法与基因枪轰击法结合在植物遗传转化上的应用

根癌农杆菌介导法(Agrohacterium mediated transformation)和基因枪轰击法( particle bombardment transformation)是植物遗传转化的主要方法。两种方法各有优缺点．农杆菌介导法是一种天然的植物遗传转化系统,外源基因在转基因植物中的拷贝数低,遗传稳定性好;基因枪转化法不受材料基因型的限制。通过结合两种方法的优点,发展了3种农杆菌介导和基因枪轰击法相结合的遗传转化方法,分别为农杆枪法、基因枪轰击／农杆菌感染法、金粉或钨粉包裹菌体细胞作为微弹轰击法。对3种结合转化方法的技术途径、原理、转化受体及研究进展等方面进行了综述。     

用激光微束法将外源基因导人水稻细胞的研究

将外源基因导入植物细胞是植物基因工程的关键步骤之一。用激光微束技术转化动物细胞已经取得了成功,并证明外源基因已整合到细胞染色体上。最近又证明激光微束可穿透植物细胞壁和细胞膜,将pBR322DNA导入植物细胞和细胞器。本实验在利用激光微束技术将外源基因导入水稻培养细胞上进行了探索。 所用外源DNA是pBI121质粒,该质粒带有CaMV35启动子和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因,用     

微细胞(microcell)的制备及其生物学特性

本文比较了单纯用秋水酰胺(1μg/ml)和秋水酰胺(1μg/ml)加细胞松弛素B(1μg/ml)复合处理体外培养的细胞株的微细胞生产率,发现后一种方法大大提高了微细胞的获得率。对于微核化细胞的离心脱核方法以及粗制的微细胞纯化方法亦作了改进。同时研究了微细胞的存活时间以及它的大小等生物学特性。并且研究了CHO Wg3-h SL7 HFC四种细胞在秋水仙胺和秋水仙胺加细胞松弛素B复合处理后的微核率,发现后一种方法能促进细胞的微核化,但不同的细胞株对这两种有丝分裂阻断剂敏感性差异很大,体外未经转化的人的正常成纤维细胞对有丝分裂阻断剂的敏感性与细胞年龄有密切关系,越年轻越敏感。     

微流控芯片在植物细胞研究中的应用进展

植物细胞的传统分析方法是将植物细胞在土壤或者琼脂平板上生长,然后在温室或植物生长室内观察植物的表型。这种方法耗时耗力,且结果分辨率比较低。微流控芯片具有微型化、体积小和高通量等特点,且可在微米水平精确控制植物细胞生长的微环境。因此,能够降低实验成本,缩短实验时间,并且可以达到单细胞水平的分析和鉴定。首先介绍了微流控芯片的加工材料和制备方法,总结了用于植物细胞研究的微流控芯片,重点阐述了近年来微流控芯片在植物根、花粉管、原生质体和细胞壁动力学等植物细胞研究中的应用进展,并展望了微流控芯片在植物细胞研究的应用前景。     

植物遗传工程

940312稳定转化的植物细胞中骨架连接区增强报道基因表达〔英〕/Allen,G.C.…/Plant Cell一1993,5(6)一603~613〔译自DBA,1993,12(17),93一09903〕 酿酒酵母自主复制片段ARS一1含有一个能离体与植物核骨架结合的骨架连接区(S AR)。为了试验对基因表达的效应,将一个位于该片段侧翼的、在CaMV 355启动子调控下的,GUS基因的构建物通过微轰击转送到烟草NT一1悬浮细胞中。在稳定转化的细胞系中,含两个侧翼SAR构建物的GUS活性比缺少SAR的对照平均高12倍。表达水平不与基因拷贝数成比例。而在某些含多基因拷贝的转化体中,该片段似乎是…     

用单个花粉粒的体外授粉及其培养

把DNA转入完整植物细胞的新方法有:微注射法、激光微穿孔法和微弹轰击法。用这类方法转化的单个花粉粒对于植物育种具有重要价值。采用这些个体花粉粒通过体外授粉把外源遗传物质转入植物中,或者是通过体外培养产生转化的单倍体植株。 Calgene公司的H.Hauptli和Williams采用玉米穗段的体外培养物发展了一种单个花粉粒传粉、受精和正常核发育的方法。他们获得的单个花粉粒使受精频率最高可达75％,平均为23％。这是使用完整植株或培养穗轴段的其它单个花粉粒授粉速度的两     

国外科技简讯

英推出 新的植物转化技术 据英国AgBiotech News andInformation1994年3月第43N页报道: 英国扎纳卡种子公司最近推出了一种新的植物转化技术。这种技术把DNA、植物细胞和碳化硅(金钢砂)晶体混合在一起。碳化硅晶林的大小为1微米×20微米。它们可以使植物细胞壁产生微小的孔洞,从而使DNA得以进入细胞。     

人上皮细胞角蛋白纤维结构转化的分析

用0℃冷冻处理2—3 h,一些PcaSE-1和BEL-7404细胞的角蛋白纤维能部分地转化成凝聚颗粒,但在HeLa 和CNE 细胞中不发生这种角蛋白纤维结构转化。当回复温度到37℃15—30 min 时,PcaSE-1 和BEL-7404细胞的这种结构转化能快速回复。相反,在HeLa 和CNE 细胞有丝分裂时,角蛋白纤维能转化成凝聚颗粒,但PcaSE-1细胞和BEL-7404细胞的角蛋白纤维网始终维持纤维状态,且围绕纺锤体分布。上述结果表明:两类上皮细胞角蛋白纤维结构的转化似由不同因子所引起。我们的结果还指出:(1)单用秋水仙素或用秋水仙素和细胞松弛素D 合并处理PcaSE-1细胞不能引起角蛋白纤维凝聚。但经秋水仙素解聚微管后,会增强细胞对冷处理的凝聚反应。(2)冷处理时角蛋白纤维凝聚的形成与细胞是否具有两套不同的中间纤维无关。(3)予先用TritonX-100抽提细胞,角蛋白纤维在冷冻后不能转化成凝聚颗粒。(4)冷冻处理引起的结构转化可能是某些上皮细胞系的角蛋白纤维的一种特殊性质。     

根的分泌物及其生理作用

植物根的生命活动极为活跃。植物的根不仅从土壤中吸收水分和无机盐,还吸收二氧化碳和一些有机化合物,如氨基酸、核苷酸、碳水化合物以及尿素等。根能把吸收的物质进行转化、改造、合成一些植物本身生活所必需的物质,如氨基酸、酰胺、细胞分裂素和赤霉素等,还有一些植物激素、生物碱等。除此,植物根还具有分泌功能,可将一些物质排出体外。众所周知,如果把植物栽培在含有同位素~(14)[CO_2]的大气中,在光照下,植株通过光合作用很容易标记上~(14)C,这种方法早已应用于研究植物体内物质的转移。在根的分泌物研究工作中也成功地应用了这种方法。例如:采用~(14)CO_2     

基因枪的使用方法介绍

基因枪法是一种新型的遗传转化手段[1-3]。所谓遗传转化是指通过某种途径或技术将外源基因导入受体细胞的基因组中,并使之在受体细胞中表达。人们可利用一个特定的目的基因,如抗虫、抗病基因等进行转化,使转基因植物在保持原有的各种优良农艺性状的同时,又能增加新的目的基因所控制的性状。一般遗传转化主要有两类：一类是农杆菌介导法,一类是DNA直接转化法。DNA直接转化技术包括化学方法和物理方法,如电击、微注射、超声波和基因枪法。基因枪法,又称生物弹法或微粒枪法、微粒轰击法,是依赖高速度的金属微粒将外源基因引入活细胞…     

植物细胞的转化系统

本文系统地论述了目前植物细胞各种转化系统的技术特点、基本原理和研究进展,对植物细胞转化概念的广泛含义进行了初步的讨论,文中指出了转化系统对植物细胞分子遗传学及遗传工程的重要意义,最后指出了转化系除了上述各种转化系统外,用已转化的冠瘿瘤细胞原生质体与正常的原生质体融合也能实现 T-DNA 的转移,并得到属间体细胞杂种。这是一种借助细胞融合技术的转化系统。     

微注射在植物遗传操作上取得的进展

Calgene公司将微注射技术应用于植物遗传操作上,并取得了重大进展。已证明,微注射对将一些基因转移到哺乳动物细胞中是有效的,但以前一直未证明对于将DNA转移到植物中能否奏效。最近在维也纳召开的一次核技术和体外培养国际讨论会上提交的一篇论文中,AnneCrossway博士讲述了将一些外来基因微注射到烟草细胞中以及将外来DNA结合到由注射过     

京尼平苷的微生物转化研究

本文利用高产β-葡萄糖苷酶菌种制备游离细胞和固定化细胞,在温和条件下可将京尼平苷转化为京尼平,转化率高达98%.通过条件优化,得到了最优转化条件:京尼平添加量1.5%,pH自然,摇瓶装量20%,28 ℃、150 rpm转化24 h.固定化细胞可连续使用4次.这种微生物转化法安全、高效,产品纯度高,是生产京尼平的一种新方法.