受体相互作用蛋白激酶-3参与甲型H1N1流感病毒感染小鼠记忆性CD8＋ T细胞的应答

受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein kinase 3, RIPK3)是坏死复合体的关键成分之一,介导细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)的发生。前期研究发现流感抗原特异性CD8^＋T细胞的初次应答部分依赖于RIPK3分子,为探讨其在记忆性CD8^＋T细胞应答中的作用,对初次感染后的C57BL/6小鼠在免疫记忆阶段进行了再次感染,并用流式细胞仪检测了流感病毒特异性的记忆性CD8^＋T细胞的表型和功能。结果发现小鼠初次感染甲型 H1N1流感病毒株A/Puerto Rico/8/34后37 d, RIPK3敲除小鼠的CD8^＋T细胞比例及分泌细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的能力均显著低于野生型小鼠;在再次感染相同病毒时,RIPK3敲除小鼠流感病毒特异性CD8^＋T细胞比例及分泌细胞因子IFN-γ的能力依旧显著低于野生型小鼠;而CD8^＋中枢型记忆性T细胞(TCM)比例显著高于野生型小鼠,效应型记忆性T细胞(TEM)或效应性T细胞(TEff)比例却显著低于野生型小鼠。提示RIPK3分子参与调节流感病毒特异的记忆性CD8^＋T细胞诱生数量和分泌细胞因子功能,并影响其TCM与TEM/TEff的比例,为深入探索病毒特异的记忆性CD8^＋T细胞应答的分子机制提供了新线索。     

α1-肾上腺素受体对胶原诱导性关节炎小鼠Treg细胞功能的影响*

目的: 利用胶原诱导性关节炎 (CIA) 模型小鼠,探讨去甲肾上腺素 (NE) 及其α1-肾上腺素受体 (AR ) 对CIA小鼠Treg细胞的作用。方法: 雄性DBA/1小鼠 32 只,随机分为对照组 (n=8) 和CIA模型组 (n=24)。II型胶原 (CII) 乳剂100 μl 尾根部注射DBA/1小鼠制备CIA小鼠模型,在初次免疫后第 41 日,用免疫荧光法检测小鼠脾脏中CD4⁺T与α1-AR的共定位情况;用Western blot法检测小鼠踝关节和脾脏中α1-AR的蛋白表达。分离纯化CIA小鼠脾脏中CD4⁺ T细胞,用抗CD3和抗CD28的单克隆抗体刺激CD4⁺T细胞,进行细胞培养,分为未加药组和加药组,加药组用NE或α1-AR激动剂苯肾上腺素 (phenylephrine) 处理细胞,用流式细胞术检测CIA小鼠CD4⁺T细胞中Treg的细胞数;用Western blot法检测CIA小鼠CD4⁺T中转化生长因子-β (TGF-β) 和IL-10的蛋白表达。结果: CD4⁺ T细胞能够表达α1-AR;与对照组相比,CIA小鼠踝关节和脾脏中α1-AR的蛋白表达显著降低(P＜0.01);与未加药的CIA小鼠的CD4⁺ T细胞相比,NE加入后的CIA小鼠CD4⁺ T细胞中Treg细胞的功能显著增强(P＜0.01);α1-AR激动剂phenylephrine加入后的CIA小鼠CD4⁺ T细胞中Treg细胞的功能显著增强(P＜ 0.01)。结论: 激活CIA小鼠CD4⁺ T细胞上的α1-AR可增强Treg细胞的功能,促进CD4⁺ T细胞向Treg细胞方向分化,发挥抗炎作用。     

唾液酸免疫球蛋白型凝集素-15促进结直肠癌细胞增殖和迁移并抑制肿瘤组织中CD4+与CD8+T细胞浸润

唾液酸免疫球蛋白型凝集素-15(sialic acid-binding immunoglobulin-type lectin-15,Siglec-15)属于Siglecs家族的一员,是一种新型免疫抑制分子。Siglec-15在多种人类肿瘤细胞和肿瘤相关巨噬细胞中高表达,但Siglec-15在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的生物学功能及其对免疫微环境的影响尚不明确。本文旨在分析Siglec-15异常表达对CRC细胞功能及CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞浸润的影响。首先,分析TCGA数据库中结直肠癌与正常组织中Siglec-15 mRNA表达水平,并对52例人CRC与配对癌旁组织进行免疫组织化学染色(IHC),发现Siglec-15在CRC中的表达水平高于癌旁组织(P<0.01)。CCK8和划痕愈合结果显示,敲低Siglec-15能抑制人CRC细胞SW480增殖(P<0.01)和迁移(P<0.05)。磁珠分选小鼠脾的CD8⁺T细胞并与小鼠CRC细胞MC38共培养,发现MC38细胞过表达Siglec-15能抑制CD8⁺T细胞对其的杀伤以及IFN-γ和TNF-α的分泌(P<0.01)。小鼠荷瘤结果表明,过表达Siglec-15可以促进小鼠肿瘤生长(P<0.05)。单样本基因集富集分析、荷瘤小鼠肿瘤组织及人结直肠癌组织IHC分析均表明,Siglec-15高表达时,肿瘤微环境中CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞浸润减少(P<0.05)。综上所述,Siglec-15可能通过促进CRC细胞增殖迁移以及抑制CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞浸润促进结直肠癌进展。本文为探究Siglec-15在CRC中的免疫抑制作用提供了一些新的实验依据。     

广叶绣球菌多糖对小鼠CD8+T细胞介导的免疫应答调控机制

研究广叶绣球菌多糖(polysaccharides,SLPs)对小鼠CD8⁺T细胞活化、增殖分化以及效应阶段的影响,探索广叶绣球菌多糖对CD8⁺T细胞的免疫应答调控机制。通过腹腔注射环磷酰胺溶液(80mg/kg)构建免疫低下小鼠模型,灌胃广叶绣球菌多糖(低、中和高剂量分别为100、200和400 mg/kg),连续饲养20 d后处死,取脾脏和胸腺。血细胞分析仪测定血常规;MTT检测脾T淋巴细胞的扩增能力;流式细胞术分析脾脏CD8⁺T细胞表面CD28、CTLA-4和PD1以及树突状细胞表面MHCⅠ、CD80和PD-L1的表达量;ELISA测定外周血中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-10、穿孔素及颗粒酶B的含量;RT-PCR测定脾脏Psmb9、Psmd9、TAP1、TAP2、IFN-γ、IL-2、JAK1、JAK2、STAT1、STAT3、SOCS-3和Blimp-1的mRNA表达量;Westernblot测定pJAK2/JAK2、pSTAT3/STAT3和Blimp-1的蛋白表达量。试验表明广叶绣球菌多糖高剂量组脾...     

恶性血液病患者外周血淋巴细胞亚群变化及其临床意义的研究

目的: 探讨恶性血液病外周血淋巴细胞亚群变化特征及临床意义。方法: 采用流式细胞仪检测64例初诊的血液系统恶性肿瘤患者的外周血淋巴细胞亚群。病种包括急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)、急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma,HL)、非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkinlymphoma,NHL)。分析比较30例正常人的外周血淋巴细胞亚群与实验组的差异,并对64例恶性血液病患者中连续动态监测的21例急性白血病患者外周血淋巴细胞亚群结果变化与预后关系进行分析。结果： 不同成人恶性血液病患者年龄分组淋巴细胞亚群变化无明显差异;恶性血液病患者中CD3 ⁺CD8 ⁺ T淋巴细胞百分比、Treg细胞百分比均增加;CD16 ⁺/CD56 ⁺NK细胞百分比及CD4 ⁺/CD8 ⁺比值均下降;CD3 ⁺T淋巴细胞数量、CD3 ⁺CD4 ⁺淋巴细胞数、CD3 ⁺CD8 ⁺淋巴细胞数量、CD3 ^-CD19 ⁺淋巴细胞数量、CD16 ⁺/CD56 ⁺NK淋巴细胞数量及CD4 ⁺/CD8 ⁺比值均减少;急性白血病及恶性淋巴瘤患者外周血淋巴细胞亚群与正常对照组比较存在一定的差异;急性白血病未缓解组的Treg细胞比例明显高于急性白血病首疗程缓解组及对照组;急性白血病复发组Treg细胞比例明显高于急性白血病持续缓解组以及对照组;对21例急性白血病患者动态监测的淋巴细胞亚群发现,化疗缓解的患者Treg在化疗过程中逐渐下降,至第3~6个疗程逐渐接近正常对照,化疗未缓解的患者Treg细胞在化疗过程中逐渐上升或持续大于10%,明显高于完全缓解组,复发患者Treg在化疗过程中先下降后明显上升。 结论： 恶性血液病患者免疫功能显著低于健康人,且伴随免疫功能紊乱,且不同疾病类型、不同的疾病状态免疫紊乱的程度不一,Treg细胞比例可以用来预测急性白血病患者疗效及复发,可以为患者的临床治疗方案及用药强度提供指导依据。     

冻存后脐血NK细胞的培养及CAR-NK的功能初探

该研究优化冻存后脐血NK细胞的培养条件,构建了靶向CD19的CAR-NK细胞,并探究了CD19-CAR-NK对CD19⁺ B细胞淋巴瘤的杀伤作用。首先将冻存的脐血单个核细胞复苏并静置18 h,通过CD56磁珠纯化NK细胞,使其在CBMC中的比例从13.8%提高至96.6%。然后比较使用不同细胞因子及其组合对NK细胞增殖、分化、凋亡及功能的影响,发现IL-2和IL-15均能活化NK细胞,但IL-2培养时NK细胞增殖优于IL-15(P<0.05),IL-2+15下CD56dim NK亚群占比[(74.33±5.03)%]最多,凋亡[(4.6±0.14)%]最少,累计增殖(62.67±3.21)倍,显著优于其他细胞因子组合(P<0.05)。该研究使用PDK1抑制剂BX795提高CAR-19慢病毒载体对NK细胞的转导效率,发现6 μmol/L BX795可将病毒转导效率提高3.6倍,且在此浓度下病毒转导效率[(36.4±1.91)%]最大。最后在体外验证CD19-CAR-NK对CD19⁺肿瘤细胞的杀伤能力,发现CD19-CAR-NK可增强...     

变应性鼻炎患者外周血中Tr1/Th3细胞的检测和分析

目的:检测变应性鼻炎(Allergic rhinitis,AR)患者和健康对照者外周血中IL-10+CD4+T细胞、TGF-β+CD4+T细胞(分别代表Tr1细胞和Th3细胞的特性)的比例,并探讨其在AR发病中的意义,为AR的治疗提供临床参考。方法:分离19例对粉尘螨过敏的AR患者和19例健康对照者外周血单个核细胞(PBMCs),采用流式细胞术分别检测外周血中IL-10+CD4+T细胞、TGF-β+CD4+T细胞的比例。结果:同健康对照者相比,AR患者外周血中IL-10+CD4+T细胞的比例显著降低[(1.66±0.48)%vs.(3.80.92)%,t=-9.08,P0.01)],AR患者外周血中TGF-β+CD4+T细胞的比例降低[(1.92±0.54)%vs.(4.76±1.12)%,t=-9.94,P0.01)]。结论:外周血中IL-10+CD4+T(Tr1)细胞比例的降低可能是AR发病的一个重要因素,提高AR患者外周血中分泌IL-10的Tr1细胞的比例可能在AR的治疗中具有重要意义。外周血中TGF-β1+CD4+T(Th3)细胞的比例显著降低,可能是AR发病的一个重要因素。但TGF-β1与AR关系的研究较少,特别是外周血中TGF-β1水平与AR的关系研究较少,需进一步研究。     

皮下预免疫卡介苗提高卡介苗膀胱灌注诱导的外周特异性免疫应答的实验研究

膀胱内灌注卡介苗(bacillus Calmette-Guerin, BCG)是经尿道膀胱肿瘤切除术(transurethral resection of bladder tumor, TURBt)后的中高危非肌层浸润性膀胱癌(non-muscle-invasive bladder cancer,NMIBC)患者的标准辅助治疗。然而,其作用机制仍不完全清楚。本研究利用小鼠皮下免疫模型和膀胱内灌注模型,使用多色流式染色技术检测膀胱内的免疫细胞浸润情况及外周纯蛋白衍生物(purified proteinderivate,PPD)特异性细胞免疫水平,探究皮下预免疫BCG对膀胱内BCG灌注诱导的外周特异性免疫应答的影响。研究结果显示,膀胱内BCG灌注3次后,小鼠脾脏中PPD特异性IFN-γ⁺CD4⁺T细胞(P<0.001)和CD8⁺T细胞(P<0.05)的比例显著上升,并维持在一定的水平;同时,与单纯膀胱内BCG灌注组相比,BCG预免疫后再接受膀胱内BCG灌注的小鼠膀胱局部浸润的CD4⁺T、NK...     

小鼠乳腺表达抗PD-1抗体对其脾脏T细胞的影响

为从细胞水平研究小鼠乳腺表达抗PD-1抗体对转基因鼠脾脏T细胞表面抗原蛋白、细胞因子表达、脾脏CD4⁺T细胞增殖以及增殖相关通路的影响,将8周龄未经历过怀孕的和18周龄经历过哺乳的表达抗人PD-1抗体的转基因小鼠分成两组,每组以转基因阴性鼠为对照,提取脾脏淋巴细胞,检测脾脏淋巴细胞的变化。与转基因阴性小鼠相比,乳腺表达抗PD-1抗体的转基因小鼠的免疫系统中的脾脏T细胞的效应T细胞比例上升,Treg细胞比例下降,CD4⁺T细胞表达的IFN-γ、IL-17以及IL-2有不同程度的增加。IL-4、IL-10以及TGF-β都没有发生变化。与T细胞刺激相关的一些细胞表面的蛋白分子也没有引起变化。转基因阳性鼠和转基因阴性鼠中T细胞增殖没有显著性差异,转基因阳性鼠中PI3K/Akt/mTOR和Ras/MEK/ERK这两条通路上的磷酸化蛋白只有部分表达上调,整个通路没有完全上调。结果表明,转基因小鼠作为表达抗PD-1抗体这类免疫系统相关单克隆抗体的宿主是可行的。     

MEC-1移植法构建慢性淋巴细胞白血病小鼠模型

目的 制备并评估慢性淋巴细胞白血病小鼠模型，以期为慢性淋巴细胞白血病的治疗提供临床前模型。方法 通过文献查阅及实验确定环磷酰胺(cyclophosphamide, CTX)注射剂量以制备免疫抑制小鼠模型；通过腹腔注射、尾静脉注射将1×10⁷个MEC-1细胞连续3 d移植到小鼠体内，以制备慢性淋巴细胞白血病小鼠；应用流式细胞术、免疫组化等方法，检测慢性淋巴细胞白血病小鼠外周血白细胞、CD19⁺CD5⁺B淋巴细胞变化情况，并分析肝、脾、胸腺、肺、淋巴及骨髓中MEC-1细胞浸润情况。结果 确定CTX注射剂量为150 mg/kg注射4 d能够显著降低小鼠免疫系统功能；移植MEC-1细胞后小鼠表现慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia, CLL)特征，其白细胞及B淋巴细胞数量增多、骨髓细胞发生增殖。结论 CTX注射剂量为150 mg/kg连续注射4 d,可以使小鼠免疫功能显著下降；成功制备CLL小鼠模型。     

布鲁氏菌粗糙型RA343株与光滑型A19株免疫小鼠后特异性T细胞和抗体动态变化分析

【背景】布鲁氏菌病（简称布病）严重威胁着人类健康和畜牧业的发展,使用毒力弱、免疫原性好、不干扰血清学诊断的疫苗是防控布病的有效措施。【目的】比较布鲁氏菌粗糙型RA343株与光滑型A19株免疫小鼠后机体特异性T细胞和抗体的动态变化,评价粗糙型RA343株的免疫效果。【方法】采用6周龄雌性BALB/c小鼠,共分为3组,RA343株免疫组和A19株免疫组各15只小鼠,空白对照组5只小鼠。免疫组的每只小鼠经腹股沟皮下注射0.1 mL （含菌量为1×10⁸ CFU）菌液。免疫后1、2和3周各免疫组及空白对照组分别剖杀5只小鼠,无菌取脾脏,一部分脾脏研磨分离淋巴细胞,用流式细胞术检测小鼠布鲁氏菌特异性CD4⁺T细胞与CD8⁺T细胞所占比例的变化趋势;另一部分脾脏称重后分离布鲁氏菌RA343株和A19株,评估RA343株和A19株在小鼠脾脏中的定殖情况。在剖杀小鼠的同时取外周血分离血清,用ELISA方法检测免疫后小鼠血清中IgM和IgG抗体的消长规律。采用GraphPad Prism 8.0软件作图并进行统计学分析。【结果】与A19免...     

流感病毒-金黄色葡萄球菌共感染小鼠模型建立及达菲的干预作用研究

目的 模拟临床常见的流感病毒+金黄色葡萄球菌(金葡菌)共感染建立小鼠模型，评价达菲干预后的药效及对淋巴细胞和炎症因子调控作用。方法 (1)通过筛选不同滴度的PR8流感病毒、金葡菌，建立共感染小鼠模型。(2)选用雄性BALB/c小鼠，随机分为6组。第0天滴鼻流感病毒(0.25 TCID₅₀,每只20μL),第3天滴鼻感染2.5×10⁷ CFU金葡菌20μL。感染病毒24 h后灌胃给药达菲，连续7 d。末次给药24 h后处死，计算脏器指数，RT-qPCR检测流感病毒M基因相对表达量，流式细胞术检测CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞含量及IL-6等13种炎症因子的分泌水平，以气泡图的形式显示每组促炎平均值和促炎细胞因子之和。结果 (1)0.25 TCID₅₀的流感病毒感染后体重下降相对平缓，小鼠没有出现死亡；(2)2.5×10⁷ CFU的金葡菌共感染后半数致死，体重下降相对平缓，作为后续共感染组的剂量；(3)共感染组小鼠体重下降较大，胸...     

人类免疫缺陷病毒1型同性恋感染者与健康人群Th17/Treg平衡状况的比较研究

通过探讨人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)同性恋感染者外周血中辅助性T细胞17(Th17)与CD4+CD25hiFoxp3+调节性T细胞(Treg)比例及Th17/Treg平衡状态与疾病进展的关系,初步阐明Th17/Treg失衡在HIV发病机制中的作用和意义。选取54例未经抗病毒治疗的HIV感染者,另有32名健康志愿者作为正常对照。分离外周血单核细胞后,利用流式细胞技术检测Th17和Treg水平。结果表明,在HIV感染者外周血中Th17比例明显低于正常对照组(0.68±0.35vs1.42±0.86,P<0.001),Treg比例明显高于正常对照(6.15±2.12vs4.50±0.76,P<0.001),导致HIV感染者中Th17/Treg比例较正常对照显著降低(0.12±0.07vs0.31±0.17,P<0.001)。研究还发现,Th17/CD4比例与CD4+T细胞计数正相关(r=0.371,P<0.05),与病毒载量不相关;Treg/CD4比例与CD4+T细胞计数负相关,与病毒载量正相关(r=-0.402,P<0.05;r=0.447,P<0.001)。此外,Th17/Treg比例与CD4+T细胞计数正相关,与病毒载量负相关(r=0.525,P<0.001;r=-0.318,P<0.05)。结果提示,HIV感染中存在Th17/Treg失衡现象,与疾病进程密切相关,可能在HIV进展中具有重要作用。     

口腔鳞状细胞癌患者外周血Naa10及淋巴细胞免疫分型的特点及临床意义

目的探讨口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者外周血N-α-乙酰基转移酶10 （Naa10）及淋巴细胞免疫分型的特点,并分析其临床意义。 方法选取97例OSCC患者及50名健康体检者,分别纳入患者组、对照组。检测两组受试者外周血Naa10、淋巴细胞免疫分型,并比较不同TNM分期、不同淋巴结转移状态患者外周血Naa10、淋巴细胞免疫分型的差异,总结其特点与临床意义。不同性别人数采用χ²检验,计量资料行正态性检验,满足正态性且组间方差相等则采用t检验,不满足正态性则采用非参数Wilcoxon秩和检验,相关性分析采用Pearson法。 结果患者组血清Naa10为（62.91±17.15）pg/ml,高于对照组的（38.82±9.04）pg/ml,差异有统计学意义（t?= 9.280,P?< 0.05）。患者组CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞百分比分别为（71.63±9.11）﹪、（34.34±4.26）﹪、（1.03±0.28）、（14.23±4.61）﹪,低于对照组的（76.25±2.87）﹪、（45.41±7.08）﹪、（1.77± 0.39）、（19.96±5.13）﹪,CD8⁺、B淋巴细胞百分比分别为（14.23±4.61）﹪、（14.91±3.29）﹪,高于后者的（19.96±5.13）﹪、（9.11±2.60）﹪,差异有统计学意义（P?< 0.05）。TNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者42例,其血清Naa10为（64.08±15.26）?pg/?ml,与Ⅲ~Ⅳ期患者的（61.71±13.15）pg/ml比较,差异无统计学意义（t?= 0.820,P?> 0.05）。淋巴结转移者34例,其血清Naa10为（65.15±14.07）pg/ml,与无淋巴结转移者的（61.45±12.66）?pg/?ml比较,差异无统计学意义（t?= 1.321,P?> 0.05）。Ⅰ~Ⅱ期患者CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞百分比低于Ⅲ~Ⅳ期患者,其CD8⁺、B淋巴细胞百分比高于后者,差异有统计学意义（P?< 0.05）。Pearson相关性分析示,外周血Naa10与CD3⁺ （-0.631）、CD4⁺ （-0.529）、CD4⁺/CD8⁺ （-0.587）、NK细胞百分比（-0.603）呈负相关,与CD8⁺ （0.558）、B淋巴细胞百分比（0.670）呈正相关（P?< 0.05）。 结论OSCC患者外周血Naa10明显升高但与TNM分期、淋巴结转移无关;其淋巴细胞免疫分型存在明显改变,且TNM分期的上升、淋巴结转移的发生伴随着CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/?CD8⁺、NK细胞百分比的下降,以及CD8⁺、B淋巴细胞百分比的上升。     

大蒜素通过抑制PI3K/Akt通路保护结核分枝杆菌感染小鼠模型免疫功能的机制

探讨大蒜素（allicin,ALC）通过磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）通路对结核分枝杆菌感染小鼠模型（PTB）的影响。

将54只SPF级小鼠随机分为对照组（CK组）、PTB组、低剂量ALC组（ALC-L组,2 mg/kg）、高剂量ALC组（ALC-H组,5 mg/kg）、阳性对照异烟肼组（INH组,5 mg/kg）和ALC-H+740 Y-P（PI3K激活剂）组（5 mg/kg+0.02 mg/kg）,每组9只。除CK组外,其他组小鼠均通过尾静脉注射0.25 mL标准人型结核分枝杆菌菌株H37Rv悬液构建PTB模型,建模成功24 h后,进行给药处理,1次/d,持续30 d。分别在给药第1、15、30天时记录各组小鼠的体质量;计数肺组织中结核分枝杆菌数量;采用HE染色检测小鼠肺组织病理变化;采用ELISA法检测小鼠肺组织中炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）及IL-10水平;采用流式细胞术检测小鼠外周血中T淋巴细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺水平以及CD4⁺/CD8⁺比值;采用Western Blot检测p-PI3K、p-Akt及p-mTOR蛋白表达。

与CK组比较,PTB组小鼠体质量（给药第15、30天）减轻,结核分枝杆菌数量增多,肺组织病理损伤严重,TNF-α、IL-6、CD8⁺水平以及p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达升高,IL-10、CD3⁺、CD4⁺水平以及CD4⁺/CD8⁺比值降低（均P＜0.05）;与PTB组比较,ALC-L组、ALC-H组和INH组小鼠对应变化趋势与上述相反（均P＜0.05）;740 Y-P减弱了高剂量ALC对PTB小鼠炎症反应的抑制作用以及免疫功能的改善作用。

ALC可能通过抑制PI3K/Akt通路保护结核分枝杆菌感染小鼠模型的免疫功能。

     

骨髓间充质干细胞对肾移植受者T淋巴细胞分化和miRNA-155表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）对肾移植受者T淋巴细胞分化和miRNA-155表达的影响。 方法选取2013年1月至2017年12月于福州总医院接受MSCs诱导+同种异体肾移植术的受者20例（MSCs组）,对照组为同期配对的异体肾移植受者20例。两组患者术后免疫抑制方案均为霉酚酸酯+他克莫司+强的松。两组患者分别于移植术前、术后第15天抽取静脉血,流式细胞仪检测外周血CD4⁺ CD25⁺ FoxP3⁺ Treg细胞/?CD4⁺细胞亚群比值;ELISA检测白细胞介素2（IL-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素10（IL-10）浓度;免疫磁珠分选外周血T淋巴细胞后,Rea1-time PCR法检测外周血T淋巴细胞中miRNA-?155的表达。两组间均数比较采用独立t检验,治疗前后均数比较采用配对t检验。 结果移植前两组肾移植受者外周血CD4⁺ CD25⁺ FoxP3⁺ Treg细胞/?CD4⁺细胞比值、IL-2、IL-?10、TNF-α、T淋巴细胞miRNA-155表达水平差异均无统计学意义（P均> 0.05）;术后第15天,与对照组相比,MSCs组外周血CD4⁺ CD25⁺ FoxP3⁺ Treg细胞/?CD4⁺细胞亚群比值（30.44﹪?± 4.23﹪? vs 26.06﹪?±4.77﹪,t = 2.365,P = 0.042）、IL-10水平（20.35?ng/?L?±?5.10?ng/?L? vs 16.63?ng/?L±6.26?ng/?L,t = 2.062,P?=?0.046）上升,而IL-2（27.47ng/?L±4.30 ng/?L vs 31.40?ng/?L±5.33 ng/L,t = 2.252,P = 0.015）、TNF-α（41.52?ng/?L±8.32?ng/L vs 46.67?ng/?L±6.71?ng/L,t = 2.157,P = 0.037）和T淋巴细胞miRNA-155表达水平（1.61±0.31 vs 1.89±0.15,t = 3.688,P?= 0.001）则降低。 结论MSCs能够升高肾移植受者外周血CD4⁺ CD25⁺ FoxP3⁺ Treg细胞/?CD4⁺细胞比值和IL-10水平,降低IL-2、TNF-α和T淋巴细胞miRNA-155表达水平,与MSCs的免疫耐受诱导有关。     

骨髓间充质干细胞对类风湿关节炎小鼠干预效果研究

目的 利用自发类风湿关节炎小鼠模型(Tg-huTNFα小鼠),探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对类风湿关节炎及其继发骨量丢失的影响。方法 3周龄Tg-huTNFα小鼠分为3组：(1)模型组(Model),每周腹腔注射1次0.1 mL/10 g的生理盐水；(2)huTNFα抗体干预组(Anti-huTNFα),每周腹腔注射1次10 mg/kg的huTNFα抗体；(3)BMSCs干预组(BMSCs),每周双侧膝关节腔各注射1次5×10⁶ Cells的BMSCs。干预期间每周称量1次动物体重，同时对踝关节进行临床评分，各组动物干预10周后处死取材。利用流式细胞仪分析外周血T细胞、B细胞、CD4⁺/CD8⁺ T细胞比例，液相芯片法检测血清中huTNFα、IL-4及IL-1β含量，HE染色后评价左侧膝关节和踝关节病理改变，骨形态计量学方法分析右侧股骨骨结构变化。结果 与模型组比较，BMSCs和Anti-huTNFα干预均可缓解Tg-huTNFα小鼠体重的下降，抑制小鼠关节肿大变形，下调外周血huTNFα含量，降低Tg-huTNF...     

不同基因型幽门螺杆菌感染与消化性溃疡患者血清炎症因子及CD4+T细胞、PINP水平的关系

目的探讨不同基因型H.pylori感染与消化性溃疡(PU)患者血清炎症因子及CD4⁺T细胞、Ⅰ型原胶原N端前肽(PINP)水平的关系,为后续研究提供参考。方法选择2017年8月至2019年3月于我院消化科就诊的122例PU患者为研究对象,其中H.pylori阴性患者50例[HP(-)组],H.pyloriⅠ型感染患者38例[HP(Ⅰ)组],H.pyloriⅡ型感染患者34例[HP(Ⅱ)组],对比各组患者血清炎症因子IL-17、IL-10、TNF-α和PINP及CD4⁺T淋巴细胞水平。采用Logistic回归对不同菌型H.pylori感染患者血清炎症因子及CD4⁺T细胞、PINP水平的相关性进行评估,并结合ROC曲线对其相应诊断价值进行评估。结果HP(-)组患者IL-17、IL-10、TNF-α水平最低,HP(Ⅰ)组患者IL-17、IL-10、TNF-α水平最高,组间差异有统计学意义(均P<0.001)。HP(-)组患者CD4⁺T细胞及PINP水平最低,HP(Ⅰ)组CD4⁺T细胞及PINP水平最高,组间差异有统计学意义(均P<0.001)。多因素Logistic回归显示,血清炎症因子及CD4⁺T细胞、PINP水平与H.pyloriⅠ型、H.pyloriⅡ型感染均有显著正相关性(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,IL-17、IL-10、TNF-α、CD4⁺T细胞和PINP诊断H.pyloriⅠ型感染的AUC分别为0.863(95%CI:0.786~0.941)、0.844(95%CI:0.754~0.935)、0.907(95%CI:0.847~0.967)、0.921(95%CI:0.864~0.977)、0.742(95%CI:0.639~0.845),而诊断H.pyloriⅡ型感染的AUC分别为0.711(95%CI:0.599~0.823)、0.747(95%CI:0.641~0.854)、0.930(95%CI:0.874~0.986)、0.918(95%CI:0.861~0.974)、0.736(95%CI:0.631~0.840)。H.pylori阴性与CD4⁺T细胞和PINP水平无明显相关性(r=0.226,P=0.225),H.pyloriⅠ型、H.pyloriⅡ型感染与CD4⁺T细胞和PINP水平具有显著正相关性(r=0.428、0.367,P=0.007、0.033)。结论血清炎症因子及CD4⁺T细胞和PINP水平与PU患者H.pylori感染具有相关性,可作为临床辅助监测指标。     

HIV/HCV共感染者抗逆转录病毒治疗后免疫恢复情况

由于具有相同的传播途径,人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)和丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)共感染非常普遍,但是关于合并感染的程度,两种病毒之间的相互关系,在艾滋病抗逆转录病毒治疗(Antiretroviral therapy,ART)前后,HCV合并感染对HIV患者免疫细胞恢复的影响仍不明确。为了通过分析CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞数的变化,以了解辽宁省HIV/HCV共感染者ART后免疫恢复的情况,本研究从辽宁省艾滋病抗病毒治疗数据库中筛选符合要求的HIV感染者和HIV/HCV共感染者,收集感染者基本人口学资料及HCV抗体检测结果、HIV/HCV共感染途径等资料。采用t检验或卡方检验进行组间比较,采用Kaplan-Meier乘积极限法绘制生存分析函数图。结果显示,本研究共纳入HIV感染者12742人,HIV/HCV共感染者340人。HIV感染者和HIV/HCV共感染者的不同人口学特征均差异显著(P<0.001)。HIV感染和HIV/HCV共感染者ART治疗后CD4⁺细胞数和CD4⁺/CD8⁺比值显著升高(P<0.05),CD8⁺细胞数比ART前显著下降(P<0.05)。HIV/HCV共感染者随着ART时长,CD4⁺T淋巴细胞数恢复情况始终显著低于HIV感染者(P<0.05)。生存分析曲线表明,HCV/HIV共感染者从艾滋病诊断开始随着ART的治疗CD4⁺细胞恢复情况显著低于HIV感染者,Log-Rank检验统计量为4.483(P=0.034)。本研究揭示,HCV感染对ART患者CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞的恢复有影响。ART后HIV/HCV共感染者中CD4⁺T淋巴细胞计数的改善低于HIV单一感染者,并且单一感染患者对ART的反应比合并感染患者更好。因此,建议在启动ART之前,对每个感染HIV的患者进行HCV抗体筛查。     

急性病毒性肝炎患者外周血T 细胞亚群的检测和分析

目的:检测急性甲、乙型病毒性肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群变化,探讨其对疗效和预后意义。方法:采用APAAP桥联酶标法检测115例急性甲、乙型病毒型肝炎患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群比例,计算CD4+/CD8+值。并检测了34例患者治疗前后T淋巴细胞亚群变化。结果:115例急性甲、乙型病毒性肝炎患者外周血CD3+、CD4+T细胞比例及CD4+/CD8+值均低于正常对照组(P<0.05),而CD8+T细胞比例均高于正常对照组(P<0.01)。6例无明显疗效者,各亚群比例在治疗前后无显著差异(P>0.05)。28例有明显疗效者,治疗后各亚群比例恢复正常水平,与治疗前相比差别具有统计学意义(P<0.05)。结论:急性甲、乙型病毒性肝炎患者外周血CD4+/CD8+T细胞比值可在一定程度上反映疗效及预后。