虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ突变体K3A-HWTX-Ⅰ的化学合成与生理活性分析

采用固相Ｆｍｏｃ法在自制自动蛋白质化学工作站上合成了其第３位赖氨酸（Ｋ３）被丙氨酸（Ａ）取代的虎纹捕鸟蛛毒素－Ⅰ的突变体Ｋ３Ａ－ＨＷＴＸ－Ⅰ．合成的突变体用Ｅｄｍａｎ降解和电喷雾质谱进行鉴定．Ｋ３Ａ－ＨＷＴＸ－Ⅰ经谷胱甘肽系统进行氧化复性后通过离子交换和反相ＨＰＬＣ纯化．活性分析结果表明,Ｋ３被Ａ取代后ＨＷＴＸ－Ⅰ的生物活性下降了８０％,提示Ｋ３与ＨＷＴＸ－Ⅰ的生物活性有一定的相关性     

虎纹捕鸟蛛毒素—I（HWTX—I）对豚鼠回肠的作用机制研究

虎纹捕鸟蛛毒素ＨＷＴＸ－Ｉ（５ｍｇ／Ｌ）对电刺激豚鼠回肠引起的一过性收缩有非常明显的抑制作用．ＨＷＴＸ－Ｉ的抑制作用发生后,乙酰胆碱（ＡＣｈ）诱发的回肠收缩幅度与使用ＨＷＴＸ－Ｉ前无明显差异．在使用酚妥拉明后,ＨＷＴＸ－Ｉ仍能抑制豚鼠回肠的一过性收缩．ＨＷＴＸ－Ｉ对豚鼠回肠的抑制作用主要是抑制ＡＣｈ释放或影响ＡＣｈ释放之前的过程     

虎纹捕鸟蛛毒素-I单残基突变体R20A-HWTX-I的化学合成与性质分析

虎纹捕鸟蛛毒素－１（Ｈｕｗｅｔｏｘｉｎ－１,ＨＷＴＸ－１）是从虎纹捕乌蛛（Ｓｅｌｅｎｏｃｏｓｍｉａ ｈｕｗｅｎａ）的粗只同的一种多肽类神经毒素。为了探明该毒素分子中统一的Ａｒｇ残基与其生物学活性的关系,运用固相多肽合成技术和Ｆｍｏｃ化学直接构建了Ａｌａ取代ＨＷＴＸ－１第２０位Ａｒｇ（Ｒ２０）的突变体Ｒ２０Ａ－ＨＷＴＸ－１;将合成的突一置于含谷胱甘肽的缓冲体系中氧化复性后用反相和特殊设计的离子交换Ｈ     

构建同时携带HWTX—Ⅰ和AAI活性位点的多肽嵌合体

运用固相化学合成的方法,将墨西歌苋属植物（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ ｈｙｐｏｃｈｏｎｄｒｉａｃｕｓ）α－淀粉酶抑制剂（ＡＡＩ）分子中已知的活性位点序列及可能的相关序列嵌入虎纹捕鸟蛛毒素－Ⅰ（ＨＷＴＸ－Ⅰ）的非活性位点区,并替代相应的序列,构建同时携 两种活性位点的多肽嵌合体。合成的嵌合体用Ｅｄｍａｎ降解和ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ质谱鉴定。嵌合体合成后在谷胱甘肽存在的条件下氧化复性,形成３对二硫键和特定的空间     

纤溶酶原激活物抑制因子—1突变体E350G,E351K的构建及性质研究

利用ＰＣＲ扩增和合成突变引物的方法,将ＰＡＩ－１的Ｇｌｕ３５０和Ｇｌｕ３５１分别突变为Ｇｌｙ和Ｌｙｓ在大肠杆菌中表达并分离纯化突变体ＰＡＩ－１（Ｅ３５０Ｇ,Ｅ３５１Ｋ）有 酸胍激活并以ＥＬＩＳＡ法确定它与野生型ｒＰＡＩ－１的相对含量,通过对ｕ－ＰＡ抑制的动力学研究表明,突变体与野生型ｒＰＡＩ－１相比,对ｕ－ＰＡ和ｔ－ＰＡ的抑制活性都有明显下降,由活性态向潜伏态转变的半寿期也由０．８３ｈ缩短为０．５     

中国生物化学与分子生物学报 1999年第15卷第1～6期作者索引

作者Ａｕｔｈｏｒ期－页码Ｎｏ．－Ｐａｇｅ朝仓伸司ＳＨＩＮＪＩＡＳＡＫＵＲＡ２－２６０白俊杰ＢＡＩＪｕｎｊｉｅ３－４０９白秀英ＢＡＩＸｉｕｙｉｎｇ１－１１４２－３００２－３０４毕汝昌ＢＩＲｕｃｈａｎｇ１－７９ＲｏｌａｎｄＢＬＵＭＥ４－５９３４－５９７蔡国平ＣＡＩＧｕｏｐｉｎｇ１－８３蔡建华ＣＡＩＪｉａｎｈｕａ６－１００６６－１０１２蔡以滢ＣＡＩＹｉｙｉｎｇ４－６００曹殿芳ＣＡＯＤｉａｎｆａｎｇ２－３３２曹凯鸣ＣＡＯＫａｉｍｉｎｇ４－６７１曹立环ＣＡＯＬｉｈｕａｎ１－１０５曹淑桂ＣＡＯＳｈｕｇｕｉ３…     

PAI—2抑制细胞凋亡依赖其蛋白质结合功能域

将纤深酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）突变体ＰＡＩ－２ＣＤ和ＰＡＩ－２ＱｃＤＮＡ与真核表达载体ｐｃＤＮＡ３重组,构建真核表达质粒并转染ＨｅＬａ细胞,经Ｇ４１８筛选,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ迷鉴定和ＥＬＩＳＡ检测,筛选出稳定表达ＰＡＩ－２ＣＤ和ＰＡＩ－２Ｑ的阳性细胞株。ＥＬＩＳＡ结果表明ＰＡＩ－２突变蛋白质在转染细胞中的表达量与相应野生型ＰＡＩ－２在阳性细胞克隆中的表达量基本相近,ＰＡＩ－２及其突变体在理     

用酵母双杂交系统研究胰岛素样生长因子—1突变体与其结合蛋白 …

为研究胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ１）及其突变体与ＩＧＦ结合蛋白－３（ＩＧＦＢＰ３）的相互作用,针对ＩＧＦ１的第３、４、１５、１６位氨基酸残基,采用定点突变的方法构建了「Ｙ１５Ｌ１６」ＩＧＦ１和「Ｑ３Ａ４Ｙ１５Ｌ１６」ＩＧＦ１。然后分别将ＩＧＦ１／ＩＧＦ１突变体和ＩＧＦＢＰ３ ｃＤＮＡ克隆至酵母表达载体ｐＧＢＴ９和ｐＡＣＴ２中,利用用酵母双杂交技术检测ＩＧＦ１／ＩＧＦ１突变体和ＩＧＦＢＰ３之间的相     

半衰期延长获得PAI－1抗性的t—PA突变体的构建、表达及特性分析

用基因重级及定位突变技术成功地构建了ｔ－ＰＡ的Ｋ１区缺失突变体ｔ－ＰＡｄｅｌＫ１、ＰＡＩ－１结合位点缺失突变体ｔ－ＰＡｄｅｌ（２９６－３０２）及两的组合突变全ｔ－ＰＡｄｅｌ（Ｋ１,２９６－３０２）,并在ＣＯＳ－７细胞中实现三的暂时性表达,在ＣＨＯ细胞中实现了ｔ－ＰＡｄｅｌ（Ｋ１,２９６－３０２）的稳定性表达。对表达产物的生物学特性分析表明,ｔ－ＰＡｄｅｌ（２９６－３０２）及ｔ－ＰＡｄｅｌ（Ｋ１     

人类嗜T细胞白血病Ⅰ型病毒TAX蛋白对NF—kB转录因子的作用

人类嗜Ｔ细胞白血病Ⅰ型病毒（ＨＴＬＶ－Ⅰ）是成人Ｔ细胞白血病（ＡＴＬ）的致病因子,其编码的ＴＡＸ蛋白的反式激活在白血病形成中有重要作用。ＮＦ－ｋＢ是细胞活化和产生细胞因子的重要转录调控因子。正常情况下,ＮＦ－ｋＢ因子与抑制性蛋白ＩＫＢ结合,形成复合物存在于胞质中。ＴＡＸ蛋白可与ＩＫＢ激酶γ（ＩＫＫγ）直接结合,而后启动ＴＡＸ对ＩＫＫα和ＩＫＫβ的结合,并使之发生磷酸化。后者使ＩＫＢ蛋白降解,ＮＦ－     

纤溶酶原激活物抑制因子－1突变体E350G，E351K的构建及性质研究

利用ＰＣＲ扩增和合成突变引物的方法,将ＰＡＬ－１的Ｇｌｕ３５０和Ｇｌｕ３５１分别突变为Ｇｌｙ和Ｌｙｓ,在大肠杆菌中表达并分离纯化突变体ＰＡＬ－１（Ｅ３５０Ｇ,Ｅ３５１Ｋ）,用盐酸胍激活并以ＥＬＩＳＡ法确定它与野生型ｒＰＡＩ－１的相对含量。通过对ｕ－ＰＡ,ｔ－ＰＡ抑制的动力学研究表明,突变体与野生型ｒＰＡＩ－１相比,对ｕ－ＰＡ和ｔ－ＰＡ的抑制活性都有明显下降,由活性态向潜伏态转变的半寿期也由０．８３ｈ缩短为０．５７ｈ。     

化学合成的α—降钙素基因相关基因在大肠杆菌和哺乳…

通过化学法合成α－降钙素基因相关肽的基因,该基因５＇端有ＢａｍＨ Ｉ切点和启始密码,３＇端有ＤａｌＩ切点和终止密码。为了表达这一基因,组建表达载体ｐＸＺ６２．这一表达载体具有Ｔｒｅ启动子,含有Ａｐ＾ｒ和ＸｙＬＥ基因。α－降钙素基因相关肽基因与ｐＸＺ６２边接,构建重组质粒ｐＸＺ１０１;并将该基因与质粒ｐＨβＡＰｒ－３Ｐ－ｎｅｏ连接,构建重组质粒ｐＸＺ２０１．将重组质粒分别转化到大肠矸菌和ＨｅＬａ细胞     

PAI—2及其突变体的生物化学性质

为研究和比较纤深酶原激活剂抑制物２型（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｔｙｐｅ ２,ＰＡＩ－２）及其突变体的生物化学性质,用ＰＣＲ、体外定点突变技术构建ＰＡＩ－２突变体ＰＡＩ－２ＣＤ和ＰＡＩ－２ＱｃＤＮＡ,将突变体ｃＤＮＡ与原核表达载体重组并转化怕杆菌。经诱导表达,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证实表达出相应蛋白质,均占全菌总蛋白的１４％。Ｗｅｔｅｒｎ印迹、溶圈抑制及纤维蛋白翻转板     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）突变体FrGGI的构建,表达及特性…

为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有ＰＡＩ－１抗性的新型ｔ－ＰＡ溶性剂,利用基因重组及定位突变技术构建了ｔ－ＰＡ的Ｋ１、Ｋ２区糖基化位点消除,ＰＡＩ－１结合位点缺失,Ｆ与Ｅ区连接序列Ｈｉｓ４４￣Ｓｅｒ５０置换为纤粘蛋白Ｉ型Ｆ区间连接序列Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｕ的ｔ－ＰＡ组合突变体ＦｒＧＧＩ,并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达,对表达产物的生物学特性分析表明     

hTNF受体在BHK细胞中的表达及其与hTNF—α的相互作用

将两种人肿瘤坏死因子（ｈＴＮＦ）受体ｈＴＮＦＲ５５和ｈＴＮＦＲ７５基因分别克隆到表达载体ｐｃＤＮＡ３、ｐＤＲ２以及ｐＸＪ４１中,以脂质体介导的方法转染ＢＨＫ细胞,用［１２５Ｉ］ＴＮＦα筛选出阳性克隆,并进一步鉴定了表达两种ｈＴＮＦＲｓ的细胞株;反转录（ＲＴ）ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ结果表明两种ｈＴＮＦＲｓ在ＲＮＡ转录和蛋白质合成水平均获得了表达。但ｈＴＮＦα不能引发这些细胞株的细胞毒活性;结合野生型ｈＴＮＦα及其突变体Ｒ２Ｋ的细胞毒活性和体内毒性的测定结果,利用这些细胞株进一步测定了突变体ｈＴＮＦαＲ２Ｋ和野生型ｈＴＮＦα分别与两种受体的竞争结合活性,从而为两种受体以及ｈＴＮＦα的结构和功能研究的进一步深入奠定了一定的基础。     

用蛋白质工程方法改变葡萄糖异构酶最适pH和最适温度

用寡核苷酸诱导的定点突变方法构建了葡萄糖异构酶基因的突变体（Ｎ１８４Ｄ和Ａ１９８Ｃ）。含突变体的重组质粒ｐＴＫＤ－ＧＩ１（Ｎ１８４Ｄ）和ｐＴＫＤ－ＧＩ２（Ａ１９８ｃ）在Ｅ．ｃｏｌｉＫ３８菌株中表达,用ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－３００ＨＲ柱层析分离纯化突变酶。与野生型葡萄糖异构酶比较实验表明：（１）突变酶Ｎ１８４Ｄ的最适ｐＨ值下降了１个单位;等电点下降了０．６个单位     

化学合成虎纹捕鸟蛛毒素—Ⅰ基因的克隆和表达

本文报道了全化学合成虎纹搏鸟蛛毒素－Ⅰ基因在大肠杆菌中的表达,表达产物为Ｎ－端是谷胱甘肽硫转移酶的融合蛋白。经ＧＳＨ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析纯化,凝血酶酶解融合蛋白,得到重组ＨＷＴＸ－Ⅰ（ｒＨＷＴＸ－Ⅰ）。普和氨基酸顺序分析均表明ｒＨＷＴＸ－Ⅰ系正确表达产物。还原复性的ｒＨＷＴＸ－Ⅰ表现出与天然ＨＷＴＸ－Ⅰ生物学活性的一致性。     

关于“狭叶桂”植物学名的商榷

关于‘狭叶桂’植物学名的商榷李锡文程必强（中国科学院昆明植物研究所,昆明６５０２０４）ＡＤＩＳＣＵＳＳＩＯＮＡＢＯＵＴＴＨＥＢＯＴＡＮＩＣＡＬＮＡＭＥＯＦ‘ＸＩＡ－ＹＥ－ＧＵＩ’ＬｉＸｉｗｅｎ,ＣｈｅｎｇＢｉｑｉａｎｇ（ＫｕｎｍｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔ...     

新疆阿尔泰山驼鹿的初步考察

新疆阿尔泰山驼鹿的初步考察ＡＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＩＮＳＰＥＣＴＩＯＮＯＮＴＨＥＥＬＫ（ＡＬＣＥＳＡＬＣＥＳ）ＩＮＸＩＮＪＩＡＮＧＡＬＴＡＩＭＯＵＮＴＡＩＮＫｅｙｗｏｒｄｓＸｉｎｊｉａｎｇ;Ｅｌｋ（Ａｌｃｅｓａｌｃｅｓ）１９９４年７－８月,我们受新疆...     

木糖异构酶突变体的研究—纯化与性质

纯化了ＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒＤ－木糖异构酶的三个突变体,Ｔ８９Ｓ,Ｖ１３４Ｉ的比尖（Ｕ／ｍｇ）分别为３．４２和６．１８,Ｗ１３６Ｅ没有生。Ｔ８９Ｓ和Ｖ１３４Ｉ的活性需要二价阳离子,对于Ｔ８９Ｓ,Ｍｇ＾２＾＋的作用强于Ｃｏ＾２＾＋。在以木糖为底物时,Ｔ８９Ｓ的Ｋｍ值为４９．８ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｖ１３４Ｉ的Ｋｍ值为９．８ｍｍｏｌ／Ｌ,在以果糖为底物时,木糖醇对Ｔ８９Ｓ是竞争性抑制剂,山梨糖醇对Ｔ８９Ｓ和