黄曲霉发酵薯干粉水解液生产L—苹果酸

经选育和诱变得到一株产苹果酸的黄曲霉菌ＴＨ５００７,通过发酵条件的优化,以薯干粉的水解波为主要原料,发酵５ｄＬ－苹果酸可达到６％左右。在总酸中苹果酸含量平均达７２％以上,杂有机酸主要是柠檬酸,延胡索酸的含量在０．０２％以下。补糖发酵比分批发酸产酸性能更佳。     

固定化细胞生产L—苹果酸动力学及两种酶反应器的比较

研究了产氨短杆菌ＭＡ－２,黄色短杆菌ＭＡ－３的固定化细胞在富马酸铵转化体系中生成Ｌ－苹果酸的动力学参数,同时比较了固定化细胞在填充床及连续机械搅拌反应器中酶转化反应的差异。研究结果表明：当转化率小于４０％时,酶反应在两种反应器所需的停留时间相当。随着转化率的提高,填充床反应器较连续机械搅拌反应器所需的停留时间短且不会因剪切力使固定化颗粒受到损伤,因此,在富马酸铵体系中用固定化酶生产Ｌ－苹果酸采用填     

温特曲霉转富马酸为L—苹果酸的初步研究

从大量霉菌在选育到一株具有较高富马酸酶活性的温特曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｗｅｎｔｉｉ）Ａ５－６１。在摇瓶培养条件下,３２℃ ９６小时,产Ｌ－苹果酸达１０．４９ｇ／１００ｍｌ,对富马酸的转化率达９０．８０％。利用菌体细胞,进行酶转化试验,结果表明：１．６ｇ湿菌体接入２５ｍｌ含富马酸１０．０％（用ＮａＯＨ中和至ｐＨ７．０）的转化液中,３５℃１６－２４小时,连续转化三次,分别产生Ｌ－苹果酸９．６１     

发酵液中L-苹果酸批量定量测定研究

摸索出发酵液中L-苹果酸批量定量测定的简单快速方法。该方法为(1)采用微量注射器将发酵液定量点样,在展开剂中进行纸层析;(2)用显色剂喷雾显色;(3)剪下已显色的L-苹果酸斑,置5ml去离子水中洗脱3小时;(4)取出1ml过滤洗脱液,加入6ml 96×10^-2硫酸和0.1ml 1.0×10^-2α-萘酚摇匀;(5)置100℃水浴中加热60分钟;(6)冷却后在波长476nm处比色测定。     

用黑曲霉发酵纤维素酶解液生产柠檬酸的研究

以麦草纤维素酶解液为原料,用黑曲霉发酵制备柠檬酸,研究了培养基组成、恒温发酵和周期变温发酵对柠檬酸发酵的影响,结果表明,适宜的培养基组成为NH4NO3 0.3%,KH2PO4 0.1%,Mg2+300×10-6,Fe2+10×10-6,此时,柠檬酸产量为10.52g/L,糖转化率为60.80%.研究还表明,添加低级醇如甲醇和乙醇有利于产酸,但添加甲醇的效果要好于添加乙醇的效果,适宜的甲醇量为2%.在恒温发酵过程中,0～8h为孢子萌发期,产酸较慢;8～24h为对数生长期,产酸增加;24h之后为菌体生长恒定期,但产酸继续增加;104h之后产酸降低.在周期变温发酵过程中,0～8h产酸较慢,8h之后产酸增加.通过对二者的比较可知,在0～16h,周期变温发酵的产酸量要高于恒温发酵的产酸量,但在16h之后,周期变温发酵的产酸量要低于恒温发酵的产酸量.     

L-苹果酸产生菌筛选及高产突变株诱变选育

通过广泛收集和分离,获得根霉属(Rhizopus)、曲霉属(Aspergillus)及裂褶菌属(Schizophyllum)等属菌株897株。产酸指示平板上的变色圈测定结果表明,它们中间628株为产酸菌。通过纸层析对产酸菌发酵液酸谱的分析,获得129株L-苹果酸产生菌,经进一步测定发酵液中L-苹果酸的含量,筛选出以葡萄糖为原料,摇瓶发酵140小时,L-苹果酸产率48．37g／L,对糖转化率48．37×10^-2 的菌株LMO2。经初步鉴定,这一菌株为曲霉(Asper-gillus sp.)以LM02作为出发株,采用亚硝基胍、自然污染细菌、甲基磺酸乙酯及紫外线进行诱变处理,选育出葡萄糖为原料,L-苹果酸产率较高的突变抹N1-14、N1-14、NE1412、NU1416及NU1419。其中N1-14 的L-苹果酸产量最高,比出发株提高46．2×10^-2。N1-14 的菌丝生长速度快,产孢能力强,摇瓶发酵葡萄糖140小时,平均L-苹果酸产率为72．53g／L,对糖转化率53．74×10^-2。全发酵液经薄层层析测定,不含黄曲霉毒素。发酵产物分离提纯后,得到白色粉末状结晶,经纸层析、质谱及红外光谱测定,证明为L-苹果酸。     

温特曲霉转富马酸为L-苹果酸的初步研究*

从大量霉菌中选育到一株具有较高富马酸酶活性的温特曲霉(Aspergillus wentii) A5-61。在摇瓶培养条件下,32℃ 96小时,产L-苹果酸达10.49g/100ml,对富马酸的转化率达90.80%。利用菌体细胞,进行酶转化试验,结果表明：1.6g湿菌体接入25ml含富马酸10.0%（用NaOH中和至pH7.0）的转化液中,35℃16～24小时,连续转化三次,分别产生L—苹果酸9.61g/100ml、9.73g/100ml、6.93g/100ml。对菌体整体细胞酶学性质的研究表明,其最适反应温度35℃,最适反应pH7.0,Cu2＋对该酶有明显的抑制作用,该酶的Km＝0.154mol/L,Vmax＝0.0571mol/L·h。     

D-葡萄糖串联发酵生产2-酮基-L-古龙酸的工艺条件

研究了在10L发酵罐中D-葡萄糖串联发酵生产维生素C前体——2-酮基-L-古龙酸的发酵工艺条件。第一步发酵采用欧文氏菌(Erwinia sp.)的突变株SCB247,培养36小时,可将D-葡萄糖转化成中间体2,5-二酮基-D-葡萄糖酸,在发酵液中约累积180mg/ml。第二步发酵采用棒状杆菌(Corynebacterium sp.)SCB3058,可将2,5-二酮基-D-葡萄糖酸专一性地还原生成2-酮基-L-古龙酸。在细胞生长进入对数生长期后期时,加入经十二烷基硫酸钠处理的第一     

羊毛生物整理复合酶L86发酵工艺优化研究

采用L9（34）正交试验对L86复合酶生产菌的发酵培养基进行优化、并通过溶氧浓度调节和中期补加蛋白水解液对发酵过程进行调控。结果表明较优的培养基组成为（g/100ml）：黄豆粉4.0、玉米粉1.0、鱼粉0.6、蚕蛹粉0.6、CaCl20.5、NH4Cl1.0、Na2HPO4·2H2O 0.4;通气量控制30h前1:0.5、30-50h1:1.0、50h后1:1.2 v/v/m。在上述条件下摇瓶,酸性蛋白酶酶活10000u/ml、纤维素CMC酶3600u/ml;在0.5m3搅拌罐中扩大中试平均发酵单位酸性蛋白酶5500u/ml、纤维素CMC酶2200u/ml。     

十三烷1,13—二羧酸的发酵研究

热带假丝酵母(C.tropicalis)NP-6-126是经过紫外线和亚硝酸反复诱变筛选培育出来的,它是生产十三烷1,13一二羧酸(DC_(15)的优良生产突变株,尿素和硝酸钾浓度对其产酸有明显影响。尿素浓度在0.15％～0.21％范围内对产酸有利,尤其是0.18％最佳,浓度增大,明显抑制DC_(15)的产生和积累;硝酸钾的加入,也明显促进DC_(15)产量的提高,0.6％～0.9％硝酸钾浓度较合适。于16L自动控制罐发酵7d,DC_(15)达到130g/L,放大到2500L罐,在最佳条件下,连续5批,发酵6d,DC_(15)产量平均达到176g/L,正十五烷(nC_(15)转化率平均为52.5％,后处理总收率平均为80.6％,DC_(15)的纯度平均为95.83％。     

琥珀酸发酵研究进展*

琥珀酸在化工和食品行业应用广泛。与传统化学方法相比,微生物发酵法生产琥珀酸具有诸多优点：生产成本具有竞争力;利用可再生的农业资源包括二氧化碳作为原料,避免了对石化原料的依赖;减少了化学合成工艺对环境的污染。主要介绍产琥珀酸微生物的来源和育种,代谢途径和发酵调控机制以及产品回收工艺的进展。     

植酸钠对黑曲霉柠檬酸发酵产酸的促进效应

研究了植酸钠对黑曲霉柠檬酸发酵产酸的促进效应。在葡萄糖全合成培养基中添加１％的植酸钠,可使产酸比对照提高２．４倍;在薯粉、玉米粉等天然培养基中添加１％植酸钠,柠檬酸产量分别提高１．７倍和１．３倍。酶活性测定分析表明,植酸钠对柠檬酸代谢途径中的几种关键酶的活性有影响。     

马槟榔甜味蛋白N-和C-末端部分氨基酸顺序的测定

从马槟榔(Capparis masaikai)种子中曾分离出二种甜味蛋白,称为Mabinlin Ⅰ和Ⅱ,分子量分别为11.6kD和10.4kD。用Edmail降解和反相HPLC鉴定PTH-aa方法测定证明:二者的N末端均因焦谷氨酸环化而封闭。采用1mol/l HCl-甲醇溶液35℃处理24小时的方法可使之开环。二种蛋白N端肽8个氨基酸残基顺序均为:Pyroglutamic acid-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala-Leu-Arg-。羧肽酶酶解的动态分析证明MaI羧端的氨基酸顺序为-Phe-Gln-Leu-Ala-Ser,MaⅡ为-Phe-Gln-Leu-Ala。其差别仅在于MaⅡ缺一个Ser,这一结果表明MaⅠ和MaⅡ的主要差异不是在端肽。