PPAR??激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞生长 抑制及诱导凋亡作用研究

目的:观察氧化酶体激活物增殖受体(PPARγ)激动剂罗格列酮(ROZ)在体外激活PPARγ后对MCF-7细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法:MTT法检测ROZ对MCF-7细胞的生长抑制作用;集落形成实验观察ROZ对MCF-7细胞集落形成的影响;不同浓度ROZ作用72h,Hoechst33342染色观察MCF-7细胞的形态变化,流式细胞光度分析术(FCM)检测凋亡细胞百分率以及ROZ对细胞周期的影响;Western blot方法检测ROZ对MCF-7细胞Bcl-2、Caspase-3表达的影响。结果:ROZ可呈剂量依赖性抑制MCF-7细胞的生长及集落形成。ROZ浓度为6×10-5M和3×10-4M时则G1期细胞数明显增加,S期相应减少。Hoechst33342染色经ROZ处理的肿瘤细胞染色质呈颗粒状,且有凋亡小体出现。FCM检测结果显示,ROZ作用72h凋亡细胞数达22.05%。Western blot提示ROZ可抑制Bcl-2表达,促进Caspase3表达。结论:ROZ在体外可抑制MCF-7细胞的增殖并诱导其凋亡,这可能与其抑制Bcl-2表达、促进caspase3表达有关。提示ROZ有望成为乳腺癌治疗药或肿瘤治疗的辅助用药,PPARγ有潜力成为肿瘤治疗的新靶点。     

罗格列酮抑制人胃腺癌SGC7901增殖机制的研究

目的：探讨在体外不同浓度的过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮（ROZ）对人胃癌细胞系SGC7901的生长及细胞周期的影响。方法：采用MTT法比色实验、集落形成实验、电子显微镜,透射电镜,流式细胞仪分别观察不同浓度罗格列酮0.08μmol/L,0.4μmol/L,2μmol/L,10μmol/L,50μmol/L,作用于SGC7901细胞,对细胞增殖,细胞形态和细胞周期的影响。结果：ROZ可抑制SGC7901细胞的生长以及SGC7901细胞集落的形成,并呈现剂量依赖性,其半数抑制浓度（IC50）约为50μmol/L。透射电镜低倍镜以及高倍下可见凋亡细胞。流式细胞仪结果显示,ROZ可抑制SGC7901细胞,引起G0/G1期细胞大量增加,S期细胞减少,且细胞周期停滞于G1期。结论：ROZ具有抗肿瘤作用,能够抑制SGC7901细胞的增殖并诱导凋亡,这种作用与其诱导细胞周期G0/G1期的停滞和诱导凋亡作用有关。因此,ROZ有望成为胃癌治疗的辅助用药亦或治疗药,PPARγ有潜力成为肿瘤治疗的新靶点。     

GSTM潜抑制剂双依他尼酰乙二胺对人耐顺铂卵巢癌细胞COC1/DDP的抗肿瘤活性

为探讨双依他尼酰乙二胺(EDEA)对人耐顺铂卵巢癌细胞(COC1/DDP)的抗肿瘤活性,本实验用CCK-8细胞增殖实验检测顺铂(DDP)及双依他尼酰乙二胺对细胞生长的抑制作用,用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot检测细胞内Bcl-2家族凋亡相关蛋白表达,瑞氏染色观察细胞形态。结果显示,EDEA对人正常细胞HEK293、LO2的低毒剂量接近1.2μmol/L,DDP对上述细胞低毒剂量约1.0μmol/L。分别作用COC1/DDP细胞24 h、48 h、72 h后,EDEA的半抑制浓度IC_(50)均为0.67μmol/L,但DDP对应IC_(50)分别为52.9μmol/L、18.1μmol/L和15.2μmol/L。在浓度均为1.0μmol/L时,EDEA作用COC1/DDP细胞48 h后其凋亡率接近44%,而DDP作用此细胞48h后凋亡率仅约4%。与单用1.0μmol/L DDP处理相比,1.0μmol/L EDEA作用48 h后Bcl-2等抗凋亡蛋白下调,Bax等促凋亡蛋白上调,且p-Akt表达被抑制,细胞形态发生凋亡样改变。结论,EDEA对人正常细胞低毒剂量与DDP相当但对COC1/DDP有显著生长抑制作用,且药效远强于相同浓度DDP;EDEA对耐顺铂卵巢癌细胞COC1的生长抑制作用与p-Akt表达抑制和细胞凋亡增强相关。     

γ-生育三烯酚联合亚砷酸对急性早幼粒细胞NB4生长的抑制作用及机制

目的:研究γ-生育三烯酚联合亚砷酸对急性早幼粒细胞NB4生长的抑制作用及可能的分子机制。方法:采用CCK-8、细胞周期实验检测细胞增殖、利用激光共聚焦显微镜、Annexin V/PI染色、Caspase活性检测、Western Blot等方法测定细胞凋亡。采用1μmol/L ATO及不同浓度(0、15、30、45μmol/L)的γ-生育三烯酚处理NB4细胞24、48和72小时,通过CCK-8检测细胞的增殖情况,流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测细胞周期和凋亡情况,检测Caspase3,8,9的活性,Western Blot检测细胞中c-caspase-3、Bcl-2和survivin的蛋白表达。结果:γ-生育三烯酚联合亚砷酸显著抑制NB4细胞增殖(P0.01),且随着作用时间延长和γ-生育三烯酚浓度的增加,其增殖抑制作用增强;细胞周期阻滞在S期,S期的比例由38.21%±2.99上升到50.31%±5.03;γ-生育三烯酚联合亚砷酸诱导NB4细胞凋亡,1μmol/L ATO联合15、30μmol/L的γ-生育三烯酚处理48h后,细胞活率分别为82.27%±3.16、66.97%±3.17、12.63%±2.66;1μmol/L ATO联合30μmol/L的γ-生育三烯酚处理后,NB4细胞caspase-3,-8,-9的活性均较ATO单独用药组显著增高,c-caspase-3表达增高而Bcl-2和survivin蛋白的表达无明显变化。结论:生育三烯酚联合亚砷酸对急性早幼粒细胞NB4的生长具有抑制作用,此作用可能与抑制增殖并诱导凋亡相关,其作用靶点可能与促进Cas-pase诱导的凋亡有关。     

醋酸铅对体外培养大鼠肾小管上皮细胞的毒性损伤

探讨醋酸铅对体外培养的大鼠肾小管上皮细胞系HBZY-1的细胞毒性效应.用不同浓度的醋酸铅(30、40、50 μmol/L)作用HBZY-1细胞24 h、48 h和72 h,采用CellTiter-Glo(R)萤光细胞活性检测盒测定细胞存活情况;用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果显示经30、40、50μmol/L醋酸铅处理...     

雷公藤红素对FADU细胞增殖抑制和促进凋亡作用

目的:探索不同浓度雷公藤红素(celastrol)对下咽癌FADU细胞增殖抑制及促进其凋亡的机制。方法:用不同浓度(0μmol/L,1μmol/L,3μmol/L,5μmol/L)雷公藤红素作用于FADU细胞,倒置显微镜下观察雷公藤红素干预后细胞形态变化情况;CCK-8法检测不同时间段(24、48、72 h)药物干预后FADU细胞的增殖变化;流式细胞仪检测雷公藤红素干预24 h后细胞凋亡率变化;Western-Blot检测不同药物浓度作用24 h后FADU细胞PI3K信号通路中与凋亡相关的关键蛋白的表达变化情况。结果:与对照组相比,在倒置显微镜下FADU细胞形态明显改变,细胞数量明显减少,细胞边界模糊不清,漂浮细胞增多,而随着用药浓度的增加细胞的增殖能力被显著抑制,PI3K、AKT、P-m TOR、Bcl-2蛋白表达明显减少,并且肿瘤细胞的凋亡率明显增高。结论:雷公藤红素对FADU细胞具有显著的增殖抑制效果,同时能够促进细胞凋亡,其原理主要与通过下调PI3K信号通路凋亡相关蛋白的表达有关。     

氯化钴对小鼠NIH3T3细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察氯化钴(Cocl2)对体外培养的小鼠NIH3T3细胞增殖和凋亡的影响.方法:首先利用MTT法和流式细胞术检测不同浓度Cocl2对小鼠NIH3T3细胞增殖及凋亡的影响.然后利用免疫印迹检测HIF-1α和凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达.结果:(1)MTT结果显示,低于250μ mol/L的Cocl2作用NIH3T3细胞24 h对细胞的增殖活力影响不大,当浓度增加到500μ mol/L以上时会明显抑制细胞的增殖活力.(2)流式细胞仪检测结果显示低浓度Cocl2(≤ 250μ mol/L)并不会引起NIH3T3细胞明显的凋亡和坏死,增加浓度(≥500μmol/L)会导致细胞早期凋亡和坏死增加.3)不同浓度Cocl2作用NIH3T3细胞24 h均可诱导细胞中HIF-1α表达上调,同时Bax/Bcl-2的比值增高.结论:高浓度Cocl2可以抑制小鼠NIH3T3细胞增殖,促进凋亡发生.     

短链脂肪酸调控人髓母细胞瘤UW228-3细胞增殖、凋亡和侵袭作用的研究

目的研究菌群代谢产物短链脂肪酸——丙酸、丁酸对人髓母细胞瘤UW228-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法分别用10μmol/L丙酸和5μmol/L丁酸处理UW228-3细胞,通过HE染色观察细胞形态,MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕检测细胞侵袭,PCR和Western Blot检测凋亡相关基因和蛋白的表达。结果 10μmol/L丙酸和5μmol/L丁酸能够有效抑制UW228-3细胞增殖能力,增加细胞凋亡率,并显著抑制UW228-3细胞侵袭能力,提高Caspase-3基因以及蛋白表达,降低c-Myc、Bcl-2、Survivin基因以及蛋白的表达。结论菌群代谢产物丙酸、丁酸能够抑制人髓母细胞瘤UW228-3细胞增殖和侵袭,并促进细胞凋亡,具有治疗髓母细胞瘤的潜在价值。     

姜黄素抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖和诱导凋亡的作用

目的:探讨姜黄素对大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖和凋亡的影响.方法:采用改良组织块消化法培养原代大鼠气道平滑肌细胞,以PDGF诱导ASMCs增殖建立模型.MTT法检测不同浓度姜黄素抑制ASMCs增殖情况.Hoechst 33342染色和DNA Ladder检测细胞凋亡,Western Blot检测ERK1/2和磷酸化ERK1/2的表达.结果:①MTT检测给予姜黄素处理12 h后,与模型组相比较,10 μmol/l组、20μmol/l组和40 μmol/l组的细胞平均抑制率均增加显著.P<0.05;48 h后各浓度组抑制率均升高.②Hoechst 33342观察到10μmol/I、20μmol/1和40 μmol/l姜黄素组中强荧光细胞比例随姜黄素刺量增大而增多,细胞核内多个不均一蓝染现象.③DNA Ladder观察到40μmol/l组姜黄素处理组出现梯状分布.④姜黄素(40 μmol/1)与PDGF(20 ng/m1)共同处理30 min和60 min后P-ERK1/2蛋白表达水平显著降低.结论:姜黄素对ASMCs增殖有抑制作用,同时高浓度的姜黄素可促进AsMCs凋亡,可能与下调ERK1/2的表达有关.     

紫草素逆转埃克替尼对肺癌EGFR-TKI 耐药及其机制的研究

目的:观察紫草素联合埃克替尼对肺腺癌耐药细胞H1975增殖的影响,探讨克服耐药可能的作用机制。方法:应用MTT法检测紫草素(1.25~20μmo/L)、埃克替尼(5~100μmol/L)及两药联合干预对H1975细胞生长的抑制作用;流式细胞术观察紫草素(1.25μmol/L)、埃克替尼(10μmol/L)及联合使用对H1975凋亡作用;Western blot检测不同干预对H1975细胞EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT、ERK、p-ERK和凋亡相关蛋白PARP表达水平的影响。结果:MTT检测结果显示,与单药组相比,联合用药组细胞H1975增殖能力明显减弱,差异有统计学意义(P0.05);流式细胞术结果显示,联合用药组细胞的凋亡率达到(52.45±3.04)%,较紫草素组细胞凋亡率(22±1.17)%和埃克替尼处理组细胞凋亡率(15.35±5.85)%明显提高,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示,单药组下调了p-EGFR、p-Akt蛋白水平的表达,而联合用药组显著抑制了p-ERK、PARP蛋白水平的表达,差异有统计学意义(P0.05),EGFR、AKT、ERK蛋白表达无差异(P0.05)。结论:紫草素联合埃克替尼能明显抑制H1975细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡;抗肿瘤机制可能与调节EGFR信号通路相关蛋白表达有关。