人r型基因工程干扰素中残余DNA的检测

采用地高辛标记探针,以核酸杂交法检测人ｒ型基因工程干扰素（ＩＦＮ－ｒ）制品中残余ＤＮＡ含量,结果表明,自制的二组ＤＮＡ标准品相应量间显示的色斑相差悬殊,提示高蛋白含量对痕量残余ＤＮＡ的检测干扰较大,添加ＩＦＮ－ｒ的ＤＮＡ标准品比纯ＤＮＡ标准品更合理,以此测得各样品均符合ＷＨＯ要求（〈１００ｐｇ／剂量）,方法敏感性为４ｐｇ。     

胸腺肽α_1活性片段和其自旋标记衍生物的合成及免疫活性研究

报道了胸腺肽α_１活性片段Ｔｈｙｍｏｓｉｎα_１［Ｌｙｓ（２３）］（２３－２７）ＯＨ和其自旋标记衍生物的合成及对实验动物免疫功能的影响。其氨基酸序列分别为Ｈ_２Ｎ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－ＯＨ,用Ｔｈｙα_１［Ｌｙｓ~（２３）］表示,修饰物为Ｇｌｕ－ＯＨ）,用Ｔｈｙα_１［Ｌｙｓ~（２３）］·Ｒ表示。ＨＰＬＣ测得该肽的纯度在９０％以上,ＥＳＲ谱测定自旋标记衍生物给出氮氧自由基信号,氨基酸组成与预期值相符。实验小鼠腹腔连续注射剂量为０．１、１、１０、１００和１０００μｇ／ｋｇ的该肽１０天后,发现腹腔巨噬细胞吞噬功能、ＥＲＦＣ阳性率及血清溶血素含量明显升高,且最佳剂量在０．１－１０μｇ／ｋｇ范围。实验结果表明人工合成胸腺肽α_１活性片段及其自旋标记衍生物具有显著的免疫促进活性。     

老年大鼠单核／巨噬细胞分泌和表达肿瘤坏死因子增多

为研究老年时肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）分泌及表达的改变,在内毒素（ＬＰＳ）１．０μｇ／ｍｌ刺激大鼠单核／巨噬细胞后,用酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）测定培养液中ＴＮＦ－α含量,用半定量逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＫ）测定ＴＮＦ－αｍＲＮＡ。同时测定培养液中一氧化氮（ＮＯ）和前列腺素Ｉ２（ＰＧＩ２）的含量。结果显示：老年鼠ＴＮＦ－α分泌量及其ｍＲ－ＮＡ明显高于青年鼠。ＮＯ产量在老年鼠与青年鼠之间无明显差异。老年鼠ＰＧＩ２分泌明显低于青年鼠。由于ＰＧ能抑制ＴＮＦ－α释放,从而推测,ＰＧＩ２产生能力的降低可能是老年大鼠单核／巨噬细胞ＴＮＦ－α分泌量明显高于青年鼠的原因之一。     

小鼠单链抗体文库的构建和抗人的IFNα-1b抗体的筛选

小鼠单链抗体文库的构建和抗人的ＩＦＮα－１ｂ抗体的筛选杜东毅马学军张丽兰郭德本侯云德（中国预防医学科学院病毒学研究所,北京１０００５２）关键词噬菌体表面呈现,抗体库,ｒＩＦＮα－１ｂ（重组干抗素α１ｂ）目前,抗体的研究与生产主要依赖于单克隆抗体技术,...     

抗人α2a型基因工程干扰素单克隆抗体及亲和层析柱的研制

应用鼠－鼠杂交瘤细胞技术建立了三系稳定分泌抗重组人α２ａ型干扰素（ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ）单克隆抗体细胞系１Ａ５、１Ｂ５和２７Ａ７。细胞连续传代和在液氮中冻存后复苏,分泌抗体能力不变,并且维持在较高水平,细胞培养上清效价１∶２５６～１∶４０９６,腹水１∶２６×１０５～１∶２７×１０８。Ｉｇ亚类测定,１Ａ５和１Ｂ５ＭｃＡｂ为ＩｇＧ１,２７Ａ７为ＩｇＧ２ａ。三系ＭｃＡｂ均识别ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ和－α２ｂ,与ｒＨｕ－ＩＦＮ－α１和正常大肠菌体裂解液无反应。竞争ＥＬＩＳＡ试验,三系ＭｃＡｂ分别针对ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ上三个不同表位。同ＭｃＡｂ建立双抗体夹心ＥＬＩＳＡ对ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ和－α２ｂ均可检测到１５０ｐｇ／ｍｌ,约１０ＩＵ／ｍｌ的敏感度。用提纯的单抗制备亲和层析柱,单抗偶联率９５％以上。三系单抗亲和层析柱均可将粗制ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ提纯到９７％以上纯度。平均回收率为：１Ａ５单抗柱９０２％,１Ｂ５单抗柱９５３％,２７Ａ７单抗柱９４７％。比活性平均值依次为１９４×１０８ＩＵ／ｍｇ,１９７×１０８ＩＵ／ｍｇ和１６４×１０８ＩＵ／ｍｇ,残余鼠ＩｇＧ量均符合规程要求。纯化ｒＨｕ－ＩＦＮ?     

干扰素基因表达调控研究进展

干扰素基因表达调控研究进展孙劲综述方企圣审（中国预防医学科学院病毒研究所,北京１０００５２）近年来,有关于扰素（ＩＦＮ）分子生物学的研究以及基因工程方法生产干扰素取得很大进展。本文将有关ＩＦＮ蛋白的诱导和基因调控机理方面最新进展作一综述。ＩＦＮ蛋白的...     

在大肠杆菌中提高人α1b型基因工程干扰素的表达

将人α１ｂ型干扰素（ＩＦＮ-α１ｂ）基因插入带有原核增强子样序列的新型载体Ｐｂｖ３２２,使干扰素在大肠杆菌中的表达水平明显高于原表达载体,达到１.６×１０^８ｕ／Ｌ培养液。重组质粒的特点是：含增强子序列Ｘ,ｔｒｐ启动子控制。利用ＤＥＡＥ-Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ＣＭ-Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析及单克隆抗体亲和层析纯化ＩＦＮ-α１ｂ,获得了电泳纯产品,其比活性为２×１０^７ｕ／ｍｇ,分子量为１９ｋＤａ。此外,用Ｐａｔ１５３代替Ｐｂｖ３２２,构建了带有和不带有Ｘ序列的两种表达载体,平行对比表明增强子Ｘ序列可以将ＩＦＮ-α１ｂ表达提高４倍     

肿瘤坏死因子－α（TNF－α）对常见呼吸道病毒的抑制作用

用人重组肿瘤坏死因子－α（Ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α,ＴＮＦ－α）和人天然α干扰素（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－α－,ＩＦＮ－α）在人胚胎肺纤维母细胞（ＨＥＦ）和Ｈｅｐ－２细胞系上对常见呼吸道病毒所致细胞病变抑制进行比较观察。病毒包括不同型别的腺病毒５株,单疱病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－Ｉ）１株,鼻病毒１株,仙台病毒１株,ＶＳＶ１株。结果提示ＴＮＦ－α和ＩＦＮ－α均具有广谱抗病毒活性。ＴＮＦ－α的抑毒作用能被ＴＮＦ－α申抗和ＩＦＮ－β单抗完全去除,被ＩＦＮ－α单抗部分去除ＴＮＦ－α的抗病毒效应。ＴＮＦ－－α中和试验的结果提示：ＴＮＦ抗病毒活性仍为ＩＦＮ－β诱生所介导。     

注射用重组人干扰素α2b冻干制剂稳定性试验

本文通过对三批注射用重组人干扰素α２ｂ（ｒＩＦＮ－α２ｂ）冻干制剂在不同温度下,保存不同时间取样,对其外观、生物学活性、ｐＨ值、溶解状态及无菌试验等各项理化指标的观察试验,结果本品的冻干制剂在－２０℃和４－８℃的条件下保存４２个月,其上述各项检定指标无明显变化,均符合质检规程,即本文制品在此条件下稳定性良好,有效期可定为三年。同时说明该产品的生产工艺稳定。     

重组人α8型干扰素的纯化与鉴定

采用酵母表达载体进行重组人α８型干扰素（ＨｕＩＦＮα８）的表达,该表达菌株可将重组α８型干扰素分泌进入培养基中,回收培养基进行纯化,然后利用超滤浓缩,先过Ｓ．ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱,再进行ＤＥＡＥ-ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ层析和Ｇ-２５脱盐,最后用高效液相ＨＰＬＣ,ＳＤＳ-ＰＡＧＥ丙烯酰胺凝胶电泳及肽图等方法对纯化产品进行鉴定。采用以上两步纯化方法纯化酵母分泌表达的重组人α８型干扰素纯度可达９５％以上,其比活性为３.０×１０^８ｕ／ｍｇ。     

基因工程人干扰素α2b和α2a亚型抗病毒效应的实验研究

本文采用鸡胚接种法和微量细胞病变抑制法研究了不同亚型α干扰素（α２ａＩＦＮ和α２ｂＩＦＮ）抗流感病毒、脊髓灰质炎病毒以及麻疹病毒的作用。结果表明：两种亚型α干扰素均显示明显的抗病毒效应,其中（１）α２ｂＩＦＮ抗流感病毒作用略强于α２ａＩＦＮ,（２）两亚型α干扰素抗脊髓灰质炎和麻疹病毒作用相似。     

大肠杆菌表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的纯化

对重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）高效表达克隆ｐＺＷ．ＧＭ的表达产物进行了纯化,并对纯化的ＧＭ－ＣＳＦ进行了Ｎ端氨基酸序列分析。人ＧＭ－ＣＳＦ基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在,经过超声破菌、包涵体抽提、凝胶过滤层析、复性、离子交换一系列化步骤,终产物纯度达９９％,按蛋白总量计算回收率达１０％,比活性达１×１０＾７ｕ／ｍｇ蛋白质。通过测定纯化人ＧＭ－ＣＳＦ的Ｎ端１     

不同功能位点介导α干扰素的免疫调节和中枢镇痛作用

细胞因子α干扰素（ＩＦＮα）具有中枢镇痛作用。抗内源性阿片肽血清与ＩＦＮα能发生明显的交叉反应,提示ＩＦＮα与内源性阿片肽之间存在着共同的抗原决定基。采用基因定点突变技术,获得系列ＩＦＮα突变体,并分别测定其免疫学活性和镇痛能力。结果显示,ＩＦＮα突变体Ｙ１２９Ｓ－ＩＦＮα免疫学活性显著下降,但仍然保留了很强的镇痛能力,阿片受体拮抗纳洛酮能够阻断Ｙ１２９Ｓ－ＩＦＮα的镇痛作用。实验结果表明,ＩＦＮ     

吗啡－3－葡糖苷酸（M3G）对伤害性刺激诱导大鼠脊髓c－fos表达的影响

本工作观察吗啡在体内的主要代谢产物──吗啡－３－葡糖苷酸（Ｍ３Ｇ）椎管内注射（ｉ．ｔ．）对福尔马林（Ｆ）致病诱导脊髓神经元ｃ－ｆｏｓ表达的影响。实验在清醒的ＳＤ大鼠上进行。结果表明,Ｍ３Ｇ１．１×１０－８ｍｏｌ（５μｇ）,５．４×１０－８ｍｏｌ（２５μｇ）,１．１×１０－７ｍｏｌ（５０μｇ）ｉ．ｔ,均能使后掌注射Ｆ１ｈ后,用ＡＢＣ法检测的腰段脊髓神经元Ｆｏｓ蛋白样免疫阳性反应（ＦＬＩ）细胞显著增加,效应呈剂量依赖性。低剂量的Ｍ３Ｇ,ＦＬＩ细胞主要位于致痛肢体同侧脊髓的Ⅰ,Ⅱ层;高剂量则使ＦＬＩ细胞出现于双侧脊髓的浅层与深层。上述结果提示Ｍ３Ｇ增强脊髓伤害性传入神经通路的活动。     

α—干扰素对中枢神经系统的作用

本文综述了免疫调节因子α－干扰素对中枢神经系统（ＣＮＳ）的作用。ＩＦＮα的中枢作用不仅改变了神经系统是免疫特免性的认识,而且打破了对ＩＦＮα功能的传统认识,同时提出了ＩＦＮα作用新的机制。     

肿瘤坏死因子对人滋养层干扰素α分泌的影响

目的和方法：本文采用人妊娠６～８周胎盘组织块的体外培养方法,通过检测干扰素免疫活性和抗病毒活性研究肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）对人滋养层干扰素（ＩＦＮ）分泌的影响。结果：ＴＮＦα可显著促进人滋养层ＩＦＮα的分泌,并呈剂量和时间依赖关系。同时各浓度的ＴＮＦα还可促进βＨＣＧ的分泌,并呈一定的剂量依赖关系。此外,我们还证明ＩＮＦα可显著抑制人滋养层细胞的生长,而ＴＮＦα则无明显作用。结论：ＴＮＦα可通过促进人滋养层干素α和βＨＣＧ的分泌,从而影响人胎盘的功能活动     

N—糖链在纤连蛋白分泌及纤连蛋白受体与配体结合的作用

应用能断糖蛋白Ｎ－糖链合成的衣霉素（ＴＭ）,研究了Ｎ－糖链缺失对ＨＴ１０８０细胞分泌纤连蛋白（Ｆｎ）以及纤连蛋白受体（ＦｎＲ）与配体结合的影响。结果表现,１μｇ／ｍｌ的ＴＭ可抑制Ｎ－糖链的合成（此时,３Ｈ－甘露糖掺入下降６３％）,但细胞分泌Ｆｎ的量仅下降３％,这主要是由于蛋白合成受ＴＭ抑制（２５％）而引起。因而,Ｎ－糖链缺失可能并不影响Ｆｎ的分泌,而在同样条件下,单个细胞结合１２５Ｉ－Ｆｎ的量显著     

ELISA技术筛选200种中草药抗HBsAg的实验研究

使用ＥＬＩＳＡ技术对２００种中草药水提取物进行抗ＨＢｓＡｇ的实验研究,共筛出有效药物７种（占总数的３．５％）。若按５种不同剂量（０．３、０．６、１．２、２．５、５．０ｍｇ／１００μｌ）的药物、２种不同浓度的ＨＢｓＡｇ（１０．９２、１４．２６Ｐ／Ｎ值）与３种不同接触时间（立即、１ｈ、２ｈ）的１０项Ｐ／Ｎ值均数来综合评价药效指数时,７种有效药物的次序为青蒿（１．６７Ｐ／Ｎ值）、大蒜（２．１９Ｐ／Ｎ值）、红孩儿（２．３１Ｐ／Ｎ值）、仙鹤草（２．３１）、魔芋（２．３２Ｐ／Ｎ值）、冬瓜皮（２．６３Ｐ／Ｎ值）和猕猴桃（２．８９Ｐ／Ｎ值）。     

小鼠腺病毒单克隆抗体的研制及初步应用

应用杂交瘤技术获得４株分泌抗小鼠腺病毒（ＭｕｒｉｎｅＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓＭＡｄ）单克隆抗体细胞株,并对其特性进行分析。经鉴定,它们所分泌的抗体类型均为ＩｇＭ,腹水效价为１０－３～１０－６。相对亲和力分别为０．１μｇ／ｍｌ（Ａ９）、０．６５μｇ／ｍｌ（Ｂｌ）、１２．５μｇ／ｍｌ（Ｇ４）和２３μｇ／ｍｌ（Ｄ４）。与其他１０种鼠源性病毒均无交叉反应,表明ＭｃＡｂ具有良好的特异性。单抗标记ＦＩＴＣ后用于人用鼠源性单抗制品及各种传代细胞和原代细胞中ＭＡｄ检测,获得良好的实验结果。     

脑室注射强啡肽A—（1—13）对肾水钠钾排出的影响及其机制

实验在１２％乙醇麻醉大鼠进行,侧脑室注射强啡肽Ａ－（１－１３）（ＤＹＮ）观察对肾水钠钾排出的影响。注射ＤＹＮ１０μｇ可使大鼠尿量明显增加,尿钠,尿钾浓度降低,但排钠量,排钾量无明显变化。注药后２０ｍｉｎ尿量开始增加,持续１２０ｍｉｎ。侧脑室预先注射纳洛酮（ＮＸ２０μｇ／μｌ）或阿托品（Ａｔｒ１０μｇ／μｌ）均可阻断ＤＹＮ的利尿效应。