温度对BrdU—标记的CH0细胞染色体形态学的影响

培养的细胞在5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)存在下,经过两个复制周期,在第二次分裂细胞染色体的一条单体中,DNA双链的胸腺嘧啶均为其同源物溴尿嘧啶所替代,而另一条染色单体只替代一股链的胸腺嘧啶,因而当用荧光染料33258 Hoechst处理,或荧光染料配合Giemsa染色,或用加热的磷酸盐溶液处理,Giemsa染     

赤麂外周血淋巴细胞常染色质和异染色质中姐妹染色单体交换的分布

姐妹染色单体交换(SCE)是一种染色体结构畸变。当培养细胞在5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)存在下,经过两个复制周期,在第二次分裂染色体(M_2)的一条单体中,DNA双链的胸腺嘧啶均为其同类物溴尿嘧啶所替代,而另一条染色单体只替代了一股链的胸腺嘧啶。当以某些荧光染料处理(Latt,1973)或荧光染料配合Giemsa染色(Perry and Wolff,1974)或用改良的Giemsa染色(Korenberg and Freedlender,1974)吋,全替代的染色单体呈暗荧光或染色较浅;半替代的染色单体发出较亮的荧光或染色较深。因此能比较容易     

哺乳动物姐妹染色单体互换检测化学物质诱变性及同Ames氏法相比较

1973年,Latt用哺乳动物细胞在含有5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)的培养液中接连进行两次有丝分裂,然后用荧光染料染色,使有丝分裂中期染色体的一条染色单体荧光强,另一条染色单体荧光弱,并检出了两条姐妹染色单体之间的互换(姐妹染色单体互换简称SCE)。翌年,Parry 和Wolff 以及Korenberg 等用     

要鼓励学生发表意见

一堂课中,老师常会遇到学生提问、质疑或争辨,即通常所说的“插嘴”。如,师:“每个染色体含有一个DNA分子(甲种本第130页)。”生:“不准确。应该是:每个染色体上至少含有一个DNA分子。在细胞分裂间期,染色体复制,每个染色体的着丝点连着两个染色单体(姊妹染色单体),而每个染色单体上有一个DNA分子,直到分裂后期,染色单体分开之前,每个染色体上都有二个DNA分子。”     

观察小鼠活体骨髓细胞SCE的新技术

姊妹染色单体互换（SCE)离体测试系统 由于易受方法上误差的影响,且不能测出经动 物体内代谢活化系统激活后才能转化为活性致 突变因子,因而离体试验的结果不能完全代表 被测试物的活性诱变效应。为了解决活体SCE 测试中BrdUrd在动物体内迅速降解的问题, 目前一般应用BrdUrd多次注射法或药片埋植 法［[2.31,但手续繁琐且用药量大。Kanda等人 (1979）和Pedro (1980）先后采用吸附BrdUrd 的活性炭注射法观察小鼠活体精原细胞和骨髓 细胞的SCE,使活体SCE技术大为简化［[4,81。我 们在此基础上用IdUrd代替BrdUrd将Pedro的 二次BrdUrd一活性炭注射观察活体骨髓细胞 SCE的方法进一步简化为一次注射,建立了更 为简便的活体SCE检测技术,以适合大规模测 试需要。     

一种显示姊妹染色单体互换的简易技术BUdR-Giemsa技术

姊妹染色单休互换最早是Talor(1957年） 在植物细胞中使用³.H一放射自显影技术时发现 的^[1].1973年Latt等^[2].发现,在含有5-澳脱氧 尿嚓睫核普(5-Bromodeoxyuridine,以下简称 BUdR）的培养基中,生长两个周期的细胞,其 中期染色体用Hoechst 33258萤光染料染色, 在萤光显微镜下可观察到姊妹染色单体呈现不 同强度的萤光。可以作为研究姊妹染色单体互 换的一个方法。1974年Korenberg等^[3]对上述 方法进行了改进,可以不经Hoechst 33258萤 光染料染色和光照处理,直接将中期染色体标 本放在87-89⁰.C 1 M Na H₂PO₄ (pH 8.0)溶 液中浸泡处理10分钟,经蒸馏水漂洗然后用 Giemsa染色,在普通光学显微镜下,使姊妹 染色单体显示出深浅不同的颜色,从而简化了 Latt的技术,这个方法被称为BUdR-Giemsa技 术。     

5-碘脱氧尿苷对活体中姐妹染色单体互换的一些效应

1976年,Vogel和Bauknecht报道了在活体中显示姐妹染色单体差别染色(SCD)的方法,此后,这种方法及姐妹染色单体互换(SCE)法便成为检测诱变剂和致癌物的有效手段。1980年,我们实验室成功地用5-碘脱氧尿苷(IdUrd)代替5-溴脱氧尿苷(BrdUrd),多次在小鼠腹腔注射后观察骨髓细胞的SCE,     

为什么等位基因有时在减Ⅱ时分离?

答:这是因为在减数分裂中第一次分裂的四分体时期,同源染色体的非姊妹染色单体间交叉互换对应片段,使位于这部分的基因从一条染色体上移到另一条染色体上,结果使不同染色体上的等位基因就存在于一条染色体的两个染色单体上,在第二次分裂中,着丝点分裂,基因就随两个染色单体的分开而分离。见下图。     

着丝粒散开和染色单体期外分离— 一种导致肿瘤细胞染色体非整倍性的机制

染色体着丝粒散开（centromere spreading）表现 为染色休的两条姊妹染色单体在着丝拉区已经分开， 但在染色体的其余部分仍紧密结合在一起。这种现象 极为罕见，在国内尚未有报道。在对柏基特淋巴瘤细 胞株进行细胞遗传学研究时，我们在同一细胞发现了 许多具有程度不同的着丝粒散开的染色体。散开的程 度由单体间出现细小的空隙到着丝拉区膨隆成气球或 大的空圈状。由子染色体两臂长短不同，致使一些亚 中着丝拉染色体呈开瓶匙或套圈状（图1，二），与此同 时，另一些染色体的短臂已完全分开，长臂的两条单体 大部分也巳分开，使染色体形如弹弓或仅以末端相连 （图lb,c)o染色单体分离进程上的差异还表现为某些 染色体已完全分离为单体（图1, d)，而另一些染色休 则完全未见分离的迹象。     

亚硫酸氢钠（SO2）对人血淋巴细胞染色体畸变,姊妹染色单体互换及微核的效应

本文研究结果表明,亚硫酸氢钠（二氧化硫）能够引起人血淋巴细胞姊妹染色单体互换（ＳＣＥ）和微核（ＭＮ）率的增加,可使淋巴细胞有丝分裂周期延迟及细胞分裂指数下降,且这些作用有显著的剂量效应关系。结果指出,亚硫酸氢钠在低浓度下仅引起细胞染色单体型畸变,在高浓度下既可引起染色单体型畸变,又可引起染色体型畸变。结果还指出,亚硫酸氢钠对染色体畸变（ＣＡ）和ＭＮ的诱发效应有明显的个体差异。硫酸钠未能引起上述细胞     

毒性弥漫性甲状腺肿患者外周血淋巴细胞SCE须率的研究

姊妹染色单体交换（SCE）系一条染色体中 两条姊妹染色单体之间同源节段的互换。SCE 可以自发产生,各物种细胞中自发SCE频率 相对比较稳定。但若用诱变剂或致癌剂处理细 胞,则SCE频率可显著提高u1。已经证实,一 些物质的诱变、致癌力与诱发SCE能力之间 存在很高的相关性[=,330目前,国内SCE技术 已用于多种遗传病、肿瘤和病毒性传染病的病 因学研究,以及化学“三致即物质作用机理的研 究［[3,A)。对毒性弥漫性甲状腺肿患者细胞SCE 频率尚未见报道。为了从细胞及亚细胞水平探 索本症的病因．,作者对20例毒性弥漫性甲状腺 肿患者外周血淋巴细胞SCE频率和20例正 常人细胞SCE频率进行了分析研究,现报告 如下。     

昆虫细胞制备AAV-ITR基因表达微载体

AAV-ITR基因表达微载体是只含有腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)倒置末端重复序列(Inverted terminal repeats,ITR)、基因表达顺式元件和目的基因,而不含有其他外源DNA序列的双链或单链DNA。本研究利用杆状病毒表达系统,制备得到两种重组杆状病毒Bac-ITR-EGFP和Bac-inrep,并将二者的P3代病毒共同感染昆虫细胞Spodoptera frugiperda(Sf9),抽提小分子量DNA,获得AAV-ITR-EGFP基因表达微载体,2×107的Sf9细胞抽提可以得到100μg AAV-ITR-EGFP基因表达微载体,核酸电泳显示AAV-ITR-EGFP基因表达微载体主要以单体和二聚体的形式存在。将AAV-ITR-EGFP基因表达微载体通过polyethylenimine(PEI)转染HEK 293T细胞,24 h后荧光显微镜观察有EGFP表达,48 h后达到高峰,转化效率达到65%。     

5-碘脱氧尿普对活体中姐妹染色单体互换的一些效应

1976年,Vogel和Bauknecht报道了在活 体中显示姐妹染色单体差别染色（SCD）的方 法^[11],此后,这种方法及姐妹染色单体互换 (SCE）法便成为检测诱变剂和致癌物的有效手 段’^[6-10]. 1980年,我们实验室成功地用5-碘脱 氧尿苔(IdUrd）代替5-嗅脱氧尿普(BrdUrd), 多次在小鼠腹腔注射后观察骨髓细胞的SCE^[2], 虽得到了很好的结果,但操作麻烦,药物毒性 大,实验动物极易死亡。因此,我们参照Allen 等人的工作^[5],对上述方法作了改进,用埋植药 片法让药物在活体内缓慢释放,诱发SCE,得 到了满意的结果。     

ADPRT抑制剂对不同辐射敏感性人肿瘤细胞株的作用比较

从细胞的克隆形成能力和细胞DNA双链断裂及修复几方面分析了两个人卵巢癌细胞株HOC8和A2780对电离辐射的敏感性并探讨了ADP-核糖基转移酶（ADPR）的特异性抑制剂3-氨基苯甲酰胺（3－AB）对二者的辐射增敏效应,结果表明A2780细胞的辐射敏感性大大高于HOC8细胞,其D0值分别为0．9和2．5Gy;γ射线所致两株细胞的初始DNA双链断裂水平没有显著差异,但A2780细胞对DNA双链断裂的修复能力比HOC8细胞低．3AB能降低受照细胞的克隆形成能力及细胞对双链断裂的修复能力,其中对HOC8细胞的作用更为明显．     

两条非姊妹染色单体间的交换值能否超过50％呢?

答一般情况不会超过30％。当不完全连锁时,非姊妹染色单体之间要发生交换。假设在减数分裂时100％的性母细胞内的同源染色体之间发生了交换,且交换都发生在连锁基因相连的区段内,由于在一个水平上,只能有两条非姊妹染色单体之间发生一次交换,故最后产生的重组型配子也只能是配子总数的一半,即重组值为50％。但一般是达不到这种程度的。通常     

中国仓鼠肺细胞双份染色体及其DNA分子的交换重组

艾菲的咔啉(aphidicolin)能抑制真核生物细胞核内的a-多聚酶,同时还能诱导中国仓鼠细胞核内DNA分子的内复制,由此形成的双份染色体经5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记,单股BrdU替换的染色单体总是位于双份染色体的内侧,而双股BrdU替换的染色单体总是位于双份染色体的外侧。DNA分子在内复制的过程中,经交换重组,表现在双份染色体上为姐妹染色单体内的交换和非姐妹染色单体间的交换。双份染色体中的4条染色单体在有丝分裂中前期,从三维空间构型变为平面构型时,在引力和张力的相互作用下,致使染色单体在交换处发生扭曲,成形染色单体间的交叉,从而使有直接亲缘关系的染色单体仍成对联系在一起呈规则分布状态。     

一种最简单的姐妹染色单体区别染色法

姐妹染色单体交换(SCE)测定,由于操作简单,观察客观,又具有高度的敏感性,因此是近年来颇受重视的一项细胞遗传学手段。并且已广泛应用于遗传学、临床医学及环境科学等方面的研究。下面我们就本实验室采用碱性磷酸缓冲液加吉姆萨染色,能使已标记上BudR染色体的两条单体很好地区别染色的技术简单介绍如下: 一、BudR标记:在细胞培养液中加10—20微克/毫升的5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BudR的用量必须视细胞株的特性在此范围内调整),黑暗条件下培养两个细胞周期,然后按常规收获细胞,制作染色体标本。 二、区别染色:制备好的染色体标本(至少要在室温下放置一天)直接用新配的0.3M磷酸氢二钠(用1N氢氧化钠调pH至10左右,pH<9染色体的两条单体不能区别染色)配制3％吉姆萨溶液,染色10分钟,自来水冲洗,干燥镜检。     

植物姊妹染色单体区分染色的简易方法

姊妹染色单体区分染色(SCD)是七十年代中期发展起来的染色体处理技术,因为它涉及了细胞动力学、细胞周期、染色体半保留复制、染色体“单线说”以及染色体畸变等一系列的细胞生物学理论问题,此外还能用于分析姊妹染色单体互换(SCE)频率,来检测诱变因素和致癌物质,所以有关SCD的实验技术可作为细胞生物学实验课的更新内容。本文介绍植物     

姊妹染色单体差别染色(SCD)标本制作方法

姊妹染色单体交换(SCE)是检查致癌物或致突变物的细胞遗传学效应的一种新方法。它具有灵敏、准确和比较简便、快速的优点。近来,在研究染色体的分子结构、DNA复制方式、DNA的损伤和修复等基本问题方面,此法亦逐渐显示了重要性。兹将本实验室的操作技术介绍如下(以人外周血淋巴细胞培养为例):     

用人造微小染色体技术研究着丝粒和端粒的DNA结构与功能

为了在细胞世代中保持其稳定性,染色体起码应具备3个结构要素,那就是有一个DNA复制起点;一个着丝粒(ccntromere)使细胞分裂时两个姊妹染色单体能平均分配到子细胞里;最后,在染色体的两个末端必须有端粒(telomere),使DNA能完成复制。近年来人们采用分子克隆技术把真核细咆染色体的复制起点、着丝粒和端粒的DNA片段分别克隆成功。并且把它们互相搭配或改造而构成所谓“人造微小染色体”(aftificial minichromosomes),以研究这3种成分的结构与功能。 一、染色体复制起点 大肠杆菌质粒pBR322不能转化酵母细胞,因为pBR322上的DNA复制起点不能被酵母系统所识别,DNA不能复制。1979年Stinchcomb和Carbon实验室分别把带有遗传标记,例如Trp~+的酵母DNA的EcoRI片段插入pBR322,用来转化trp~-酵母,获得了带有质粒并能传代的Trp~+细胞。它们所含的质