食品微生物检验中菌落总数测定的注意事项

1菌落总数及测定菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物,它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度,与培养基混合,在一定培养条件下,每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。菌落总数就是指食品检样经过处理     

基于Photoshop 和计数软件精准计数平板上菌落的新方法

正"菌落总数"是农业、食品、医药卫生等行业进行质量检测的重要指标之一,目前常规的菌落计数方法是肉眼观察平皿逐个计数,需要花费较多的时间和精力[1-2]。本文推荐一种简便的平板菌落计数方法,经过使用和验证,与目测直接计数法相比,其计数结果更加准确,且效果明显优于菌落自动计数仪计数结果。现将方法介绍如下。     

TTC在螺旋平板法测定冷冻水产品中菌落总数的应用研究

研究以2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)作为指示剂在螺旋平板法测定冷冻水产品中菌落总数的适宜用量。通过对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌三株标准菌株制备的菌悬液在含梯度含量TTC的平板计数琼脂(PCA)中分别进行菌落计数、生长和显色观察实验,初步筛选出适宜的TTC含量范围。以冷冻水产品样品在该用量范围内的菌落计数和显色观察实验,验证在实际应用中的适宜性。验证实验结果显示:在TTC含量为1.5mg/100ml的组与未添加TTC的对照组菌落计数结果经统计学检验无显著性差异,且菌落显色情况良好,有利于计数的准确性。     

平板菌落计数的改进方法

平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释样液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数,根据其稀释倍数和取样结合总量即可换算出样品中的含菌数。传统的平板菌落计数正是基于上述原理而进行的。     

紫色非硫细菌固体石蜡双层平板培养法

紫色非硫细菌是一类不产氧光合细菌,具有重要的生态学意义和应用价值。建立固体石蜡双层平板法,与传统的培养法相比较,发现该方法可以更方便、更快捷地计数和分离紫色非硫细菌。结合分子生物学技术,将该方法应用于水稻土紫色非硫细菌的研究,发现以甲酸为碳源的固体石蜡双层平板法可以很好地对环境中可培养的紫色非硫细菌多样性进行研究。该方法的建立将更有助于紫色非硫细菌的研究。     

液体复合微生物产品的简易检测方法

利用固体平板培养计数法,对几种液体复合微生物产品进行细菌,放线菌和酵母菌三大类微生物活菌计数,以此来检测产品的质量。     

稀土甘氨酸配合物对微生物作用初探

本文用7种稀土甘氨酸配合物在实验室对微生物的作用进行了试验。通过杯碟法测定抑菌圈,用活菌平板计数法进行菌落计数,其结果是这7种稀土甘氨酸配合物对细菌均表现出抑制作用,对霉菌不起抑制作用。     

技术新趋势:微生物菌落计数和形态分析自动化

1 新趋势的背景 在常规的微生物学实验中常常需要对样品中的微生物进行定量或者浓度计算,众多微生物定量方法中最常用的就是对培养后的皮氏培养皿上所生长菌落进行总数统计的方法.其中菌落计数环节最耗费人力和影响准确性,已经成为利用平板菌落总数统计进行样本中细菌定量的速度瓶颈.     

糖化终末产物对大肠杆菌增殖与粘附的影响

糖化终末产物(AGEs)具有广泛的致病作用,但对细菌的生物学特性有何影响尚未见报道.通过倾注培养计数菌落数、E.coli K12β-半乳糖苷酶活性测定和计数E.coli K12粘附尿道上皮细胞的数目等,观察了培养液中加入不同浓度AGEs,对E.coli K12增殖与粘附的影响.与对照组相比,实验组平板中菌落数明显增多,E.coli K12β半乳糖苷酶活性明显升高,尿道上皮细胞粘附的细菌数显著增多,并随AGEs的浓度增高而增加.表明AGEs能够促进E.coli K12增殖,增强E.coli K12对尿道上皮细胞粘附的能力.结果提示AGEs可能对E.coli K12致病过程中有一定的促进作用.     

乌鲁木齐10号泉泉水细菌群落对有感地震的响应

摘要:【目的】为了从细胞水平上了解泉水细菌群落对有感地震的映震规律及敏感菌群的代谢特征。【方法】基于2012年1月31日至12月31日,震中距乌鲁木齐10号泉100公里范围内的5次有感地震,利用平板培养计数和BIOLOG GEN III细菌板监测地震前后泉水中细菌群落活性及代谢功能多样性变化。【结果】泉水细菌群落全年呈现随机动态变化,震后可培养细菌菌落数目和细菌群落碳源利用的平均颜色(Average well color development,AWCD)变化高于震前,且表现与震级具有一定相关性;泉水中对有感地震有响应的灵 敏细菌群以糖醇类碳源为主要代谢碳源。【结论】本研究初步证实了GEN III 细菌板能用于泉水细菌群落代谢功能多样性的研究。细菌群落的碳源利用及可培养菌落数目具有一定映震规律。     

细菌总数测定方法的改进

目前细菌总数测定一般采用常规平皿法,用肉眼观察计数。但深层的小菌落容易遗漏,易造成计数上的误差。由于多数细菌具有脱氢酶,在培养基中能产生脱氢作用,当遇到氯化三苯基四氮唑(TTC)存在时会发生显色反应。但高浓度的TTC对细菌具有抑制作用。因此在     

红霉素、氨溴索与环丙沙星雾化吸入对实验大鼠铜绿假单胞菌生物膜的影响

目的研究红霉素和氨溴索分别联合环丙沙星雾化吸入对铜绿假单胞菌成熟生物膜的干预效果。方法平板法培养成熟铜绿假单胞菌生物膜;微量肉汤稀释法测量红霉素和环丙沙星的最低抑菌浓度;制作气管插管铜绿假单胞菌生物膜感染模型;平板计数法计算红霉素、氨溴索分别联合环丙沙星对生物膜菌落数的影响;日本岛津紫外-可见光分光光度计UV1700测铜绿假单胞菌菌液的A值;石蜡切片HE染色定性观察肺组织的炎症情况;扫描电镜定性观察各处理组的生物膜结构变化。结果各处理组干预7 d后肺组织细菌菌落计数（×10^4CFU/m l）：干预组分为：生理盐水对照,氨溴索,红霉素,红霉素联合环丙沙星,氨溴索联合环丙沙星,各组分别为139.250±42.0162、101.625±40.4190、109.625±33.4747、57.750±37.8295和22.250±17.3184,前3组与后2组对比差异均有显著性（P〈0.05）,前3组之间对比差异没有显著性（P〉0.05）,后2组对比差异有显著性（P〈0.05）。导管生物膜细菌菌落计数（×10^4CFU/m l）：5组分别为170.000±48.3263、127.625±39.0163、133.500±33.6876、70.375±35.7768和38.125±19.1045,结论和肺组织菌落计数是一致的。导管生物膜电镜观察：第1组导管内表面均有较厚基质覆盖,2、3组减少不明显,而联合用药组导管内表面生物膜明显减少,其中第5组效果更好。结论氨溴索与红霉素分别联合环丙沙星雾化吸入在控制导管生物膜和呼吸系统相关感染均具有显著效果,其中氨溴索联合环丙沙星疗效更好。     

浓香型白酒窖泥中兼性厌氧细菌的分离鉴定

为探讨浓香型白酒窖泥中微生物区系的构成,采用传统微生物分类鉴定法,对泸州老窖不同窖龄窖底和窖壁泥样的可培养兼性厌氧细菌进行了分类计数,并初步鉴定到属。平板涂布法计数得出,老窖底样的菌落总数最多,达3.98×103cfu/g泥,新窖壁样菌落数最少,只有0.24×103cfu/g泥;经生理生化鉴定,参照伯杰氏细菌鉴定手册等将划线单离后的菌株归为8个属,其大部分属于芽孢杆菌属(Bacillus)和芽孢乳杆菌属(Sporolac-tobacillus),也存在假单胞菌属(Pseudomonas)、梭菌属(Clostridium)等。     

MTT法检测细菌细胞数的主要影响因素分析

MTT法是生物活细胞计数的灵敏、快速和便捷方法。报告对MTT法应用于细菌细胞数定量分析时的分析前培养时间、MTT反应时间、MTT剂量和检测波长等主要影响因素的分析结果,同时报告MTT反应产物溶解检测与直接检测,以及MTT法与平板菌落计数法定量检测的结果比较。结果如下：Formazan生成量与细菌活细胞数呈正相关,对数生长期变化最明显;MTT为0.25 mg/mL,反应2 h时吸光值与菌落数具有良好的线性关系（r=0.999 8）;Formazan的最大吸收波长为570～580 nm;MTT反应产物溶解检测和直接检测结果经统计学分析无显著性差异（P〉0.05）;细菌细胞数在107～109 cfu/mL范围内,MTT法与菌落计数法定量结果呈现良好的线性关系（r≥0.991 7）。     

用平板透明圈法测定细菌的苎麻脱胶活力

经过多年摸索,我们认为平板透明圈法对予测定细菌的苎麻脱胶活力,是一种较为快速和简便的方法,现将该方法介绍如下。 一、原理 把细菌培养在含果胶的平板培养基上,细菌若产生细胞外的果胶酶,则其菌落周围在用碘液处理平板后,即出现清晰的透明圈。如果     

CAS平板覆盖法检测氢氧化细菌铁载体

【目的】用CAS平板覆盖法检测氢氧化细菌铁载体,解决通用CAS琼脂平板法中十六烷基三甲基溴化铵对真菌和某些细菌的生长抑制问题。【方法】将改良的CAS检测培养基覆盖在长满菌落的无铁培养基上,生长抑制问题因微生物未与十六烷基三甲基溴化铵直接接触而解决。【结果】3株氢氧化细菌SDW-5、SDW-9和AaP-13均能产生单菌落,加入CAS检测培养基1 h后,菌落周围产生明显的铁载体晕圈。【结论】本方法成功解决了生长抑制问题,可以作为检测微生物铁载体的通用方法。     

产琼胶酶海洋细菌的分离、鉴定及其分解琼胶实验

产琼胶酶的细菌和琼胶酶在制备原生质体、回收DNA与1KNA和产生琼胶寡糖等有着重要的用途。从石花菜和江蓠等植物表面分离产琼胶酶的海洋细菌并进行纯化,经分子生物学、形态学与生理生化实验鉴定,分离菌株为假交替单胞菌（Pseudoalteromonas sp．）。将该菌在2216E培养基平板上划线或点种培养,可见平板出现凹陷现象;滴加碘液后,可见菌落周围有透明圈,表明菌落周围的琼胶被分解掉了。此法更容易分离得到产琼胶酶的菌株,分解琼胶的实验现象明显．便于观察。     

海带水提液和酵母提取物促大肠杆菌生长研究*

通过细菌培养液DD值测量和平板计数技术观察不同物质对大肠杆菌生长的影响;对微量元素、稀土元素、动、植物激素、细菌提取物、真菌提取物、藻类提取物、植物提取物和动物提取物等13大类120余种物质在一定浓度范围的促大肠杆菌生长作用进行了观察。海带水提液和酵母提取物对大肠杆菌生长具有明显的促进作用;两的最佳作用浓度分别为20g/L和2％,DD值最大可分别达到对照组的2．93倍和5．06倍;平板计数可达3．94倍和5．39倍。     

大黄鱼养殖网箱内外细菌的数量分布及区系组成

目的 调查舟山市大黄鱼养殖网箱内外异养细菌、弧菌、大肠菌群和粪大肠菌群等的数量分布,并研究水体中异养细菌的区系组成。方法 异养细菌和弧菌的计数采用平板菌落计数法;大肠菌群和粪大肠菌群的计数采用MPN法;异养细菌参照O1iver提供的海洋细菌鉴定检索图、《海洋调查规范》和《一般细菌常用鉴定方法》提供的图式鉴定至属。结果 细菌的数量呈现出明显的季节性波动,并且网箱内细菌的数量要普遍高于网箱外,所分离到的细菌经鉴定可归于莫拉菌属（Moraxella）、不动细菌属（Acinetobacter）、弧菌属（Vibrio）、梭状芽胞杆菌属（Clostridium）和气单胞菌属（Aeromonas）等11个菌属。结论 通过监控网箱养殖水体中异养细菌和弧菌的数量波动,可以提前预警大黄鱼病害的发生.     

拮抗菌抗菌谱及发酵液拮抗能力测定的新方法

目的:确定测定拮抗细菌枯草芽孢杆菌A的抗菌谱及发酵液拮抗能力的方法。方法:平板对峙法测定抗菌谱,三明治法、管碟法、滤纸片法和双层打孔法测定发酵液的拮抗能力。结果:用点接拮抗细菌单菌落的平板对峙法测得菌株A对玉米小斑病菌等10种病原真菌均有拮抗作用;用双层打孔法测定菌株A发酵液拮抗能力,发现在培养条件为温度32℃,溶氧量为300mL三角瓶培养基装量为30mL,接种量5%,初始pH值7.5时发酵液拮抗能力最强。结论:点接拮抗细菌单菌落的平板对峙法适合用来测定菌株A的抗菌谱,双层打孔法适合用来测定菌株A发酵液的拮抗能力。