酶促合成高比放射性γ-~(32)P-ATP 采用一种简便的管道装置

ATP具有高能磷酸键,在生物体能量的交换中占着中心地位。蛋白质生物合成、肌肉收缩和磷酰基的转移等重要生理过程,都必须有它参加。同位素标记的ATP对研究代谢过程提供了一项有效的方法,对某些可利用它来测     

一种快速简便的CaCl2质粒转化方法

介绍一种质粒DNA快速转化方法.质粒DNA加入感受态细胞,冰浴３～10 min,涂布预热至37℃的平板,即可获得与常规转化方法相当的转化效率.操作步骤由5步减至2步,时间由2 h减至3～10 min.同时探讨了Ca²⁺浓度、4℃保存时间等因素对感受态细胞转化效率的影响.     

一种简便的蛋白质和多肽的放射性碘标记法

一种简便的蛋白质和多肽的放射性碘标记法熊忠白海波（中国科学院西北高原生物研究所,西宁８１０００１）放射性碘标记技术在分子生物学及分子免疫学技术领域中占有重要的地位,它已广泛运用于医学及临床检验中,其原理简单,利用放射性１２５Ｉ原子与蛋白质或多肽氨基酸...     

一种简便纯化肾钠钾ATP酶的方法

本文描述了一个简便的从猪肾外髓迅速纯化(Na~ -K~ )ATP 酶的方法。避免了超离心机的使用。所得制剂的比活力为440～600微克分子磷/毫克蛋白/小时,37℃。主要纯化过程包括用两价阳离子Mg~( )沉淀微粒体组份,SDS 溶解微粒体杂蛋白及Sepharose 2B 柱层析。     

一种简便纯化肾钠钾ATP酶的方法

本文描述了一个简便的从猪肾外髓迅速纯化(Na~ -K~ )ATP酶的方法。避免了超离心机的使用。所得制剂的比活力为440～600微克分子磷/毫克蛋白/小时,37℃。主要纯化过程包括用两价阳离子Mg~( )沉淀微粒体组份,SDS溶解微粒体杂蛋白及Sepharose 2B柱层析。     

A rapid method for the measurement of [γ-32P]ATP specific radioactivity in tissue extracts and its application to the study of 32Pi uptake in perfused rat heart

(i) A new, rapid method for the measurement of [γ-³²P]ATP specific radioactivity in tissue extracts in the presence of other ³²P-containing compounds is described. The deproteinized extract is incubated with phosphorylase b and phosphorylase kinase, and the incorporation of ³²P into protein from [γ-³²P]ATP is measured by precipitation on filter paper in trichloroacetic acid. No separation of ATP or other treatment of the extracts is required for the assay. (ii) ³²P_i uptake in perfused rat heart was found to be a relatively slow process, with a K_m of 0.084 mm, whereas equilibration between intracellular ³²P_i and [γ-³²P]ATP occurred rapidly.     

一株γ-聚谷氨酸合成菌的筛选与鉴定

从土壤中筛选分离获得一株γ-聚谷氨酸合成菌PGS-1,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),在富含谷氨酸和葡萄糖的培养基中可大量合成γ-聚谷氨酸,摇瓶发酵产量达26 g/L,不同于大多文献报道的微生物合成的γ-聚谷氨酸具有较高的分子量,该菌株合成的γ-聚谷氨酸分子量较低(3×105-4×105 kD),分子量分布较窄,可适用于低分子量要求的应用领域,如作为药物的控缓释载体,值得深入开发研究。     

一种垂直板凝胶电泳装置的简便胶封技术

垂直板凝胶电泳技术,在生物学和医学研究中使用日益普遍。然而,与水平电泳相比,由装置的垂直状态产生的液面高差,在制板电泳过程中易出现胶液或电极液渗漏,导致电泳失败。因此,发展一项简便可靠的防漏技术实有必要。本文介绍一种以聚丙烯酰胺凝胶(PAG)作为防漏介质的垂直板电泳装置和胶封技术,使用效果满意。一、电泳装置由上、下电泳槽(图1)和凝胶板模(图2)二部分组成。电泳槽用有机玻璃制作。下槽是一只上口敞开的     

Photoaffinity labeling of the (Ca+Mg)ATPase of skeletal and cardiac sarcoplasmic reticulum with [γ-32P]-8-azido-ATP

8-azido-ATP, when used in the 0.2–5 μM concentration range, fulfills the criteria for a specific photoaffinity label for the (Ca+Mg)ATPase of sarcoplasmic reticulum. It is a substrate for the enzyme. It is a mixed inhibitor of ATPase activity. When photolyzed at 0° it is an inhibitor of ATPase activity. The photoinduced binding of 8-azido-ATP to the (Ca+Mg)ATPase is promoted by Ca²⁺. The dependence of the labeling of the (Ca+Mg)ATPase on 8-azido-ATP, Ca²⁺ and Mg²⁺ concentrations strongly suggests that 2 classes of sites are labeled. When 10–60 μM 8-azido-ATP was used to label sarcoplasmic reticulum, proteins in addition to the (Ca+Mg)ATPase were labeled.     

Nicastrin ：一种新型的γ-分泌酶组成蛋白

Nicastrin 属Ⅰ型跨膜糖蛋白,新近被证实为γ-分泌酶复合体的组成部分 . Nicastrin 可调节γ-分泌酶复合体其他组分的稳定、转运等过程 . Nicastrin 的主要功能是通过γ-分泌酶复合体参与阿尔茨海默病中 Aβ生成和 Notch 信号系统转导 .     

一种合成氚标记-Y磷酸胞嘧啶乙酰神经氨酸的简便方法

本文介绍一种合成氚标记—磷酸胞嘧啶乙酰神经氨酸(CMP-³H-NAN)的有效方法。其步骤主要采用在碱性环境中使氚水中的氚元素与游离乙酰神经氨酸(NAN)第三位碳原子上氢元素发生交换而得放射标记物。然后在CMP-NAN合成酶的作用下使其与CTP反应而得CMP-H-NAN。本法的特点是流程简便,成本低廉,CMP-NAN合成酶的提取与保存十分方便。     

真菌细胞核的一种快速简便染色技术—荧光染色法

本文报导了用荧光染料Hoechst Dye 33258在McIlvaine标准缓冲(pH7.26—7.44)对真菌细胞核染色的技术,这是一种广谱真菌细胞核染色技术,已证明在下列真菌中是有效的:双孢蘑菇(Agaricus bisporus)、向日葵交链孢菌(Alternaria helianthi)、亚麻尖镰孢菌(Fusarium oxysporum f. sp. Iini)、(Penicillium binellure),终极腐霉菌(Pythium ultimum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia Solani)、以及酿酒酵母(saccharomyce cerevisiae)。双孢蘑菇,亚麻尖镰孢以及Penicillium binellum的分生孢子细胞核也能很好着色。     

一种简便实用的限制性核酸内切酶定量测活方法

对限制性核酸内切酶进行酶学研究,无论 在理论上或应用上都有着重要的意义。准确而 简便的定量测活方法,是进行酶学研究的前提 之一。目前这类酶的定量侧活,多采用同位素 标记法或微光密度扫描法。一”,但前者受到标记 底物来源、同位素半衰期和比强度的影响;后者 需要昂贵的仪器,故它们的使用范围受到一定限制。下面介绍我们建立的一个简便实用的方 法,即对酶切凉脂糖凝胶电泳拍照记录,其负片置测微光度计上进行测定,以此来对酶活力进 行定量。