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1.
从猪水泡病病毒(SVDV)细胞培养物的PEG浓缩毒中提取病毒RNA,经RT-PCR和套式PCR扩增病毒主要保护性抗原蛋白基因,将扩增产物1.6kb插入pUC18载体中,经亚克隆后用双脱氧链终止法测定其序列,与已发表的SVDV分离物该区序列作比较,核苷酸同源性为96%-97%,氨基酸同源性为98%,参与构成SVDV中和性抗原位点的几个氨基酸残基均很保守;与已发表的柯萨奇B5病毒的对应序列比较,两者核苷酸序列同源性为77%,而推导的氨基酸顺序同源性竞高达92%。本文结果有助于SVDV的分子流行病学研究,并为其和柯萨奇B5病毒的相互关系提供参考数据,为SVDV新型疫苗研究提供了基础材料 相似文献
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从我国内蒙古地区流行的犬细小病毒病病犬的肠溶物中分离提纯犬细小病毒(CPV)。提取病毒基因组DNA,并以此DNA为模板,采用人工合成的引物进行PCR扩增,PCR产物经BamHI、SacI双酶切后,克隆于pUC19质粒的BamHI/SacI位点。重组质粒pUCVP2经PCR鉴定、限制酶切分析和序列分析,结果表明:获得了犬细小病毒内蒙株(CPV-IM)VP2基因的全长克隆,VP2基因全长1755nt, 相似文献
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甜菜坏死黄脉病毒内蒙分离物RNA3序列分析及编码25kD蛋白基因在大 … 总被引:2,自引:1,他引:1
以甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物的总RNA为模板,通过反转录--PCR扩增获得BNYVVRNA3全长cDNA。将其克隆到PEM-7Zf上,得到重组质粒pGBY56。序列分析结果表明,内蒙分离物RNA3基因组全长 1775nt 相似文献
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我国河南与北京腹泻患儿中的星状病毒感染 总被引:4,自引:0,他引:4
人星状病毒(HAstV)是RNA病毒的新家族,从我国河南和北京两地区的急性腹泻患儿便样中鉴定了7株星状病毒,经电镜观察病毒颗粒直径约为28nm,表面呈五角或六角星状形态,用RT-PCR检定为阳性,比较PCR扩增产物的核苷酸序列构建的序列同源性树表明,1990年在河南流行的星状病毒主要为HAstV-1,另有一株HAstV-5,1996年北京流行株为HAstV-5。对HAstV患儿的临床症状进行了讨论 相似文献
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水稻矮缩病毒基因组第六号片段编码区的cDNA克隆及序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
从水稻矮缩病毒中国福建分离物的基因组中分离出第六号片段的双链RNA,根据已发表的日本分离物第六号片段cDNA全序列合成了两个寡聚核苷酸引物,经过逆转录合成cDNA,应用PCR方法扩增了编码区的基因序列,并将扩增产物克隆到pGEM3Zf(-)载体上。对重组子进行限制性酶切分析和DNA序列分析证明,得到的是RDV第六号片段完整的编码序列,进而构建了亚克隆并进行了全序列测定。结果表明,我们所扩增和克隆的 相似文献
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本文发展了PCR克隆和亚克隆技术制备DNA测序模板。首先,我们用pUC/M13系列质粒的通用正反向引物PCR扩增出质粒pBluescriptKSDNA的多克隆位点及其侧翼序列,用EcoRV和XhoI消化成为左右两个引物多克隆臂,与粘虫核型多角体病毒(LsNPV)的EcoRV和XhoI约400bp和500bp片段分别连接,经PCR扩增,得到两端具有上述正反向引物结合位点的测序模板,用ddNTP链终止法/PCR扩增/银染色,从片段两端测定了全部919bp序列,这种ddNTP/PCR/银染测序法简化了操作,大大缩短了测序模板的制备时间,易于实现自动化操作。 相似文献
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马铃薯卷叶病毒56kD蛋白基因及3‘端非编码区克隆和序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
根据已报道的马铃薯卷叶病毒基因组序列,设计合成一对特异性引物,以马铃薯卷叶病毒中国分离株的RNA为模板,反转录合成了cDNA第一条链,经PCR扩增后克隆于pUC19质粒中,进一步用PCR鉴定,限制酶切分析用序列分析。结果表明,PLRV-Ch56kD蛋白基因由1527个核苷酸组成,编码508个氨基酸,3‘端非编码区由141个核苷酸组成,与国外报道的苏格兰PLRV-S,荷兰PLRV-N,加拿大PLRV 相似文献
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中国不同来源狂犬病病毒野毒株G基因主要功能区的序列分析 总被引:8,自引:0,他引:8
对我国不同来源的狂犬病病毒野毒株8202、BRV、MRV的G基因405 ̄1146位核苷酸序列,进行了逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增、克隆和序列测定,并应用计算机对这3个毒株的测定序列和已发表的中国人源毒株(CGX89)的相应序列进行了分析比较。结果表明,这4个中国不同来源狂犬病病毒的G基因同源性较低,8202与BRV的核苷酸同源性只有79.5%,与MRV的氨基酸同源性亦只有82.2%;同 相似文献
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Epstein-Barr病毒(EBV)进入鼻咽上皮细胞的途径,是人们研究EBV与鼻咽癌(NPC)的病因关系时所必须回答的一个问题。用抗EBV受体(EBVR/CR_2)单抗检测上皮细胞中该受体的表达已有报道,但对上皮细胞中EBVR/CR_2的基因结构仍需研究。我们采用PCR扩增和不对称PCR直接测序法,首次检测了10例NPC及3例正常人胚鼻咽上皮(Humanembryonicnasoparyngealepithelium,HENE)组织样本中EBVR/CR_2的EBV结合区的编码序列。这一片段的DNA序列测定结果显示,人NPC细胞和正常HENE细胞的EBVR/CR_2的EBV结合区的编码序列,与正常人B淋巴细胞的EBVR/CR_2的相应序列完全相同,提示EBV感染鼻咽上皮细胞可能与EBVR/CR_2基因的EBV结合区结构改变无直接关系。 相似文献
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马铃薯卷叶病毒基因间隔区的克隆及序列分析 总被引:6,自引:0,他引:6
根据已报道的马铃薯卷叶病毒基因组序列.设计合成一对特异性引物,以马铃薯卷叶病毒中国分离株(PLRV-Ch)的RNA为模板,反转录合成cDNA第一条链,经PCR扩增后克隆于pUC19质粒中,进一步用PCR鉴定、限制酶切分析和序列分析,结果表明:PLRV-Ch基因间隔区由197个核苷酸组成,与国外报道的荷兰PLRV-N加拿大PLRV-C,澳大利亚PLRV-A,苏格兰PLRV-S各株系核苷酸序列具有很高的同源性,同源率依次为99%、98%、93%、98%。 相似文献
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为深入了解乙肝病毒(HBV)致癌机理,用磁式PCR对广西14例血清HBV DNA阳性的原发性肝癌患者癌组织、10例乙型病毒性肝炎患者血清及10例乙肝病毒无症状携带者血清HBV核心基因启动子进行扩增,阳性者用Sanger氏双脱氧法做序列分析,发现肝癌组织10例PCR阳性,阳性率71.4%,所有PCR阳性标本的整合体均有乙肝病毒核心基因启动子双突变序列(nt1762A→T,1764G→A),并且在其财 相似文献
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以甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物(NM)RNA为模板,通过反转录和PCR扩增得到了BNYVV RNA4基因组的cDNA克隆pGBF6。序列分析结果表明,pGBF6含有全长RNA4 cDNA插入片段,大小为1465个核苷酸,含有一个849个核苷酸的开放阅读框架,编码产生由282个氨基酸组成的分子量为31kDa的蛋白。与法国F2分离物RNA4相比,其核苷酸序列和由此推导的氨基酸序列同源性分别 相似文献
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应用本实验建立的三组套式PCR(PCR1、2、3)和一组以前报道的套式PCR(PCR4),对59份外周血淋巴细胞(PBL)DNA样品进行了恶性卡他病毒核酸序列的检测。这些样品来自51只羊,以及与羊接触而发病的6头牛和2只鹿。除PCR4外,其它三组PCR都能扩增现有4个角马型MCFV分离株。有6只羊在4组PCR中都呈阴性,其余53份样品经PCR4检测均呈阳性。PCR1只有从45只羊体检出MCFVDN 相似文献
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应用本实验建立的三组套式PCR(PCR1、2、3)和一组以前报道的套式PCR(PCR4),对59份外周血淋巴细胞(PBL)DNA样品进行了恶性卡他热病毒(Malignantcatarrhalfevervirus,MCFV)核酸序列的检测。这些样品来自51只羊,以及与羊接触而发病的6头牛和2只鹿。除PCR4外,其它三组PCR都能扩增现有4个角马型MCFV分离株。有6只羊在4组PCR中都呈阴性,其余53份样品经PCR4检测均呈阳性。PCR1只能从45只羊体检出MCFVDNA,未能从牛和鹿体检出病毒DNA。PCR2检测的所有样品均呈阴性。在PCR3扩增中,除2头牛外,其它51份样品均呈阳性。通过Southern杂交和限制性酶切分析,对PCR1-4产物的特异性进行了鉴定。此外,敏感性实验表明,四组PCR的差异也不明显。因此,本实验结果说明MCFV基因组在不同种动物之间发生了变异,羊体内的变异株可能是导致其它反刍动物发病的病原 相似文献
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本文发展了PCR克隆和亚克隆技术制备DNA测序模板。首先,我们用pUC/M13系列质粒的通用正反向引物PCR扩增出质粒pBluescriptKS DNA的多克隆位点及其侧冀序列,用EcoRV和XhoI消化成为左右两个引物多克隆臂,与粘虫核多角体病毒(LsNPV)的EooRV和XhoI约400bp和500bp片段分别连接,经PCR扩增,得到两端具有上述正反向引物结合位点的测序模板,用ddNTP链终点 相似文献
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陈枝楠 《Virologica Sinica》1995,10(4):346-350
利用简并引物RT-PCR扩增技术,结合RT-PCR扩增片段RELP分析,对洋水仙14个病毒病样品进行分组检测,结果表明洋水仙植物上存在有四种以上PVY组病毒侵染。它们可能是TBV、NYSV、NSSV和OnYDV等。 相似文献
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巢-PCR分型检测人乳头状瘤病毒同源序列 总被引:1,自引:0,他引:1
采用L1通用引物MY11/9介导聚合酶链反应,(PCR),从人生殖道疣,癌组织中扩增人乳头状瘤病毒(HPV)同源序列得394-552bpDNA片段,再以内引物GP5/6介导第二次扩增得139-154bp片段,然后根据RsaI酶切扩增片段的电泳图谱来分出HPV型别,无需特异型别的探针进行分子杂交,35例宫颈癌和30例生殖器疣HPV同源序列检出率分别为85.75%和96%;12例卵巢腺癌检出HPV同源 相似文献
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汉坦病毒的基因分型及其序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
为了探讨从核苷酸水平耐汉坦病毒进行分型,设计两对型特异性引物,采用反转录和聚合酶链式反应(RT-PCR),对亚太地区18株汉坦病毒进行了扩增鉴定,并对其中7株汉坦病毒的PCR产物进行了测序分析。PCR的分型结果表明,Ⅰ型引物只能扩增血清Ⅰ型病毒的cDNA;Ⅱ型引物也只能扩增血清Ⅱ型病毒,其间无交叉反应。采用巢式PCR和限制性内切酶验证了PCR产物的特异性。序列分析结果表明,R36M片段G1区的核苷酸序列与血清Ⅰ型病毒代表株76-118的同源性为78.4%,而与血清Ⅱ型病毒R22的同源性为68.1%;R36与汉坦病毒序列同源性的成对比较结果也表明,R36与血清Ⅰ型病毒的同源性均高于血清Ⅱ型病毒;Leakey虽然能被Ⅱ型引物扩增,但其序列与血清Ⅱ型病毒R22的同源性仅为44.9%,故不属于血清Ⅱ型病毒。上述研究结果表明,反转录聚合酶链反应能对多数汉坦病毒准确分型,但最终结果尚有赖于序列分析。 相似文献