宿主细胞膜骨架蛋白在病毒感染复制中作用的研究进展

病毒与宿主细胞之间相互关系的研究不仅具有重要的理论意义,也是重大的医学实践课题.病毒可以与宿主蛋白相互作用并改变细胞的正常功能,从而促进病毒的感染与复制.宿主细胞膜骨架蛋白在病毒的生命周期中起着重要作用,研究表明细胞膜骨架蛋白参与了病毒的感染及复制,尽管许多精细机制尚不清楚,但这扩展了人们对细胞膜骨架蛋白功能的理解.本文重点介绍宿主细胞膜骨架蛋白如肌动蛋白、血影蛋白在病毒进入、细胞内运输、组装和释放等病毒感染复制过程中的作用.     

用于筛选人工结合蛋白的骨架蛋白

抗体作为最著名的天然结合蛋白,因其具有与抗原特异结合的特性,近100多年以来无论在生物技术领域,还是在疾病的诊断及治疗方面,都发挥着广泛而重要的作用。但是抗体自身固有的局限性也在很大程度上限制了它的应用,而人工结合蛋白既具有抗体的特点,又兼具更多优势:分子更小;稳定性更高;能在大肠杆菌中高产量、高可溶性表达;易于修饰;能够达到高亲合力和高特异性;并且与抗体没有知识产权的冲突,因此被称为理想的"新一代抗体"。人工结合蛋白是从基因改造构建而成的骨架蛋白库中针对特定的靶分子筛选而得的。从骨架蛋白的概念和设计,骨架蛋白的分类,应用骨架蛋白筛选人工结合蛋白的技术以及人工结合蛋白的应用和前景等方面进行总结概述。     

慢性呼吸衰竭病人红细胞膜蛋白和红细胞变形能力的研究

目的：探讨红细胞膜蛋白在红细胞变形性改变中的作用。方法：参照Ｌｅａｍｍｌｉ和Ｐｅａｃｏｃｋ方法,测定了肺心病Ⅰ型呼吸衰竭（Ⅰ组）１８例、Ⅱ型呼吸衰竭（Ⅱ组）１８例和健康对照（ＣＧ）２０例的红细胞膜带３蛋白、膜收缩蛋白二聚体（ＳｐＤ）和四聚体（ＳｐＴ）的相对含量与红细胞变形能力。结果：Ⅰ、Ⅱ组带３蛋白、ＳｐＤ、ＳｐＴ相对含量和红细胞变形指数（ＤＩ）与对照组均有显著差异,且肺心病病人的ＤＩ与带３蛋白相对含量呈显著正相关,与ＳｐＤ／ＳｐＴ比值呈显著负相关。结论：带３蛋白和膜收缩蛋白的异常,可能是导致肺心病人红细胞变形能力降低的重要因素之一。     

鸡红细胞膜囊泡及其蛋白质组成

叙述了一种以囊泡形式制取鸡红细胞膜的方法。该囊泡呈杆菌状,大小约2.02×0.47μm。其SDS-PAGE谱虽类似于人红细胞膜影泡,但:鸡囊泡无甘油醛-3-磷酸脱氢酶;α和β收缩蛋白呈宽间隔双体带,带3蛋白由两种变体,B3.1和B3.2所组成;含有人红细胞膜没有的Goblin、中间丝和来自核膜的组蛋白。用胰蛋白酶原位消化鸡囊泡时,带3消失并在Mr=55和36kD处显两新带,后者并不存在同条件下人红细胞原位酶解谱中,说明两种带3在膜中构象并不相同。     

红细胞膜带4.2蛋白的结构与功能

带4.2蛋白是一种重要的红细胞膜蛋白,与红细胞的形态、可变形性及携氧功能有至关重要的联系。它通过与带3蛋白(阴离子通道蛋白)、锚蛋白结合,稳定的连接在细胞膜的内表面,连接着膜骨架网架结构与细胞膜,是膜骨架与脂质双分子层连接的重要纽带。带4.2蛋白的缺失会引起球形或椭圆形红细胞增多症及不同程度的溶血性贫血,严重的情况需要摘除脾脏来进行治疗。近年来研究认为,带4.2蛋白在维持细胞膜骨架的完整性和稳定性方面扮演了重要角色。现对带4.2蛋白结构及功能的研究状况进行综述。     

梗阻性高胆红素血症红细胞膜成分与结构的相关性研究

为进一步证明梗阻性高胆红素血症对细胞膜的损伤作用,探讨胆红素的毒性机理,我们采用毛细管电泳,圆二色谱,质谱,荧光偏振等方法,研究了红细胞膜蛋白的组成及膜的构象关系,结合膜脂的变化情况,反映了梗阻性高胆红素血症时红细胞膜的成分受到明显的影响,膜脂发生脂质过氧化、膜蛋白被氧化性降解,破坏了细胞骨架,使细胞膜的正常结构被破坏,膜流动性增大、膜稳定性下降,从而细胞不能维持其正常的生物功能。     

家兔钙调节蛋自-红细胞膜的制备

 本文介绍用等渗咪唑缓冲液溶血,并用低温高速或常速离心机制备出一种带钙调节蛋白(简称CaM)的红细胞膜。它具有与膜稳定结合的CaM,在钙离子存在下可以激活膜上的靶酶——Ca~(2+)+Mg~(2+)-ATP酶活性,为研究CaM功能及有关药物机制提供一种简便而理想的材料。     

自由基损伤红细胞膜分子的机理研究

为探明自由基对红细胞膜脂质及蛋白分子损伤机理,本文通过电子自旋共振波谱仪（ＥＳＲ）、激光拉曼波谱仪、圆二色波谱仪（ＣＤ）、显微付立叶变换红外波谱仪（ＭＦＴ－ＩＲ）和表面电子能谱分析系统（ＥＳＣＡ）分别对体外自由基作用３０分钟后,及作用后３小时红细胞膜整体结构、膜蛋白分子及脂质分子进行了分析。结果发现,自由基作用后①红细胞膜中β－胡萝卜素构象由伸展变为卷曲,提示膜整体结构改变,②膜蛋白分子二级结构变化,表现为α螺旋减少和β折叠增加,③膜蛋白分子二硫键与巯基的比例增加（Ｓ－Ｓ／ＳＨ）、亚氨基（ＮＨ）和羰基含量改变,同时蛋白分子的氢键也被破坏（如ＮＨ、ＣＯＨ等基团的减少和ＮＣ、ＣＯ的增加）,④膜脂分子磷氧双键（Ｐ＝Ｏ）成分、羰基成分（Ｃ＝Ｏ）、碳－碳双键（Ｃ＝Ｃ）成分降低;说明自由基导致红细胞膜蛋白及脂质分子化学结构改变是造成膜分子构象及膜整体结构改变的根本原因。３小时后无论是膜蛋白二级结构、二硫键与巯基比或膜脂分子Ｐ＝Ｏ、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｃ不仅没有恢复,反而有加重趋势。这说明了自由基损伤的部分不可逆性     

顺铂及其水解产物与红细胞膜相互作用的动力学研究

顺铂（ＤＤＰ）和顺式二水二氨合铂（Ⅱ）（ＡＡＰ）与人红细胞膜的相互作用已经用荧光及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法研究,实验结果表明,ＤＤＰ和ＡＡＰ与人红细胞膜蛋白相互作用属双阶段一段反应动力学,而且ＡＡＰ的反应速率比ＤＤＰ大。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ研究表明,ＤＤＰ和ＡＡＰ不仅可引起膜蛋白的交联或聚合,形成新带,也能使某些膜蛋白降解,对于ＤＤＰ,各膜蛋白带结合铂量首先随反应时间增加而下降,而后增加,最后达到饱和结合;     

猪链球菌2型菌毛骨架蛋白编码基因SSU2101敲除突变株的构建及其生物学功能

利用同源重组基因敲除方法构建猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,S.suis2)中国强毒株05ZYH33菌毛骨架蛋白(Backbone protein,BP)编码基因SSU2101敲除突变株。采用引物特异性PCR分析、Southern杂交及RT-PCR等方法鉴定,证实成功构建了BP基因缺失突变株。生物学特性显示,突变株的菌落形态、溶血活性以及染色特性方面与野生株之间均无明显差异。小鼠致病性试验结果显示,突变株的毒力比野生株显著减弱。研究结果提示菌毛在S.suis2感染致病过程中起重要作用,为系统研究S.suis2菌毛分子装配机制及其生物学功能奠定了基础。     

人工纤维小体骨架蛋白的分子设计与自组装

纤维小体是厌氧微生物分泌的能够高效降解木质纤维素的一种多酶复合体。其骨架蛋白质的大量重组合成是人工纤维小体构建的关键。为了构建全长的结构复杂的能招募大量酶亚基的骨架蛋白质,本研究对解纤维梭菌Ruminiclostridum cellulolyticum骨架蛋白CipC进行分子模块化设计,并分别与肽-蛋白质共价偶联系统SpyTag/SpyCatcher和SnoopTag/SnoopCatcher融合表达。然后分别通过非固定化和固定化组装策略对人工纤维小体骨架蛋白质进行了初步组装。结果显示,SpyTag和SpyCatcher、SnoopTag和SnoopCatcher之间自发形成稳定的共价异肽键,而且SpyTag和SnoopCatcher, SnoopTag和SpyCacther之间无交叉反应。最终成功组装出含有不同数量黏附域的骨架蛋白质,实现骨架蛋白链的延伸。本研究为构建结构更复杂、活性更高的人工纤维小体提供了新的设计思路并奠定了其技术基础。     

人红细胞膜血型糖蛋白的研究进展

血型糖蛋白(GP)是红细胞膜中主要含唾液酸的跨膜蛋白,有A、B、C和D四种.GPA是MN血型糖蛋白,GPB表达Ss、U血型,GPC、GPD则是Gerbich抗原,四种血型糖蛋白的结构有不同程度的同源性,尤以同类间的同源性程度最高,GPA在防止红细胞之间、红细胞与血管内皮细胞之间的相互作用有重要功能,并在配体诱导下影响红细胞膜的物理性质.GPC是维持红细胞正常形状、正常物理性质的重要因子.GPA和GPC的功能还分别与带3蛋白、带4.1蛋白有关.     

Ⅱ型糖尿病人红细胞胰岛素受体及红细胞膜流动性的观察

本文采用配对分析,测定了15例Ⅱ型糖尿病人(NIDDM)和15名正常人的红细胞胰岛素受体和红细胞膜微粘度,发现NIDDM红细胞胰岛素受体位点减少(86±85对215±116sites/RBC,P<0.002),而红细胞膜微粘度显著升高(2.6706±0.2813对2.2717±0.1578泊,P<0.001)。二变量间呈有意义的负相关(r=-0.328,P<0.05),提示细胞膜流动性的下降可能是NIDDM胰岛素受体和/或受体后缺陷的原因之一。     

脱氧血红蛋白与红细胞膜的相互作用

人红细胞中血红蛋白主要以游离态存在,也有小部分与膜结合。文献报道,脱氧状态下两者相互作用加强,我们研究了这种相互作用的生物学意义,主要测定了脱氧状态下:(1)红细胞的低渗溶血速率;(2)红细胞膜对阴离子的通透性;(3)红细胞的变形性。     

细胞膜的制备与观察

细胞膜是细胞表面的一层薄膜.细胞膜由磷脂双层和相关蛋白质以及胆固醇和糖脂组成,其化学组成主要是脂类、蛋白质和糖类.细胞膜有重要的生理功能,它既是细胞维持稳定代谢的胞内环境,又能调节和选择物质进出细胞,又负责细胞间的信息交流.通过微分干涉差显微镜和普通光学显微镜观察人红细胞制备的细胞膜,效果明显.     

粉防已碱与红细胞膜ATPase相互作用的研究

粉防已碱是一种新的钙调蛋白拮抗剂,专一性抑制人红细胞膜上依赖CaM的Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase。在较高浓度下,它也不同程度地抑制Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase基本活性、Na~+-K~+-ATPase和Mg~(2+)-ATPase的活性。 除CaM外,不饱和脂肪酸和有限水解均导致膜Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase的活化,所有这些活化作用被Tet在大约相同的浓度范围内抑制,表明Tet除与CaM结合外,也与膜Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase结合。 Tet具有抗抵渗溶血的性能,反映了拮抗CaM与药物的膜稳定性间存在相关性。     

林生地霉血液分离株的形态学观察

目的 进一步了解林生地霉的形态学特征和产孢方式。方法受试菌株复苏后,转种于沙堡培养基,37℃和27℃温箱培养3周,每天观察菌落生长情况,并对其丝状型和酵母样型两种菌落进行光镜观察。在培养1周时,挑取菌落常规制片后行扫描电镜和透射电镜观察。结果 培养第2～3d,菌落开始生长,初为白色绒毛样、粉末样,1～2周后菌落均转变为乳酪样,其中37℃下培养的菌落转变较早。菌丝相时,光镜下可见丰富的分支、分隔菌丝,成链的关节孢子和圆形、椭圆形小分生孢子。酵母相时,光镜下可见丰富的芽生孢子,少量的厚膜孢子、外生或内生的关节孢子,菌丝稀少。扫描电镜下可见菌丝分支末端或侧面着生球形、棒状的分生孢子,末端凹陷。透射电镜下可见分生孢子与菌丝分离时全壁断裂,另一端正在出芽。结论 林生地霉包括丝状型和酵母样型两种菌落形态和链状排列的矩形关节孢子、圆形或椭圆形的小分生孢子、厚膜孢子以及分支、分隔菌丝为其形态学特征,有芽殖、外生和内生节孢子三种产孢类型。     

pCMBS对完整红细胞膜阴离子通透性的影响

根据等渗ＮＨ４Ｃｌ溶血动力学,探讨了ｐＣＭＢＳ（对氯汞苯磺酸）对完整红细胞膜阴离子通透性的影响．０．０５ｍｍｏｌ／ＬｐＣＭＢＳ使阴离子通透系数Ｐｃｌ下降为对照的８６．５％;１．０ｍｍｏｌ／Ｌ以上浓度时Ｐｃｌ值反而变大。ｐＣＭＢＳ浓度高于０．３ｍｍｏｌ／Ｌ时,细胞悬浮液在１０ｓ之前光密度下降过快,偏离理论拟合方程且不受ＤＩＤＳ抑制．半胱氨酸对ｐＣＭＢＳ引起的效应有恢复作用。结果表明ｐＣＭＢＳ和股骨架蛋白上特殊－ＳＨ基相互作用,导致ｂａｎｄ３构象改变,致使改变膜时阴离子的通透性。     

Ⅱ型糖尿病的红细胞膜GPA基因表达

为了研究Ⅱ型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者红细胞膜血型糖蛋白Ａ（ＧＰＡ）的基因表达,采用不连续聚蔗糖（Ｐｅｒｃｏｌ）密度梯度法分离１５名正常人和２５例ＮＩＤＤＭ患者外周血的网织红细胞,提取其总ＲＮＡ,继以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交观测此两组的红细胞膜ＧＰＡ基因的表达水平．采用碱性磷酸酶酶联免疫检测完成红细胞膜ＧＰ的Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹．结果表明,ＮＩＤＤＭ患者组红细胞膜ＧＰＡ的ｍＲＮＡ含量较正常人组显著增加（分别为１１．９２±１０．５和１０．１８±１．０８积分光密度,Ｐ＜０．０１）．免疫印迹图谱显示,有６例ＮＩＤＤＭ患者的区带３ａ、３ｂ界限模糊,３例的区带３ａ、３ｂ和４明显浅染．推测ＮＩＤＤＭ患者红细胞膜ＧＰＡ减少可能引起其基因表达呈代偿性增强,而障碍或许出现在翻译环节上,这些与ＮＩＤＤＭ患者红细胞变形能力（ＲＣＤ）的明显降低甚为相符．