磁珠法在微量检材DNA提取中的应用

目的:研究磁珠法提取微量生物检材DNA物质的可行性。方法:对汗斑、微量唾液斑、指甲这3类微量生物检材采用磁珠法提取DNA,经过STR荧光复合扩增,ABI310测序仪检测,进行STR分型,以检测提取方法的灵敏度。结果:这3类微量生物检材获得了完整的STR分型。结论:磁珠法提取微量检材中DNA物质的效果较好。     

不同接触DNA检材提取纯化方法在法医学中的应用价值比较

比较不同DNA检材的提纯方法,便于法医的实际应用选择。采集饮用过的饮料瓶或矿泉水瓶、废弃的烟蒂、使用过的手套口罩及衣物各90份,随机分为Chelex组、磁珠组和有机组,各组检材分别使用相应的方法进行DNA的提纯,对提纯后三组检材的DNA提取液的STR分型、DNA提取量与紫外线分光光度计下OD值水平进行比较。由磁珠法提纯得到的DNA超过9个基因座的例数最多;提取量与DNA提取纯度显著优于其他二组,差异具有统计学意义(p0.05)。对于微量接触或污染严重的检材,可使用DNA IQ磁珠法进行提纯,可优化DNA的提取纯度,利于法医工作的进行。     

血清中提取DNA进行个人身份识别鉴定

在法医物证学实际案例中,最常见的生物检材是全血、人体组织、毛发、口腔脱落上皮细胞(口腔拭子)等,传统认为血清中没有DNA存在,不能作为法医生物检材应用于法医学实践。本文应用微量的人体血清进行了成功的DNA分型检测,有效的进行了个人身份的识别。现报道如下:     

基于PLP-LDR-HRCA策略进行微量DNA分析——rs17750303位点分型

增强PCR和全基因组扩增是当前微量DNA分析的主要策略,但是,由于DNA模板量过少,受随机效应影响显著,往往不能得到可靠的DNA分型结果.本文提出一种新的检验策略:PLP-LDR-HRCA,尝试微量DNA检材的SNPs分型研究.选择rs17750303位点,并设计等位基因特异性锁式探针,采用连接酶检测反应来识别等位基因,而后采用超分支滚环扩增反应来放大检测信号.结果表明,PLP-LDR-HRCA反应特异性好,灵敏度高,能够直接鉴别微量基因组DNA模板中待测SNP位点,rs17750303纯合型样品(AA型或CC型)和杂合型样品(AC型)准确分型所需最少模板量分别为20pg和30pg.对于增强PCR和全基因组扩增技术不能有效检验的微量检材,PLP-LDR-PCR策略独具优势,可能具有较大的开发价值.     

不同方法提取生物检材DNA的比较研究

目的:比较有机法、chelex100法和硅珠法提取不同检材DNA的优劣,从而为各类检材的DNA提取提供参考。方法:用有机法、chlex100法和SiO2法分别提取2组共24份生物检材DNA进行扩增检验,比较分析结果。结果:对不同生物检材的DNA检验,有机法、chlex100法和SiO2法各有其优势和局限性。结论:针对不同检材采用不同提取方法,可以有效节约检验时间,提高检验成功率。     

不同载体上微量接触类检材的相关问题探究

手部接触类生物物证是目前案件中的主要生物物证,但关于此类物证在不同载体上DNA的检出量和检验效果、最佳前处理方法以及检材放置不同时间后的检出量和检验效果的变化尚无详细研究报道。通过制备手部接触类生物检材,分别使用直接剪取法、胶带粘取法、两步擦拭法和真空吸取法对检材进行前处理,然后进行DNA提取,用筛选出的最佳前处理方法处理放置不同时间段的检材,均使用常规程序对检材进行DNA提取、定量和复合扩增,并对各项结果进行分析和讨论。实验观察到总体上使用直接剪取法进行前处理的检材提取到的DNA的量大于使用两步擦拭法和真空吸取法进行前处理提取到的DNA的量,且这4种前处理方法在不同载体的检材之间提取到的DNA量有差异;随着时间的推移,在放置360 d内的DNA检出量和检验效果无较大差异。由此得出,不同载体上DNA的检出量和检验效果有差异,针对不同载体,其最佳前处理方法也不同;检材常温干燥放置一年内,其DNA无明显降解。     

接触DNA常规提取纯化方法的比较探讨

接触DNA的提取纯化是法医物证工作的重点和难点之一。接触性检材上的脱落细胞本就量小体微,所以运用有效的方法对这些潜在的微量脱落细胞中的DNA进行提取纯化就显得十分重要。文章拟对接触DNA的常规提取纯化方法及影响因素进行简要阐述,并对其进行横向的比较探讨,以期得出最有效的接触DNA提取纯化方法。     

成功检出22年前精斑DNA一例

在各类现场检材中,由于所处环境的温度、湿度、光、化学及生物等因素的作用,DNA会发生降解,对于降解比较严重检材的检验是目前法医DNA检验的难点。本文通过对检材的观察及案情的分析,弃用常规检验精斑的两步法,选取恰当的方法提取精斑类检材,采用多种试剂盒对降解较严重的检材进行提纯、检验,从而取得完整分型。     

Y-STR技术在疑难精斑检验中的运用初探

精斑是强奸、猥亵等案件中常见的生物检材,通过检出精斑DNA从而认定犯罪嫌疑人已经成为侦破该类案件的最直接、最高效的手段。本文通过两起强奸案件中的精斑检材采用常规检验方法与一部消化提取法并Y-STR检验技术进行结果比较,对如何提高强奸案中疑难检材的检出率进行探讨。     

微量法鼠疫菌质粒DNA抽提的优化

旨在分析微量法抽提鼠疫菌质粒DNA的效果,探讨其在鼠疫菌分子生物学实验研究中的应用价值.采用微量法分别提取鼠疫菌EV76株,假结核耶尔森菌PstII株及大肠杆菌V517株质粒DNA,琼脂糖凝胶电泳对质粒DNA抽提结果进行分析.结果显示,微量法能在较短时间内获取开环较少的闭合环状鼠疫菌质粒DNA,经琼脂糖凝胶电泳图示其电泳条带清晰、亮度均一.微量法鼠疫菌质粒DNA抽提效率和纯度较好,抽提结果稳定,重复性良好.经微量法抽提的质粒DNA符合多数鼠疫菌分子生物学试验的要求,可广泛应用于鼠疫菌分子生物学试验研究中.     

海洋尾丝虫(Uronema marinum)的DNA微量提取研究

以分离自青岛的海洋盾纤类纤毛虫 ,海洋尾丝虫 (Uronemamarinum)为材料 ,就微量条件下提取DNA的方法进行了探讨。成功地获得了活体直接提取、活体苯酚 /氯仿抽提、固定标本直接提取以及固定标本苯酚 /氯仿抽提等四种简便有效的微量DNA提取法。     

烟粉虱全基因组DNA四种提取方法的比较

获得大量、高质量的全基因组DNA是在DNA水平上研究许多生物的分子机制的基本前提。微小昆虫由于其体型微小,单头提取DNA浓度低,无法满足部分试验所需。为寻找一种方便、快捷、高效的全基因组提取方法,参考国内外单头微小昆虫基因组DNA提取常用方法,以烟粉虱为研究材料,选取醋酸钾(KAc)法、盐析法、氯仿-异戊醇法和苯酚提取法四种方法进行多头烟粉虱的全基因组DNA提取。通过微量核酸蛋白分析仪、基因组DNA直接琼脂糖凝胶电泳、甲基化敏感扩增多态性(Methylation sensitive amplification polymorphism,MSAP)引物扩增产物的琼脂糖凝胶电泳对DNA样品进行检测,比较提取DNA的产量、质量,并综合分析各提取方法所需时间及所用试剂的毒性大小。结果表明,盐析法提取的DNA平均浓度为521 ng/μL,纯度能满足分子检测要求,用MSAP引物能得到较好的扩增结果,相比其它方法,盐析法更简便、快速且无毒。因此盐析法是多头烟粉虱全基因组DNA提取的最佳方法。     

一种经济快速提取丝状真菌基因组DNA的方法

以螺旋木霉(Trichoderma SpiraleXX)、小克银汉霉(Cunninghamella phaeospora MK)和卵形孢球托霉(Gongronella butleri XT)3种丝状真菌为材料,采用改进的CTAB法提取基因组DNA.方法改进后无需液氮、聚乙烯砒咯烷酮(PVP)和NaAc等试剂,过程简洁,且所需菌体量少,提取的DNA纯度较好,适用于一次微量提取多个样品的基因组DNA.此方法得到的基因组DNA可用于PCR扩增.     

二代测序技术在疑难生物检材法医DNA检验的研究进展

测序技术的不断发展使二代测序技术在测序通量提高和读长增加的同时,成本也大幅度降低。目前二代测序技术已广泛应用于生命科学各领域研究中,并且也逐渐受到法医学者的关注。文中主要阐述了二代测序技术在法医学实践中常见的微量、降解及混合等疑难生物检材DNA检验中的研究进展,对其未来的发展进行了展望,并提出了可能面临的挑战。     

利用改良CTAB法快速小量提取微胚乳玉米基因组DNA

为了能快速小量提取微胚乳玉米基因组DNA,以微胚乳玉米幼叶为试材,采用改良CTAB法和传统CTAB法提取微胚乳玉米基因组DNA,并对所提取的DNA通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增等方法进行检测。两种方法所得基因组DNA的OD260/OD280在1.8~1.9之间,电泳条带清晰,无蛋白质和RNA污染,DNA无明显降解,其浓度和纯度都适合基因工程实验操作的条件。改良CTAB法与传统CTAB法相比更简便快捷,可实现大批量的不同样本基因组DNA的同时提取,提供了一种简便、快捷、有效和实用的微量提取微胚乳玉米基因组DNA方法,可满足以PCR为基础的分子生物学研究。     

法医遗传学研究和鉴定中的伦理问题

法医遗传学主要以人体生物检材为对象,通过检测遗传信息解决与法律相关的生物检材鉴识问题,为侦查提供线索,为审判提供证据,往往涉及到众多伦理问题。本文提出伦理学在法医遗传学研究和鉴定中的应用基本原则,并对检材/样本收集、法医DNA表型分析、法医遗传系谱学分析、法医DNA数据库建设和应用、亲子鉴定和亲缘鉴定、法医遗传学科研数据交流和共享等方面涉及的伦理问题进行了分析,提示法医遗传学从业人员在研究和鉴定中要充分考虑伦理问题,建议有关部门制定法医遗传学具体的伦理要求,建立伦理审查制度,加强从业人员伦理学培训。     

DNA常见纯化方法比较与分析综述

探讨几种常见基因组DNA的纯化方法,比较其适用范围和优缺点。比较常见的DNA纯化方法包括:传统SDS/Proteinase K的方法、试剂型的方法、磁珠法和column型纯化方法。传统SDS/Proteinase K方法纯化DNA:纯化的DNA完整性好,纯度高,但是耗时长,操作繁琐。试剂型的方法:完整性好、省时,但是纯度较难保证,不适宜大量样品平行操作。磁珠法:纯度高、完整性好,可根据磁珠添加比例选择性回收不同大小片段,特别适用于微量样品的回收,但是对实验操作要求较高,成本相对较高。Column法纯化的DNA纯度高,耗时短,操作简单方便,平行性好,完整性略差。每种方法各有优缺点,但是都能满足PCR、建库等实验操作要求。对于不同的实验目的应该选择不同的操作方法,才可以达到预期效果。     

全基因组扩增技术及其在法医个体识别中的应用

全基因组扩增(Whole genome amplification,WGA)技术是一种对全部基因组序列进行非选择性扩增的技术。近几年来,对WGA技术扩增痕量DNA检材的研究日渐深入,这些研究可望用于刑案现场采集到的痕量DNA样品的扩增,为法医个体识别提供足量的DNA模板。然而,对实际案件中复杂检材的扩增偏差问题一直困扰着法医工作者,寻求一个低扩增偏差、高扩增产率的WGA技术是法医工作者的主要目标。文章综述了WGA技术在法医个体识别中的研究进展及应用前景,为法医解决扩增偏差问题提供参考。     

激光显微切割技术用于子宫内膜异位组织DNA的提取及其完整性分析

目的：探索一套激光显微切割（LCM）分离子宫内膜异位症腺体细胞后提取微量DNA并进行完整性分析的操作流程。方法：分别对20例石蜡标本及20例冰冻标本进行LCM,收集切割后的腺体细胞;2组标本各取10例提取微量DNA,检测DNA浓度并通过PCR扩增进行验证;余20例标本分别进行全基因组扩增,检测产物浓度并利用8种常见管家基因作为引物通过PCR扩增进行验证,对比分析其结果。结果：石蜡标本与冰冻标本在LCM获取腺体细胞及提取微量DNA两个环节中均可获得满意效果;但经全基因组扩增后,石蜡标本无法保留完整DNA信息。结论：LCM获取子宫内膜异位症腺体细胞提取微量DNA是一种操作简单、结果稳定的方法,可作为日后子宫内膜异位症基因组研究的常规方法;冰冻切片相对石蜡切片,更能保留完整的DNA信息。     

一种自制DNA提取剂在微量细胞和单个囊胚上的应用

目前微量DNA的提取方法,不仅操作繁琐耗时,而且所需试剂价格昂贵。为了解决这个问题,本研究旨在开发一种快速、经济的微量DNA提取剂。用自制提取剂快速提取50个、100个、500个、5 000个、50 000个猪胎儿成纤维细胞的基因组DNA。经PCR扩增,电泳结果显示:自制提取剂可有效提取数量低至50个的猪胎儿成纤维细胞。分别采用自制提取剂、酚氯仿以及试剂盒3种方法提取猪单个囊胚基因组DNA,结果显示:酚氯仿方法提取的单个囊胚基因组DNA,经PCR扩增后,并没有检测到目的条带;而自制提取剂提取模板DNA,能直接扩增出清晰的目的条带,与试剂盒扩增效果相当。自制提取剂能够快速、有效地提取少量细胞和单个囊胚的基因组DNA,满足下游分子生物学研究需要,因此,本研究为微量样本基因组DNA提取提供帮助。