针对点突变癌基因T24—ras转录物的核酶性质研究

通过改变核酶体外反应的各种条件,对针对点突变癌基因Ｔ２４－ｒａｓ转录物的核酶Ｒ８的性质进行了系统研究,结果表明：Ｒ８切割底物反应的最适ｐＨ值约为８．２,最适温度为５０℃,反应必须有镁离子参加,生理环境中常见的阴离子对反应没有影响,一些变性剂能够促进反应的进行,Ｒ８切割底物的反应为二级反应。     

宫颈癌c-Ha-ras癌基因点突变的研究

用聚合酶链反应放大技术扩增宫颈癌e-Ha-ras癌基因第一外显子的基因片段,反应终产物与5′末端标记的特异寡核苷酸探针杂交,在18例宫颈癌DNA样品中,发现有6例存在e-Ha-ras癌基因第12位密码子的G-T突变,突变率为33％。推测第12位密码子的点突变是宫颈癌Ha-ras基因的活化途径之一。     

PCR-RFLP 方法测定 ras 癌基因点突变

曾使用 PCR-RFLP 方法分析过 c-Ha-ras 癌基因第12密码子的点突变.因N-ras 基因第12位密码子、K-ras 基因第12和13位密码子无已知的限制性内切酶的酶切位点,不能使用 PCR-RFLP 方法分析这些位点的突变.在 PCR 引物的3′端引入一个误配的碱基使之正好成为某限制性内切酶的酶切位点,这样便能使用PCR-RFLP 技术分析 c-Ha-ras 基因第61位、N-ras 基因第12位、K-ras 基因第12和13位密码子的点突变.     

多胺生物合成的抑制对转化细胞c—Ha—ras癌基因表达的调控

抗多胺代谢剂－－二氟甲基鸟氨酸（ＤＦＭＯ）作用于经含点突变的Ｈａ－ｒａｓ基因片段转染的转化细胞（ＨＲ－１细胞）引起细胞生长的抑制,其抑制率随ＤＦＭＯ浓度的增加而增大,此时细胞多停滞于Ｇ１期;多胺合成的关键酶鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）活性显著下降;Ｈａ－ｒａｓ癌基因ｍＲＮＡ及ｒａｓＰ＾２１蛋白的表达受到抑制;而外源性腐胺与ＤＦＭＯ的同时加入可防止上述一系列改变的发生,说明ＤＦＭＯ使ＨＲ－１细胞某些表型向     

电化学发光PCR方法检测结肠癌中K-ras癌基因点突变

发展了一种可用于快速检测K-ras癌基因点突变的电化学发光PCR(ECL-PCR)分析方法,该法采用三联吡啶钌标记的上游引物和生物素标记的下游引物对目的片段进行PCR扩增;随后,采用限制性内切酶MvaI对扩增产物进行酶切,由于突变导致酶切位点的丢失,所以只有野生型样品能被切断;通过生物素与链霉亲和素包被的磁珠连接,将生物素标记的DNA片段收集到反应池中进行电化学发光检测。采用该法对20例结肠癌组织中的K-ras癌基因第12位密码子进行点突变分析,得出其中有9例存在点突变,点突变率为45%。该方法操作简便、安全、快速、灵敏,可用于快速检测K-ras癌基因点突变。     

针对点突变癌基因T24－ras转录物的核酶性质研究

通过改变核酶体外反应的各种条件,对针对点突变癌基因Ｔ２４－ｒａｓ转录物的核酶Ｒ８的性质进行了系统研究,结果表明：Ｒ８切割底物反应的最适ｐＨ值约为８．２,最适温度为５０℃,反应必须有镁离子参加,生理环境中常见的阴离子对反应没有影响,一些变性剂能够促进反应的进行,Ｒ８切割底物的反应为二级反应。     

膀胱癌H-ras基因点突变和ras癌基因产物P21的表达

应用聚合酶链反应(PCR)技术结合地高辛化寡核甘酸探针杂交以及免疫组织化学方法,检测人膀眈癌组织中H-ras癌基因第12位密码子点突变和基因产物P21蛋白的表达.58例膀胱癌组织中有23例出现H-ras基因的点突变,36例P21蛋白表达阳性,5例正常膀胱组织未见点突变和P21蛋白阳性表达.本组膀胱癌第12位密码子点突变和P21阳性表达水平呈正相关,多发生在肿瘤临床T2-T4期和分化差的肿瘤,并且与膀胱癌的预后有关、提示H-ras癌基因点突变和P21蛋白阳性表达是膀胱癌的晚期表现,并在膀胱癌的发生,发展及预后中起着重要作用.     

一种测定癌基因c-Ha-ras点突变的简易方法——PCR-RFLP法

利用多聚酶DNA链延伸反应与限制性内切酶酶解片段长度多态性分析相结合,可简单、迅速、准确地对胃癌组织及细胞株DNA中癌基因c-Ha-ras第12位密码子是否存在点突变进行测定。这个方法是使用非同位素方法对单拷贝基因点突变进行检测的首次报道。     

两种等位基因特异性扩增方法在结肠癌K-ras癌基因点突变检测中的应用比较

针对传统电泳检测方法存在操作复杂、费时等缺点,提出一种用于检测K-ras癌基因点突变的实时荧光等位基因特异性扩增（Allele specific amplification,ASA）方法。该法采用突变型引物对结肠癌基因组中的K-ras基因进行等位基因特异性扩增,只有突变型样品能被顺利扩增出双链DNA产物,该产物能与双链DNA染料SYBR GreenⅠ结合,产生荧光信号从而被检测到。通过对荧光域值和溶解曲线分析来区分不同的基因突变类型。该法可以检测到野生型DNA中含量为1/1 000的突变型DNA,整个检测时间小于1 h。我们用该法检测31例结肠癌样品中K-ras基因密码子12发生的点突变,其中有15例检出为阳性。此外,还采用等位基因特异性扩增结合电泳分析对样品进行了检测,并对两种方法进行了比较。结果显示：实时荧光等位基因特异性扩增方法具有操作简便、快速、检测成本低等优点,为临床诊断基因突变引起的疾病提供了一种可行的手段。     

高灵敏度电化学发光PCR方法检测基因点突变研究

近年来发展了一种用于定量检测基因点突变的电化学发光PCR方法。该法采用三联吡啶钌标记的上游引物和生物素标记的下游引物对待测基因进行PCR扩增;随后,采用特定的限制性内切酶对扩增产物进行酶切,由于野生型样品和突变型样品间存在酶切位点的变化,其中只有一种基因型样品能被切断;通过生物素与链霉亲和素包被的磁珠连接,将生物素标记的DNA片段收集到样品池中;进行电化学发光检测,通过所得信号的有无可以判断其基因型。我们分别将该法用于Presenilin-1基因和H-ras癌基因的点突变检测,结果均可明显区分突变型样品和野生型样品。该法具有灵敏、快速、简便、安全等优点,是一种实用的基因点突变检测方法。