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本文通过斑点印渍杂交技术和放射免疫分析方法,首次证实,~3H-TdR放射线转化C3H/10T1/2细胞株可高表达TGFα mRNA,并可向细胞外分泌具有免疫活性的TGFα分子,而非转化对应细胞中虽有TG FαmRNA的弱表达,但其无血清培养上清中未测到TGFα的分泌。表明TGFα参与了放射线对细胞的转化以及维持转化细胞增殖的过程。提示TGFα在三大致癌因素转化细胞中的存在可能具有普遍意义。同时,c-myc与c-fos两种癌基因mRNA在转化细胞中的表达水平显著高于非转化对应细胞,而c-sis癌基因mRNA的表达水平在两种细胞中无显著差异。 相似文献
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PEG/LiAc转化酵母细胞方法的改进 总被引:3,自引:0,他引:3
PEG/LiAc法转化酵母适用于酵母双杂交系统的大量筛选,并能获得10^6转化子/μg质粒以上的转化率,但如果没有进口的PEG3350而采用分子量接近的国产PEG4000进行转化的话,转化率仅为10^4,远低于文献报道的水平。我们报道了一个改进的PEG/LiAc方法,采用国产PEG6000,转化率也能达到10^6,且能将的热激时间从20min缩短为2min。 相似文献
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矮牵牛编码F3′5′H的蓝色基因表达载体构建及转化 总被引:1,自引:0,他引:1
类黄酮3',5'羟基化酶(Flavonoid-3',5'hydroxylase,F3'5'H)是花色苷代谢途径中的一个关键酶,能使花色素合成趋向于形成蓝色的飞燕草色素,从而使花色向蓝紫色偏移.本研究从蓝紫色矮牵牛(Petunia hybrida)花瓣中克隆了编码F3'5,H的蓝色基因Hf1,并通过PCR技术获得百合花特异表达启动子(PchsA),将百合PchsA与Hf1基因融合,构建了百合花特异表达启动子调控的Hf1基因植物表达载体,通过农杆菌介导的叶盘法转化粉红色矮牵牛.抗性筛选和PCR检测鉴定转基因植株,结果表明,成功地获得了转基因阳性植株. 相似文献
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在NIH3T3细胞中高表达EDAG—1基因导致细胞恶性转化 总被引:11,自引:0,他引:11
探讨一种新近克隆的特异表达在造血系统组织和细胞中的胚胎发育相关新基因 (EDAG 1)的生物学功能。构建EDAG 1真核表达载体pcDNA3.1( ) EDAG 1,以脂质体法将其稳定转染入NIH3T3细胞中 ,结果发现高表达EDAG 1的NIH3T3细胞失去了正常的平行走向及接触抑制现象 ,侵袭力较正常增强约 10倍并获得锚定不依赖生长能力。将该细胞株皮下接种裸鼠 ,受鼠在 4周左右 10 0 % (6 / 6 )成瘤。这些结果表明EDAG 1是一种具有转化活性的新基因 ,可能与肿瘤发生、发展密切相关 相似文献
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木质素作为木材的主要组成成分,通常是由3种单体聚合而成,在其生物合成过程中,共有10个酶家族参与负责将苯丙胺酸转化为单体木质素,其中C3H是在对-香豆酰辅酶A(p-coumaroyl CoA)到咖啡酰辅酶A(caffeoyl CoA)的羟基化过程和G/S单体形成中的关键控制酶类,探究PagC3H3基因表达模式,对于进一步了解该基因功能具有重要意义。该研究通过定量PCR对PagC3H3基因的组织特异性表达进行分析;克隆得到了长度为2 035 bp的PagC3H3的启动子序列,预测含有多个顺式作用元件;同时,将获得的PagC3H3的启动子序列构建植物表达载体pBI121-PagC3H3pro::GUS,进行拟南芥瞬时转化,结果显示PagC3H3基因在84K杨的根、中部茎节和基部茎节中的表达量较高;瞬时转化拟南芥,GUS染色表明:在下胚轴和根中GUS活性较强,由此推测PagC3H3基因在木质素合成过程中发挥作用。 相似文献
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人转化生长因子—α/β—半乳糖苷酶融合基因在昆虫... 总被引:2,自引:0,他引:2
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本文研究了静息细胞生物转化生产3-羟基丙酸的反应体系。考察了以甘油为底物,利用静息细胞转化生产3一羟基丙酸的相关因素,确定了最佳的转化条件:细胞浓度20g/L,甘油浓度20g/L,辅酶VB12浓度10mg/L,NAD+浓度0.15mmol/L,温度35℃,反应体系为0.05mol/LpH7.0Tris—HCl缓冲液。在上述条件下反应6h后,3-羟基丙酸的产量达到为3.17g/L,底物转化率为28.33%。由上述结果可知,采用静息细胞转化法为3-HP的生物合成提供了一种可能的方法。 相似文献
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将骆驼刺离体再生苗的茎切段经发根农杆菌A4菌株感染后,在含500mg/L头孢霉素的MS无激素培养基上培养,产生了转化的发根和愈伤组织.转化根在附加2mg/L2,4-D和0.5-1mg/L6BA的MS培养基上培养后,亦可诱导出愈伤组织.在含3mg/L6BA和0.5mg/LNAA的培养基上诱导出了苗的分化.冠瘿碱分析表明,在95%以上的发根和75%的转化愈伤组织及再生植株中都显示了T-DNA的整合和表达.染色体检查发现,约81%的发根细胞具有正常染色体数(2n=18),其余则存在染色体数目的变化,在继代培养一年之后,转化体仍维持旺盛的再生能力. 相似文献
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假单胞菌因其生境和代谢类型的多样性,在污染环境修复、生物转化、生物防治等领域具有广阔的应用潜力;外源基因的导入是假单胞菌遗传改造的重要环节,而感受态细胞的制备和转化方法的建立是导入外源基因的重要方法学基础.本研究以从石油污染土壤中分离筛选的假单胞菌属的3个菌株Pseudomonas putida TS11、P.stutzeri DNB、P.mendocina JJ12为对象,通过3因素4水平正交实验设计,研究了不同CaCl2浓度、热激时间及复苏时间对不同假单胞菌感受态细胞制备及转化效率的影响.结果表明:CaCl2浓度是影响假单胞菌转化效率的最主要因素(P<0.05),且在制备感受态细胞之前用无菌蒸馏水多次洗涤菌体细胞,转化率明显提高.3种假单胞菌的CaCl2转化优化条件分别为:100 mmol·L-1 CaCl2,热激3 min,复苏1.5 h;50 mmol·L-1 CaCl2,热激6 min,复苏1.5 h;75 mmol·L-1 CaCl2,热激4.5 min,复苏0.5h.在上述转化条件下,3种假单胞菌的外源质粒转化效率均达到105个转化子·μg-1DNA水平. 相似文献