改良环介导等温扩增技术快速检测婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌

[目的]采用改良环介导等温扩增(LAMP)技术,快速检测婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌.[方法]以阪崎肠杆菌(ATCC29544)的16S-23S rRNA间区序列作为靶序列,设计内、外引物和环引物,通过肉眼观察白色沉淀,判断检测结果.[结果]LAMP检测阪崎肠杆菌的灵敏度为0.101 CFU/mL,人工污染阪崎肠杆菌的婴儿配方奶粉的检出限为1.1 CFU/g.采用试剂盒提取DNA,从样品处理到报告结果,耗时1 h.而对照,PCR检测阪崎肠杆菌的灵敏度为101 CFU/mL,人工污染阪崎肠杆菌的婴儿配方奶粉的检出限为1100 CFU/g.采用同样方法提取DNA,从样品处理到报告结果,耗时3 h.[结论]因此,LAMP检测婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌灵敏度高,耗时短,方法简便.     

乳及乳制品中阪崎肠杆菌PCR-DHPLC检测新技术的建立

为了应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中阪崎肠杆菌的快速检测方法,根据阪崎肠杆菌16S-23S rRNA特异基因序列的特点设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测.以阪崎肠杆菌等59株参考菌株做特异性试验;阪崎肠杆菌菌株稀释成不同梯度,做灵敏度试验,结果表明该方法具有很好的特异性,方法灵敏度较高,检测低限可达到为25 CFU/mL;该方法可以快速、准确检测阪崎肠杆菌,是食品中致病菌快速检测的新技术.     

奶粉伴侣中微生物污染特点分析

目的：了解婴幼儿经常食用的奶粉伴侣中微生物的污染状况。方法：2016年在我国8个省（直辖市）采集奶粉伴侣864份,按照食品安全国家标准方法检测菌落总数、大肠菌群、阪崎肠杆菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌。结果：104%（9/864）的奶粉伴侣菌落总数＞104 cfu/g,012%（1/864）大肠菌群＞102 cfu/g,未检出单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌,但1份样品检出阪崎肠杆菌。结论：奶粉伴侣微生物污染水平较低。     

乳制品中四种病原菌多重荧光PCR检测方法的建立与应用

本研究建立了可快速特异检测乳制品中阪崎肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特氏菌的多重荧光PCR方法。通过设计阪崎肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特氏菌的特异性引物和探针,建立了多重PCR反应体系,评价了该方法的特异性、灵敏度和精密度,并用该方法和国标法分别检测了150份乳制品中的4种致病菌,对检测结果进行对比。结果显示,检测目标菌为相应阳性,检测其他12种非目标供试菌为阴性;检测灵敏度分别为1 cfu/μL;其精密度的变异系数均小于5%;与国标检测方法相比其检测结果具有良好的一致性。     

沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌多重PCR检测方法的研究

建立快速检测沙门菌、志贺菌和副溶血性弧菌的多重PCR方法[1-4].根据沙门菌hilA基因、志贺菌ipaH基因及副溶血性弧菌TDH基因设计特异性PCR引物[5-6],被检样品经4 h振荡培养后金属浴裂解制备DNA模板,使用全自动毛细管电泳核酸检测系统分析PCR扩增产物.在580、423和245 bp处分别出现预期的特异性DNA条带,且无非特异扩增条带出现.敏感性试验显示沙门菌在模拟标本中的检测灵敏度为101-2cfu/mL、志贺菌为101cfu/mL、副溶血性弧菌为102cfu/mL.该方法操作方便、分析时间短、特异性和灵敏度高,可用于公共卫生突发事件食源性病原菌的快速检测.     

应用阳离子磁珠捕集法快速检测奶粉中阪崎肠杆菌

目的:研究应用阳离子磁珠捕集法检测奶粉中阪崎肠杆菌,缩短阪崎肠杆菌检测周期,提高效率.方法:对阳离子磁珠捕集法检测阪崎肠杆菌的检测限和抗干扰性进行了实验,并通过检测乳粉样品与传统培养法相进行比较.结果:阳离子磁珠捕集法检测阪崎肠杆菌的检测限达到20～30 CFU/250ml,抗干扰性能强,检测周期比传统培养法缩短28 h～36 h,检测结果与传统培养法保持一致.结论:应用阳离子磁珠捕集法检测奶粉中的阪崎肠杆菌的方法是完全可行的.     

特异性三重PCR快速检测副溶血性弧菌

【目的】建立同时检测副溶血性弧菌gyrase、tdh、trh基因的三重PCR快速检测方法。【方法】将已报道的这3种基因的引物加入一个PCR反应管中,对引物浓度和退火温度进行优化,找到最佳引物比例和扩增条件。通过特异性验证、灵敏度验证以及方法间对比进行方法确认,其PCR产物使用全自动毛细管电泳分析系统进行分析。【结果】仅在91、269、485 bp处分别出现预期DNA扩增条带;纯培养条件下,扩增gyrase、tdh、trh的菌浓度检测限分别为6.6×101、6.6×102和6.6×101 CFU/mL;本底干扰物存在时,扩增gyrase、tdh、trh的菌浓度检测限分别为6.6×103、6.6×104和6.6×103 CFU/mL;模板DNA浓度检测限为1.36μg/L。检测进境海产品时,检测结果和FDA 2004标准结果一致,且更易辨认和判断。【结论】此检测方法的成功建立,为副溶血性弧菌及携带tdh和/或trh基因的致病性副溶血性弧菌的检测提供了一种准确、高效、便捷的分子技术手段。     

阪崎肠杆菌能力验证样品均匀性和稳定性的研究

目的制备出以脱脂奶粉为基质的均匀性好、稳定性强的阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)能力验证样品。方法研究奶粉基质的粒度、奶粉和菌粉的混合比例,得到阪崎肠杆菌能力验证样品的最佳均匀性条件;研究包装形式及贮存温度对样品稳定性的影响,得到阪崎肠杆菌能力验证样品的最佳稳定性条件。结果要保证样品足够均匀,奶粉最佳粒径范围为120μmD180μm,1 g菌粉最多与300 g奶粉进行混合;贮存温度对样品稳定性有较大影响,高温明显降低样品稳定性;真空包装可以显著提高样品稳定性。结论以奶粉为基质的阪崎肠杆菌能力验证样品的制备能够更准确地考查乳品微生物检验人员的检测水平,为国内微生物能力验证水平的提高奠定了基础。     

益生菌拮抗阪崎肠杆菌的初步研究

目的研究鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌等8种常见益生菌对阪崎肠杆菌的拮抗作用。方法采用牛津杯法测定益生菌耗尽上清对阪崎肠杆菌的抑菌圈,获得对阪崎肠杆菌具有较强抑菌能力的鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌;采用混合培养法对2株益生菌与阪崎肠杆菌的拮抗竞争能力进行测试。结果 8种益生菌耗尽上清均能抑制阪崎肠杆菌,其抑菌能力具有热稳定性且依赖于酸性pH环境。阪崎肠杆菌(107CFU/mL)与鼠李糖乳杆菌(108CFU/mL或109CFU/mL)共孵育至24 h,其活菌量开始逐渐下降,至120 h孵育结束下降到105CFU/mL;菌量比为1:10的阪崎肠杆菌与植物乳杆菌共孵育至24 h,其活菌量开始逐渐下降,菌量比为1:100时则提前至8 h,至120 h孵育结束活菌量均下降到102CFU/mL。结论鼠李糖乳杆菌和植物乳杆菌均能有效地竞争拮抗阪崎肠杆菌。     

食品中阪崎肠杆菌快速检测鉴定方法的研究

通过设计特异性的引物,采用SYBR Green I实时荧光PCR,经引物的优化筛选、特异性和重现性试验,以及模拟污染样品检验,建立了食品中阪崎肠杆菌的快速检测和鉴定方法。