BCG-CpG-DNA对重组HBsAg免疫原性的影响

为了研究BCG-CpG-DNA对重组HBsAg免疫原性的影响,了解其佐剂功能。采用不同剂量BCG-CpG-DNA与不同剂量重组(汉逊酵母)表达的HBsAg或Al-HBsAg混合免疫小鼠,与同剂量铝佐剂疫苗对比,以放射免疫法检测抗-HBs中和抗体水平和抗体持续时间,ELISA法检测抗体亚类。结果显示,BCG-CpG-DNA和HBsAg混合,抗-HBs的中和抗体水平达到或高于同剂量铝佐剂疫苗;BCG-CpG-DNA和Al-HBsAg混合,抗-HBs的中和抗体水平高于同剂量铝佐剂疫苗,并有统计学显著意义(P<0.05);添加BCG-CpG-DNA组抗体水平4周时增加不明显,到10周则显著地高于同剂量铝佐剂疫苗组,IgG2a抗体水平也高于相应的对照组。实验结果表明BCG-CpG-DNA对HBsAg有较好的免疫佐剂作用,并和AL佐剂有协同作用。     

4375例高考学生HBsAg检测的调查分析

为了解我县参加高校体检学生 HBs Ag的阳性率情况 ,通过近 3年 4375例学生 HBs Ag检测的调查分析 ,对男女性别 ,城镇农村检出的 HBs Ag阳性分别进行分析 ,从中发现男性阳性率高于女性 (6 .9% / 5 .1% ) ,农村阳性率高于城镇(6 .8% / 5 .5 % ) ,结果报道如下 :1　材料与方法1.1　材料　 1998～ 2 0 0 0年 ,3年安吉县高中毕业生共 4375例 ,年龄 17～ 2 0岁。1.2　方法　用 EL ISA法进行检测。试剂由上海实业科华生物技术有限公司提供 ,仪器为 Wellwash4洗板机、WellscanMk2酶标仪。操作严格按说明书进行。2　结果4375名高考学生 HBs A…     

乙型肝炎病毒感染血清流行病学规律的研究

1984～1987年,在湖南、河南、河北、黑龙江4个试点区,整群抽样采血10 484人,采血率达80％以上。HBsAg、抗-HBs和抗-HBc均用RIA法检测。结果4个点乙型肝炎病毒(HBV)标化感染率为58.2％。HBV感染率随年龄增长而升高,7岁时为51.6％,25岁时达63.7％,接近高峰值。HBsAg标化阳性率为10.1％。HBsAg阳性率显示两个高峰,一个在2～8岁时,即儿童峰。从零岁的3.8％至2周岁时的12.5％,已达高峰。湖南的儿童峰值较其它3个试点区高。故HBsAg阳性率南高北低的现象仍然存在(P<0.01)。另一个峰在20～45岁,即成人峰。 抗-HBs标化阳性率为32.2％。HBsAg:抗-HBs之比值,5岁以内为1:1,10岁以后上升为l:3.3～5.9。抗-HBc标化阳性率为45.5％。此结果表明,调查地区均为HBV高感染区,感染主要发生在儿童期。故新生儿是预防乙型肝炎的重点人群。     

重组HBsAg的纯化及动物免疫原性研究

用乙型肝炎病毒(HBV)DNA转染工程细胞株MT-5,收获培养上清液,经超过滤浓缩、PEG沉淀和3次超速离心,得到纯化的HBsAg。经SDS-PAGE银染色后,纯化的HBsAg显示两条多肽,分子量分别为23k和27k,与血源HBsAg的多肽成分相同,为HBsAg的两条特异性多肽。经PAGE银染色结果显示,纯化的HBsAg中杂蛋白含量符合疫苗制备要求。用上述方法提纯HBsAg,回收率可达44.1％以上。 将纯化的HBsAg吸附于氢氧化铝佐剂,免疫Balb/c小鼠,并与血源HBsAg对照,抗体半数阳转剂量(ED50)分别为0.501μg和0.832μg,说明基因工程HBsAg的免疫原性似优于血源HBsAg。     

HBsAg颗粒表面的“尾巴”现象

乙型肝炎表面抗原(HBsAg)可引起保护性抗体,故对其结构的研究十分重视。已知HBsAg颗粒由子粒组成,对它的氨基酸序列亦有不少了解。然而子粒之间是怎样连结着,未见报道。我们用皂素等处理使HBsAg颗粒松散,以观察子粒间的结构,结果发现处理后,HBsAg颗粒上可裂解出像条尾巴的丝状物,暂称为尾巴现象。从典型的尾巴上香出,子粒之间有着线性连结。现作如下报道。     

HBsAg分子生物学与HBV疫苗研究进展

通过对ＨＢｓＡｇ的免疫原性、肝细胞嗜性及其与ＨＢＶ免疫病理的关系等研究,阐述了ｐｒｅＳ多肽对ＨＢＶ感染免疫应答的作用及其与肝细胞膜的相互作用。基于ｐｒｅＳ多肽在乙肝免疫中的重要性,使得乙肝疫苗的研究随着重组ＤＮＡ技术的发展从第一代血源乙肝疫苗到第二代基因工程疫苗特别是多肽或亚单位疫苗在产量、质量、免疫原性、安全性等方面的研究取得了长足的进展。     

HBsAg基因在酵母细胞中的表达

先前从酵母染色体[DNA中得一个作用较强的启动基因片段,使HBsAg基因在其控制下,构建了大肠杆菌一酵母细胞穿梭质粒。这种质粒转化的酵母细胞能生产和装配HBsAg颗粒。经放射免疫分析,超离心沉降研究和电子显微镜观察,酵母产生的HBsAg颗粒与人血清中的HBsAg颗粒十分相似。     

乙型肝炎表面抗原亚型“y”决定簇抗原性研究

用免疫扩散法(ID)对新疆、内蒙、西藏三地区的维吾尔族、蒙古族及藏族37份ayw/HBsAg阳性标本进行分型,36份为ayw2亚型,1份ayw4亚型,后者为我国ayw2优势亚型区首次发现的另一种新亚型,用y单克隆抗体酶标电泳法对ayw1、ayw2、ayw3和ayw4进行了抗原性研究,结果证明,ayw2和ayw4与ayw1和ayw3两组中的y为两种抗原性不完全相同的决定簇,本研究结果对乙型肝炎流行病学调查和乙肝疫苗抗原的合理组成有一定参考价值。     

抗HBsAg人源单链可变区抗体的筛选与可溶性抗体的表达

采用噬菌体表达展示技术,以从乙型肝炎病毒（HBV）表达抗原（HBsAg）阳性血汪有超速离心纯化的HBsAg为固相抗原,从噬菌体单链可变区半合成抗体库中经过5轮“吸附－洗脱－扩增”筛选过程,获得特异性较强的HBsAg人源单链可变区抗体（ScFv）克隆并提取质粒,经SfiⅠ/NotⅠ酶切鉴定后,亚克隆到pCANTAB5E表达载体中,转化大肠杆菌XL1－Blue。经IPTG诱导后,表达的可溶性HBsAg特异性ScFv以50％硫酸胺沉淀,经SDS－PAGE电泳表明,XL1－Blue中表达的HBsAg可溶性ScFv的分子量约28kD。免疫活性检测结果表明,该单链抗体具有较强的抗原结合性和特异性。HBsAg人源单链抗体的筛选和表达成功,为今后HBsAg人源抗体的研究和应用奠定了基础。     

肝硬化患者乙肝表面抗原的定量检测及意义

目的：探讨HBsAg定量测定在乙肝相关性肝硬化病程中的变化和意义。方法：选择乙肝相关性肝硬化患者60例纳入实验对象,根据2000年9月（西安）第10次全国病毒性肝炎学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案》中的诊断标准分为代偿期组和失代偿期组,其中代偿期组35例,失代偿期组25例。另选取20例乙型肝炎病毒携带者作为对照组。应用电化学发光免疫分析法测定患者血清中HBsAg和HBeAg滴度,免疫荧光定量PCR法检测HBVDNA载量。结果：对照组、肝硬化代偿期组和肝硬化失代偿期组HBsAg滴度分别为：2574.73±3252.27COI、5494.35±2129.84COI和6921.25±1957.60COI,三组之间差别均有统计学意义（P〈0.05）。肝硬化代偿期组中,HBsAg滴度与HBVDNA、HBeAg水平呈负相关性（P〈0.05（）r=-0.350;r=-0.514）。肝硬化失代偿期组中,HBsAg滴度与HBVDNA及HBeAg水平均无明显相关性（r=-0.020;r=0.154）。结论：肝硬化失代偿期HBsAg滴度明显高于肝硬化代偿期,代偿期HBsAg滴度高于HBV携带者组,即HBsAg滴度随肝脏疾病进展呈阶梯型递增。肝硬化代偿期,HBsAg滴度与HBVDNA、HBeAg水平呈负相关性,HBsAg水平可以作为评估病毒复制的参考指标。肝硬化失代偿期,HBsAg滴度与HBVDNA和HBeAg无相关性,不能反映病毒复制水平,不能作为评估病毒复制的参考指标。