24p3-24p3受体系统：一种新的铁转运途径

小鼠24p3是脂质运载蛋白lipocalin家族的成员之一,可在白介素3(interleukin-3,IL-3)缺乏时诱导细胞发生凋亡,并参与细胞的铁转运过程.最近,Devireddy等又成功克隆到了24p3的细胞表面受体(24p3 receptor,24p3R),进一步确定了24p3-24p3R这一新的铁转运途径.该途径的发现不仅增加了对铁转运理论新的认识,更重要的是,这一发现为铁代谢调控细胞凋亡理论的建立奠定了基础.     

HIV-1 p24 DNA和P24蛋白联合免疫小鼠的效果

DNA疫苗能够诱导机体产生特异的细胞免疫和体液免疫反应,在肿瘤和感染性疾病的疫苗开发中显示出巨大的潜能。以HIV-1核心蛋白P24为抗原基因,构建pVAX1-p24 DNA,经Western blotting和动物活体成像检测证明,pVAX1 DNA携带的外源基因可以在293T 细胞和小鼠肌肉组织有效表达。采用不同的免疫策略免疫BALB/c小鼠 (DNA/DNA,DNA/Protein),实验结果表明：pVAX1-p24单独免疫BALB/c小鼠,可诱导明显的体液免疫及细胞免疫反应;pVAX1-p24与P24蛋白联合免疫诱导的体液免疫反应高于pVAX1-p24单独免疫,所获得的抗体滴度是单独免疫的7.3~8.0倍,但细胞免疫反应则不及单独免疫组。研究结果表明采取不同的免疫策略可以诱导产生不同的免疫反应,根据具体情况调整免疫策略将获得更好的免疫效果。这些研究为艾滋病疫苗的研发提供了实验依据。     

HIV感染早期病毒p24蛋白的检测

目的:建立敏感、特异的检测血清中HIV-p24蛋白的方法,作为HIV感染早期即窗口期的监测手段。方法:用纯化的p24蛋白免疫小鼠及家兔,获得单克隆及多克隆抗体,经DEAE-52阴离子交换柱纯化后,标记辣根过氧化物酶,建立ELISA双抗体夹心及间接双抗体夹心方法,检测HIV-p24蛋白。结果:包被单抗、标记多抗或包被多抗、标记单抗,均能特异地检出系列稀释的p24蛋白,包被混合单抗较包被多抗更敏感;经标记的抗种属抗体放大可明显提高检测的敏感性。结论:建立了敏感、特异的检测p24蛋白的双抗体夹心法,间接放大方法可检出50pg/mL的HIV-p24蛋白,检测敏感性与国际同类产品相似。     

HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原的比较

目的由于检测SIV p27抗原试剂盒来源困难,有时不稳定,鉴于HIV-1 p24与SIVp27有较强的交叉抗原,本研究比较HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原得出的结果是否存在一定的相关性。方法 HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒定性和定量检测样品中SIV p27抗原,并对检测结果进行回归和相关分析。结果 HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原的灵敏度分别是150 pg/mL和62.5 pg/mL。两种试剂盒检测病毒液和血浆中SIV p27抗原的定性结果一致。定量结果的统计分析得出病毒液的直线回归决定系数R2=0.857,直线相关系数r=0.926,P〈0.01,直线正相关程度较高;血浆的直线回归决定系数R2=0.512,直线相关系数r=0.716,P〈0.05,直线正相关程度较低。结论 HIV-1 p24 ELISA试剂盒能够替代SIVp27 ELISA试剂盒定性检测病毒液和血浆中SIV p27抗原,但只能定量检测病毒液中SIV p27抗原。     

Partial duplication of the short arm of chromosome 9 (p13→p22) in a child with typical 9p trisomy phenotype

Summary A 3-year-old girl with duplication 9 (p22p13) is reported. The presence of a classical 9p trisomy phenotype in this patient suggests that this region (or part of it) is responsible for the major, typical clinical stigmata of this partial autosomal trisomy syndrome.     

24p3/NGAL介导的铁转运途径

生物体内存在另一转铁途径。脂笼蛋白(lipocalin)家族的成员24p3／NGAL介导铁向细胞内转运,并在具有酸性环境的核内体(endosome)中与铁解离,进而调节铁蛋白(ferritin,Fn)基因和转铁蛋白受体-1(transferrin receptor-1,TfR-1)基因的表达。24p3／NGA转铁途径在亚细胞水平上与转铁蛋白(tansferrin,Tf)类似但相互独立。在胚肾发育过程中,24p3／NGAL与Tf介导的铁转运途径为不同时期的原始肾上皮细胞生长与分化所必需。深入研究24p3／NGAL转铁途径的分子机制及与Tf的异同有十分重要的意义。     

9p 和XXq—综合征一例报告

本文报告一例多发性先天畸形女子的细胞遗传学研究。用G带和C带技术鉴定为第9号染色体短臂三体(9p )和一条X染色体长臂远端部分缺失(xq—)。其临床征状为:严重的智力和发育障碍,身材矮小,头略小,两眼距稍宽并内陷,鼻圆,鼻梁高而鼻孔内翻,上唇短,耳位和后发线低下,指骨和脊椎骨异常,两乳头距远,乳房发育差,月经延迟,皮纹异常。     

Dandy-Walker malformations in a case of partial trisomy 9p (p12.1→pter) due to maternal translocation t(9;12)(p12.1;p13.3)

We describe a five-year-old proband presented with Dandy-Walker malformations, right microopthalmia, hamstring contractures, undescended testis with absence of testis in right scrotum in addition to typical trisomy 9p clinical features. Routine cytogenetic studies with GTG - banding showed 46,XY,der(12)t(9;12) (p12;q13.3),mat karyotype (trisomy 9p). Chromosomal analysis of the father was normal and phenotypically normal mother had 46,XX,t(9;12)(p12;q13) karyotype. Fluorescence in situ hybridization analysis with single copy probes bA5OIA2 (9p11.2), bA562M8 (12p12.1) and centromere probes (9) showed break point at 9p12.1 region. The gene dosage effect of Chromosome 9p along with environmental factors might be associated with Dandy- Walker malformations in the patient.     

HIV假病毒用于p24抗原检测试剂研制的研究

为了解决在研制新型HIV检测试剂盒时遇到的p24蛋白阳性对照物保存不便、阳性对照物稳定性不高以及蛋白结构和聚集形式与天然HIV病毒的p24存在差异等问题,通过将改造的HIV-1骨架质粒pNL43 EGFP R-E-和包膜蛋白质粒pGX-C共转染293T细胞后分离细胞培养液,获得具有单轮感染活性的HIV-1假病毒。通过对此假病毒颗粒的天然衣壳蛋白p24和市售HIV检测试剂盒中的p24蛋白阳性对照物的阳性反应有效性和保存稳定性的检测,证明了HIV-1假病毒p24蛋白具有更易保存、更稳定、更接近天然病毒p24蛋白的优点,适宜作为HIV检测试剂盒阳性对照物。     

尘螨变应原Der f 9、Der p 9和Blo t 9结构与功能的比较研究

使用多种生物信息学工具来预测、比较尘螨变应原Der f 9、Der p 9和Blo t 9的一级、二级、三级结构及抗原表位,找出3种蛋白结构及功能的异同。Der f 9、Der p 9和Blo t 9氨基酸序列一致性为82.07%,都含有3个胰蛋白酶活性位点氨基酸及2个功能结构区特异性序列;二级和三级结构中都由α-螺旋、β-折叠和无规卷曲组成;活性位点氨基酸在三级结构中完全重合,并相互靠近构成蛋白酶的活性中心;主要潜在抗原表位区域都为5个,并在第47-49aa和200-203aa区域出现了重合,但表位重合区的氨基酸种类不完全相同。应用生物信息方法预测和比较了Der f 9、Der p 9和Blo t 9结构与抗原方面的信息,为进一步研究变应原第9组分的生物学功能、疫苗研制奠定了基础。     

The α-Helical Region in p24γ2 Subunit of p24 Protein Cargo Receptor Is Pivotal for the Recognition and Transport of Glycosylphosphatidylinositol-anchored Proteins

Glycosylphosphatidylinositol-anchored proteins (GPI-APs) are group of proteins that depend on p24 cargo receptors for their transport from the endoplasmic reticulum to the Golgi apparatus. The GPI anchor is expected to act as a sorting and transport signal, but so far little is known about the recognition mechanism. In the present study we investigate the GPI-AP transport in cell knockdown of p24γ, the most diverse p24 subfamily. Knockdown of p24γ₂ but not of other p24γ family members impaired the transport of a reporter GPI-AP. Restoration of the knockdown-induced phenotype using chimeric constructs between p24γ₂ and the related p24γ₁ further implied a role of the α-helical region of p24γ₂ but not its GOLD domain in the specific binding of GPI-APs. We conclude that motifs in the membrane-adjacent α-helical region of p24γ₂ are involved in recognition of GPI-APs and are consequently responsible for the incorporation of these proteins into coat protein complex II-coated transport vesicles.     

马传染性贫血病毒Gag p9蛋白功能研究进展

对病毒复制机制研究的一个重要方面是病毒的组装和从细胞表面出芽。过去的 2 0年大量研究证实反转录病毒Gag蛋白对病毒的组装和出芽起着决定性作用。Gag蛋白的多个功能域已经被证明在病毒组装的不同时期发挥作用。马传染性贫血病毒 (equineinfectiousanemiavirus,EIAV)p9是Gag蛋白C端的一个小蛋白 ,在其之上的L域是与病毒释放直接相关的蛋白功能区域 ,L域的核心基序YPDL可与特异的病毒或细胞蛋白相互作用共同介导病毒粒子的组装和出芽作用 ,核心基序YPDL对病毒的复制能力有一定的影响。就近年来对p9功能区与病毒组装和释放关系的研究进展进行综述。     

博尔纳病病毒p24重组蛋白的表达与初步鉴定

博尔纳病病毒(Borna Disease Virus,BDV)是一种嗜神经病毒.研究表明,BDV不仅可以引起马、羊等家畜的自然感染,从啮齿类动物到人以外的灵长类动物均易受到BDV的实验性感染,而且BDV感染还可能与人类的某些精神神经疾病的发生相关.本研究对含有BDV-p24重组质粒PGEX-3X的大肠杆菌表达系统进行了优化表达BDV-p24蛋白,在IPTG 2 mmol/L、3 h表达量最大,同时用BDV-p24单克隆抗体证实了其特异性.从而为建立检测待检血清中BDV-p24特异性抗体的方法提供了实验基础.     

HIV—1核蛋白p24在昆虫细胞中的表达

将完整的ＨＩＶ－１ ｐ２４基因克隆到杆状病毒转移质粒中,使用重组转移质粒与野生型杆状病毒ＤＮＡ共转染Ｓｆ９昆虫细胞,经筛选获得带有编码ｐ２４基因的重组杆状病毒。重组杆状病毒感染Ｓｆ９细胞后在细胞中表达了ＨＩＶ核蛋白ｐ２４。其重组蛋白的分子量为２４ｋＤ。此重组糖蛋白在免疫荧光,免疫印染和酶联免疫实验中都能被人ＨＩＶ－１阳性血清和单克隆抗体所识别。     

The p38 MAPK Regulates IL-24 Expression by Stabilization of the 3′ UTR of IL-24 mRNA

Background

IL-24 (melanoma differentiation-associated gene-7 (mda-7)), a member of the IL-10 cytokine family, possesses the properties of a classical cytokine as well as tumor suppressor effects. The exact role of IL-24 in the immune system has not been defined but studies have indicated a role for IL-24 in inflammatory conditions such as psoriasis. The tumor suppressor effects of IL-24 include inhibition of angiogenesis, sensitization to chemotherapy, and p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK)-mediated apoptosis. Current knowledge on the regulation of IL-24 expression is sparse. Previous studies have suggested that mRNA stabilization is of major importance to IL-24 expression. Yet, the mechanisms responsible for the regulation of IL-24 mRNA stability remain unidentified. As p38 MAPK is known to regulate gene expression by interfering with mRNA degradation we examined the role of p38 MAPK in the regulation of IL-24 gene expression in cultured normal human keratinocytes.

Methodology/Principal Findings

In the present study we show that anisomycin- and IL-1β- induced IL-24 expression is strongly dependent on p38 MAPK activation. Studies of IL-24 mRNA stability in anisomycin-treated keratinocytes reveal that the p38 MAPK inhibitor SB 202190 accelerates IL-24 mRNA decay suggesting p38 MAPK to regulate IL-24 expression by mRNA-stabilizing mechanisms. The insertion of the 3′ untranslated region (UTR) of IL-24 mRNA in a tet-off reporter construct induces degradation of the reporter mRNA. The observed mRNA degradation is markedly reduced when a constitutively active mutant of MAPK kinase 6 (MKK6), which selectively activates p38 MAPK, is co-expressed.

Conclusions/Significance

Taken together, we here report p38 MAPK as a regulator of IL-24 expression and determine interference with destabilization mediated by the 3′ UTR of IL-24 mRNA as mode of action. As discussed in the present work these findings have important implications for our understanding of IL-24 as a tumor suppressor protein as well as an immune modulating cytokine.     

miR-9-5p靶向Ambra1促进舌癌细胞增殖

miRNAs在肿瘤中异常表达,且与肿瘤的发生发展密切相关。目前发现,miR-9-5p在肿瘤中可能发挥原癌或抑癌效应,功能尚未完全阐述清楚。本文拟探讨miR-9-5p在舌癌中的作用。前期研究中收集10例舌癌组织及配对的癌旁组织,实时荧光定量PCR技术检测后发现,miR-9-5p在舌癌组织中的表达量显著高于癌旁组织,且其在舌癌细胞中的表达量也明显高于正常舌上皮细胞。此外,在舌癌细胞Tca8113中过表达miR-9-5p显著增加细胞的增殖能力。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验证实,miR-9-5p可直接结合在自噬/苄氯素1调节因子1（activating molecule in beclin1-regulated autophagy, Ambra1）的 3′-UTR区域,靶向抑制Ambra1表达。Western印迹结果证实过表达miR-9-5p降低Ambra1的表达,反之亦然。Ambra1在舌癌细胞中的表达量显著低于正常舌上皮细胞。BrdU实验证实在舌癌细胞SCC-25中过表达Ambra1可显著抑制其增殖能力;相反,使用siRNA技术沉默Ambra1能够显著促进Tca8113细胞的增殖。在干预miR-9-5p的细胞中同时干预Ambra1的表达,结果发现Ambra1可显著逆转miR-9-5p对舌癌细胞增殖的促进作用。总之,miR-9-5p在舌癌中可能发挥原癌基因样作用,通过直接靶向抑制Ambra1表达进而促进舌癌细胞发生增殖。     

miR-9-5p靶向抑制Ambra1促进舌癌细胞增殖

miRNAs在肿瘤中异常表达,且与肿瘤的发生发展密切相关。目前发现,miR-9-5p在肿瘤中可能发挥原癌或抑癌效应,功能尚未完全阐述清楚。本文拟探讨miR-9-5p在舌癌中的作用。前期研究中收集10例舌癌组织及配对的癌旁组织,实时荧光定量PCR技术检测后发现,miR-9-5p在舌癌组织中的表达量显著高于癌旁组织,且其在舌癌细胞中的表达量也明显高于正常舌上皮细胞。此外,在舌癌细胞Tca8113中过表达miR-9-5p显著增加细胞的增殖能力。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验证实,miR-9-5p可直接结合在自噬/苄氯素1调节因子1(activating molecule in beclin1-regulated autophagy,Ambra1)的3'-UTR区域,靶向抑制Ambra1表达。Western印迹结果证实过表达miR-9-5p降低Ambra1的表达,反之亦然。Ambra1在舌癌细胞中的表达量显著低于正常舌上皮细胞。Brd U实验证实在舌癌细胞SCC-25中过表达Ambra1可显著抑制其增殖能力;相反,使用siRNA技术沉默Ambra1能够显著促进Tca8113细胞的增殖。在干预miR-9-5p的细胞中同时干预Ambra1的表达,结果发现Ambra1可显著逆转miR-9-5p对舌癌细胞增殖的促进作用。总之,miR-9-5p在舌癌中可能发挥原癌基因样作用,通过直接靶向抑制Ambra1表达进而促进舌癌细胞发生增殖。     

9;21相互易位携带者生育多例9p部分三体患者细胞遗传学分析

在河南南阳收集到一个家系4代23人, 其中6人患先天性智力障碍, 具有轻度的面部和小母指畸形等特点, 先证者伴随有癫痫的发生。采用常规的外周血培养染色体G带分析, 发现先证者的核型为：46, XY, der(21) t(9; 21) (9p22.2; 21q22.3)pat, 是部分9p三体。对该家系其他成员的染色体进行分析, 发现所有患者均为部分9p三体, 异常染色体均来自9号与21号染色体平衡易位携带者染色体相互易位的异常分离, 因此这是一个部分9p三体综合征家系。而重复区段发生在9号染色体短臂远端一半区域(9pter→9p21)内, 该区是关键区, 导致智力障碍和面容轻微畸形。     

糖皮质激素与炎症因子对应急时相反应蛋白SIP24/24p3的协同调控作用及其意义

小鼠应急时相反应蛋白SIP24／24p3有抗炎症和特异性诱导白细胞凋亡的功能,其在体内的表达是高度特异性的。为研究SIP24／24p3的调控因子及机制,我们在小鼠Balb／c3T3和BNL细胞培养中通过灵敏的弱S代谢标记方法检测SIP24／24p3蛋白的表达水平,定量观测分析了糖皮质激素化合物dexamethasone对SIP24／24p3的诱导作用及其与炎症因子白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的协同调控作用。结果显示：(1)在Balb／c3T3和BNL细胞中,dexamethasone对SIP24／24p3都有明显诱导作用,这种诱导作用在BNL细胞中尤其显著;(2)在Balb／c3T3和BNL细胞中dexamethasone与IL-6协同诱导SIP24／24p3;(3)在Balb／c 3T3细胞中dexamethasone与TNF-α对SIP24／24p3有协同诱导效应,而在BNL细胞中dexamethasone与TNF-α对SIP24／24p3的诱导表现为相加效应;(4)在Balb／c3T3和BNL细胞中dexamethasone与IL-6／TNF-α对SIP24／24p3的诱导分别表现出协同和相加效应。多种因子对SIP24／24p3的协同诱导调控有助于阐明其在体内的高度特异表达及机制,SIP24／24p3在不同细胞中的不同表达格局也对体内应急时相反应蛋白在肝脏外和肝脏内的表达方式及诱导机制有提示作用。SIP24／24p3能同时被炎症因子和抗炎症因子诱导的事实显示了其在炎症全过程中的重要作用。