大肠杆菌K-12转醛醇酶基因talB的克隆及在运动发酵单胞菌CP4中的表达

研究了E.coliK-12转醛醇酶基因(talB)在自身启动子和在Z.mobilisCP4eno基因启动子的启动下在E.coliDH5α和Z.mobilisCP4中的表达情况。首先克隆了E.coliK-12talB基因,并连接到穿梭载体pZB1上构建成pZB1-talB;然后利用PCR重叠延伸技术将E.coliK-12talB自身的启动子换成Z.mobilisCP4eno的启动子,构建得到pZB1-Peno-talB。将这两个质粒分别转化E.coliDH5α和Z.mobilisCP4。对转化子粗酶液进行的转醛醇酶酶活力测定结果表明,E.coli talB自身启动子和Z.mobilis eno启动子能以基本相同的效率启动talB基因在E.coli和Z.mobilis中的表达。     

大肠杆菌转酮醇酶分子改造及催化酒石酸半醛合成

转酮醇酶(transketolase, TK, EC. 2.2.1.1)是一种焦磷酸硫胺素和二价阳离子依赖性酶,可催化二碳单位的转移,可逆形成C–C键,在多酶催化生产化学品、药物前体和不对称合成方面有广泛应用。文中以大肠杆菌(Escherichia coli) K12转酮醇酶TKTA为研究对象,通过定点饱和突变和组合突变提升对非磷酸化底物的反应活性,并探索突变酶TKTA＿M催化合成酒石酸半醛。结果表明：突变酶TKTA＿M (R358I/H461S/R520Q)最适反应温度为32℃,最适反应pH为7.0,以D-甘油醛为受体底物的比酶活为(6.57±0.14) U/mg,是野生型比酶活((0.71±0.02) U/mg)的9.25倍。在酶学性质研究的基础上,设计20 mL的反应体系,以50 mmol/L 5-酮基-D-葡萄糖酸和50 mmol/L非磷酸化乙醇醛为底物,TKTA＿M催化合成酒石酸半醛,最终酒石酸半醛的产量为3.71g,摩尔转化率为55.34%。研究结果为生物质制备L-(+)-酒石酸提供数据支撑,同时为转酮醇酶催化非磷酸化底物提供了借鉴。     

组织型转谷氨酰胺酶的研究进展

组织型转谷氨酰胺酶（tissue transglutaminase,tTG,TGⅡ）是转谷氨酰胺酶家族成员之一,作为一种多功能的蛋白质,具有催化蛋白质谷氨酰胺残基与赖氨酸残基交联的活性,还能结合和水解GTP,在胞内和胞外产生多种功能,最初由于tTG在细胞凋亡中所起的重要作用而受到研究者的关注,最近的研究更表明它在细胞分化,基质的稳定、伤口愈合、信号转导、动物发育等许多生理和病理过程中起着重要作用,因而受到越来越多的研究。     

磷酸化对人肝癌细胞株SMMC-7721转醛醇酶活性的影响

目的:研究人肝癌细胞株SMMC-7721中转醛醇酶(Transaldolase,TAL)活性变化与磷酸化的关系。方法:SMMC-7721细胞培养,细胞周期同步化后分组加不同浓度(10%、1%)胎牛血清孵育,分别测定不同孵育时间(1、2、4、8h)TAL酶活性;Western blot检测TAL蛋白表达水平。磷酸酶消化法检测TAL活性变化与磷酸化的关系。结果:①人肝癌细胞株SMMC-7721中TAL活性在10%胎牛血清培养时明显高于1%胎牛血清,2、4、8h显著性差异(P<0.05)。②不同浓度(10%.1%)胎牛血清孵育2、4、8hTAL蛋白表达水平无显著性差异。③磷酸化消化后TAL活性,与消化前相比呈显著性下降。结论:人肝癌细胞株SMMC-7721中增加血清浓度明显提高TAL活性,酶活性变化与TAL蛋白表达水平无关,提示活性调节发生在蛋白翻译后修饰,其中磷酸化起重要作用。     

转酮醇酶及其工业应用

转酮醇酶是磷酸戊糖途径的关键酶,催化二碳单元在酮糖（供体）和醛糖（受体）间的转移。本文综述了该酶的工业生产及应用领域,如乙醇生产,芳香族氨基酸和手性物质的生物合成等。     

转谷氨酰胺酶基因在大肠杆菌中的克隆表达

从轮枝链霉菌Streptoverticilliummobaraense细胞中获得其基因组DNA ,用一对特异性的引物通过PCR的方法扩增出转谷氨酰胺酶 (transglutaminase,TGase)全长基因 ,回收片段并将其连接到表达载体pET30a中 ,转化大肠杆菌DH5α。双向测序表明获得的转谷氨酰胺酶全长基因序列正确。纯化重组质粒转化大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,以 1mmol/LIPTG诱导 5h收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析 ,与阴性对照相比 ,明显多出了一条蛋白条带 ,紫外扫描显示此带约占总蛋白量的1 7% ,Westernblotting证实此带能够特异性地与兔抗MTG(味之素公司 )的抗体发生反应。测得纯化后得到的TGase蛋白的酶活可以达到 15.1U/mg蛋白。     

组织型转谷氨酰胺酶与肾脏纤维化

组织型转谷氨酰胺酶(tTG)是一个Ca2 依赖的具有转酰胺基作用的酶,它分布广泛,在许多生理和病理条件下发挥重要作用。近年来它参与组织纤维化的作用逐渐引起重视。tTG分泌到细胞外能够使很多细胞外基质蛋白成分之间发生交联,形成牢固结构,抵抗降解,从而促使细胞外基质沉积,促进组织纤维化发展。本文简要叙述tTG的分子特征和生理及病理学意义,并着重介绍tTG和肾脏纤维化的联系。     

LncRNA GCMA在近远端胃癌组织中表达及对癌细胞的凋亡作用

[目的]探讨LncRNA GCMA在近远端胃癌组织中的表达及对胃癌细胞的凋亡作用.[方法]检测近远端胃癌组织和癌旁正常组织LncRNA GCMA的表达;用空白质粒、LncRNA GCMA抑制剂、过表达的LncRNA GCMA质粒转染胃癌AGS细胞,RT-PCR法、TUNEL染色法检测胃癌细胞凋亡率,Western Bl...     

反义bcl—2在胃癌细胞中的诱导表达及促凋亡作用

为了观察ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ对胃癌细胞ＳＧＣ７９０１的促凋亡作用及ＭＴ－１１启动子的启动诱导活性,用分子克隆方法构建载体,以电泳术,电镜术,流式细胞术,原位杂交,裸鼠肿瘤抑制试验及化学发光分析等方法观察,结果表明,可诱导载体ｐＭＴｂＮ具有良好的诱导启动转录活性,Ｂｃｌ－２蛋白的表达下降使胃癌细胞ＳＧＣ７９０１更易发生凋亡,致瘤性也发生改变。     

中国木薯醇腈酶在汉逊酵母中的表达

α-醇腈酶(α-hydroxynitrilelyase, HNL)是手性醇腈化合物生物合成十分有用的工具, 能够催化羰基化合物和HCN立体选择性的加工形成手性醇腈化合物。应用PCR扩增得到HNL基因, 连接到pMD18-T 中进行测序, 然后通过EcoRⅠ和NotⅠ将其连接到汉逊酵母表达载体pHMOXGαA中。通过在含有4 mg/mL的G418的YPD培养基上进行筛选获得阳性重组子, 用0.5%的甲醇诱导96 h。酶活测定和SDS-PAGE分析显示HNL在汉逊酵母NCYC495(leu1.1)中得到正确表达, 每毫升发酵液中获得2.015 U的醇腈酶。     

胃癌组织中Bmi-1基因表达的研究

目的：多梳基因家族的Bmi．1被认为是一种癌基因,在多种肿瘤组织中均有表达。本研究主要是检测Bmi-1基因在胃癌组织中的表达及探讨其临床意义。方法：应用RT—PCR和Westernblotting方法检测45例胃癌中Bmi-1基因的表达情况,并结合患者的临床病理资料分析与其相关性。结果：Bmi-1基因阳性表达率在胃癌中为88．9％（40／45）,癌旁组织为17．7％（8／45）,差异有显著性（P〈0．05）;Bmi-1基因阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小及有无淋巴结转移无关,与肿瘤分化程度及TNM分期有关（P〈0．05）。结论：Bmi-1基因在胃癌中高表达,与胃癌的疾病进展密切相关,检测Bmi-1的表达可作为胃癌生物学行为的一项评估指标。     

Ran 在胃癌中的表达及其临床意义

目的:利用免疫组织化学的方法探讨小G蛋白Ran在胃癌中的表达及临床意义。方法:利用免疫组织化学染色法研究74例胃癌组织标本(其中高分化25例,中分化24例,低分化25例)及其毗邻正常组织中Ran的表达情况,并分析该蛋白表达水平与临床病理参数之间的关联。结果:(1)Ran在胃癌组织中的染色强度明显高于正常组织。(2)在癌组织中Ran表达于胞核和胞浆,其中又以胞核为主,在正常组织中Ran主要表达于胞浆。(3)Ran的表达与患者年龄、性别无相关性(0.464、0.912),与肿瘤分化、TNM分期和转移与否有显著相关性(0.001、<0.001、<0.001)。结论:与正常组织相比,Ran在胃癌组织中的表达显著增高,并且与肿瘤分化和病理分期存在显著正相关,其可能作为胃癌新的分子标志物,在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。     

胃癌组织中Bmi-1基因表达的研究

目的:多梳基因家族的Bmi-1被认为是一种癌基因,在多种肿瘤组织中均有表达。本研究主要是检测Bmi-1基因在胃癌组织中的表达及探讨其临床意义。方法:应用RT-PCR和Western blotting方法检测45例胃癌中Bmi-1基因的表达情况,并结合患者的临床病理资料分析与其相关性。结果:Bmi-1基因阳性表达率在胃癌中为88.9%(40/45),癌旁组织为17.7%(8/45),差异有显著性(P<0.05);Bmi-1基因阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小及有无淋巴结转移无关,与肿瘤分化程度及TNM分期有关(P<0.05)结论:Bmi-1基因在胃癌中高表达,与胃癌的疾病进展密切相关,检测Bmi-1的表达可作为胃癌生物学行为的一项评估指标。     

Mina53在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨mina53基因在胃癌组织中的表达及其与临床分期的相关性.方法:分别应用RT-PCR和免疫组化技术,检测71例胃癌患者组织标本以及20例癌旁组织中mina53基因和蛋白的表达水平,并分析其与胃癌临床分期的相关性.结果:(1)RT-PCR结果显示20例癌旁组织中仅2例mina53基因呈弱阳性表达,阳性率为10.00％;71例胃癌组织标本中有43例mina53基因表达阳性,阳性率为60.56％ (P＜0.05);其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织标本中的阳性比例分别为11/23、15/29、12/14及5/5(P＜0.05).(2)免疫组化结果显示20例癌旁组织中仅3例mina53蛋白呈弱阳性表达,阳性率为15.00％;71例胃癌组织标本中有35例mina53蛋白表达阳性,阳性率为49.30％(P＜0.05);其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期胃癌组织标本中的阳性比例分别为7/23、13/29、11/14及4/5 (P＜0.05).结论:与癌旁组织相比,mina53在胃癌中的基因和蛋白水平存在高表达,并且随肿瘤分期的进展而表达量增高,检测mina53表达水平有助于胃癌早期诊断和预测肿瘤的侵袭程度.     

胃癌组织中MMP-7和TIMP-1的表达及意义

目的:探讨基质金属蛋白酶-7(MMP-7)及其组织抑制剂-1(TIMP-1)与胃癌发生发展的关系.方法:采用免疫组化技术检测46例胃癌组织和相应癌旁组织中MMP-7和TIMP-1的表达,结合病人临床病理资料进行综合分析.结果:胃癌组织中MMP-7阳性表达率(60.87%)显著高于相应癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);其表达与淋巴结转移(P<0.05)相关.胃癌组织中TIMP-1的阳性表达率(93.48%)明显高于相应癌旁组织(63.04%),差异有统计学意义(P<0.05);其表达与淋巴结转移相关(P<0.05).结论:MMP-7与胃癌的侵袭转移有关,TIMP-1有可能成为评价胃癌恶性生物学行为的指标.     

胃癌组织中COX-2和nm23的表达及意义

目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)和nm23蛋白在胃癌组织中的表达及意义.方法:应用免疫组化方法检测了52胃癌组织及20正常胃黏膜中COX-2和nm23的表达,并在显微镜下计数阳性细胞数,统计比较胃癌组织和正常组织中COX-2和nm23的阳性表达率.结果:COX-2蛋白在胃癌组织和正常胃黏膜组织中阳性表达率分别为67.3%和5.0%,胃癌组织中COX-2蛋白阳性率显著高于正常胃黏膜(P＜0.01).nm23蛋白在胃癌组织和正常胃黏膜组织中阳性表达率分别为30.7%和75.0%,胃癌组织中nm23蛋白阳性率显著低于正常胃黏膜(P＜0.01).COX-2的异常表达与肿瘤细胞分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期显著相关(P＜0.05).nm23阳性表达率与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期显著相关(P＜0.05),而与肿瘤细胞分化程度无显著性相关(P＞0.05).结论:COX-2与nm23表达与胃癌的临床病理特征密切相关.COX-2与nm23可作为反映胃癌侵袭转移、判断预后的生物学指标.     

S100A11的表达及其与胃癌的关系

目的:探讨S100A11在胃癌和正常胃粘膜组织中的表达及意义.方法:采用RT-PCR和Western Blot技术检测21对配对胃癌组织和正常胃粘膜组织中S100A11的表达情况.结果:胃癌组织S100A11 mRNA的表达量(1.26±0.03)高于正常胃癌粘膜组织中的表达量(0.75±0.04),两组比较差异有统计学意义(p＜0.05).S100A11蛋白在胃癌组织中的表达量(0.94±0.05)明显高于在正常胃粘膜组织中的表达量(0.39±0.05),两组比较差异有统计学意义(p＜0.05).结论:S100A11在胃癌组织中的表达量明显高于正常组织,提示其与胃癌的发生和发展有关.     

TACC1及TFF3在胃癌组织中的表达及其临床意义(英文)

目的:探讨转化酸性卷曲螺旋蛋白1(TACC1)和肠三叶因子(TFF3)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化方法检测胃癌组织中TACC1及TFF3的表达情况。采用x2检验、乘积极限法及单因素、多因素生存分析等统计学方法,分析胃癌组织中TACC1及TFF3的表达与患者临床病理参数及预后的关系。结果:TACC1和TFF3在进展期胃癌、有淋巴结转移及复发的胃癌组织中的表达率较高。此外,TFF3在较大肿瘤(肿瘤大小4 cm)的胃癌组织中的表达较高。单因素生存分析显示年龄、淋巴结转移、TACC1和TFF3表达与低生存期显著相关(P0.05)。多因素分析结果表明,TACC1和TFF3的表达是独立的预后预测因子。结论:TACC1和TFF3的表达可以作为胃癌的独立不良预后因子,而且在胃癌组织中TACC1和TFF3共同表达的患者生存时间更短。