产抑菌物质SDLH菌株的鉴定及发酵产物稳定性研究

目的：对1株产抑菌物质的中华稻蝗内生菌SDLH进行鉴定,并对其发酵产物稳定性进行研究。方法：通过观察生长情况及菌落特征形态学、氨基酸利用、糖发酵、脱羧酶反应生理等生化检测以及16S rDNA序列测定对菌株SDLH进行分类鉴定,并在不同条件（温度、pH、光照等）下测定其发酵产物的抑菌稳定性。结果：菌株SDLH符合肠杆菌科细菌的一般特征;生理生化特征均与Serratia marcescens的特征基本一致;菌株SDLH的16S rDNA序列长度为1 457bp。Gene bank序列登录号为EU525929。其序列在1 457bp范围内与已知的模式菌株粘质沙雷氏菌（AB244291.1）16S rDNA序列部分有100%的相似性。其发酵产物在温度（40℃~60℃）下抑菌活性稳定,在高温（≥80℃）下失去活性;在酸性条件（3≤pH〈7）下,抑菌活性无明显变化,在碱性条件（pH≥10）下,抑菌活性下降;光照2~6h后抑菌活性下降。结论：菌株SDLH属于沙雷氏菌属（Serratia）粘质沙雷氏菌（Serratia marces-cens）,其发酵产物具有较强稳定性,可置避光、pH中性、常温环境中短期保存,经提高活性、纯化等处理后可能作为新型天然防腐剂应用于食品领域。     

新疆地区盐湖的中度嗜盐菌16S rDNA全序列及DNA同源性分析

通过数值分类和16S rDNA PCR-RFLP分析,对分离自新疆地区的中度嗜盐革兰氏阴性菌进行研究,发现了一个新类群。在此基础上,进行了中心株AI－3的16S rDNA全序列分析,并与中度嗜盐菌已知种和相关种进行比较,得到系统发育树状图。在此树状图中,大多数参比菌株聚在一起,其16S rDNA全序列的同源性在96％以上,而AI－3与参比菌株的16S rDNA全序列相比,其相似性低于75％。但是,AI－3与Alcanivorax borkumensis^[1]的16S rDNA全序列的相似性为96％,与Halobacillus litoralis的16S rDNA全序列的相似性为99％,三者构成一个独立的发育分支。这说明在系统发育上,AI－3与参比菌株属于不同的分支,是一个新的类群。在新类群内,菌株之间的DNA同源性大于70％,而中心株AI－3与标准菌株伸长盐单胞菌（Halomonas elongata)的DNA同源性为44％,表明新分离的菌株可能构成一个新种群。     

16S rDNA序列分析在鉴定布鲁氏菌中的应用

[目的]建立布鲁氏菌的16S rDNA序列分析方法,评价该方法鉴定布鲁氏菌的特异性和实用性.[方法]用PCR扩增布鲁氏菌的16S rDNA片段,将扩增的产物纯化后测序,从GenBank下载与布鲁氏菌易发生血清学交叉反应的细菌的16S rDNA序列.使用DNAMAN软件进16S rDNA序列相似性分析.[结果]在布鲁氏菌中16S rDNA核苷酸序列相似性达到了99.74％,而与其他有血清型交叉反应的菌株相比较,16S rDNA序列间有显著差异.[结论]16S rDNA序列分析是一种快速、简便、特异的鉴定布鲁氏菌的方法之一.     

高产壳聚糖酶菌株的筛选及分类鉴定

目的：筛选一株高产壳聚糖酶的菌株。方法：通过形态学、生理生化及16S rDNA序列测定,对菌株进行分类鉴定。在培养基中以壳聚糖为唯一碳源,对长白山天池边的土样进行筛选。结果：获得一株产壳聚糖酶活力较高的菌株,最大酶活力达0．325U／ml。结论：经16S rDNA序列比对,该菌株与Beta proteobacterium的同源性高达99％。结合《伯杰细菌鉴定手册》（第九版）,将该菌株鉴定为Beta proteobacterium属的一个种,定名为Beta proteobacterium sp．T1。     

纤溶酶产生菌—藤黄微球菌的筛选、鉴定及纤溶酶基因的克隆

通过血粉培养基富集、纤维蛋白培养基筛选,从自然环境中分离到一株纤溶酶产生菌,命名为ML909.利用传统细菌分类鉴定方法对其形态和生理生化特征进行了研究,发现其与藤黄微球菌的特征相符,16S rDNA序列分析的结果也表明它与藤黄微球菌的16S rDNA序列的同源性高达99%,因此该茵在系统分类学上属于微球茵属(Micrococcus Cohn)藤黄微球菌(Micrococcus luteus).通过PCR方法对其纤溶酶的编码区序列进行了克隆和序列分析,基因登录GenBank,登录号为EU232121.     

一株种内拮抗的海洋枯草芽孢杆菌的分离与鉴定

从中国东海海域筛选到好氧耐盐菌株A01,此菌株显示出抗枯草芽孢杆菌和白色念珠菌的活性采取对该菌株形态特征、培养特征、生理生化特征和遗传特性进行研究的方法,结果表明此菌株与枯草芽孢仟菌（Bacillus subitilis）的特征一致;将此菌株的16S rDNA序列在GenBank中进行序列比对,结果亦显示其与Bacillus subitilis的16SrDNA的序列片段的相似性为100％;以相似性为基础构建系统发育树,分析表明该菌株与Bacillus subitilis同源关系最近最终得出结论为菌株A01是一株来源于海洋的枯草芽孢杆菌,且具有种内拮抗的特性。     

四株抗荔枝病原菌的芽孢杆菌的分离鉴定

荔枝果树根际土壤中筛选出4株芽孢杆菌OR-1、OR-2、OR-3、ON-6,都显示出抗荔枝病原菌的活性。采取对该菌株形态特征、培养特征、生理生化特征和遗传特性进行研究的方法,结果表明菌株与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的特征一致;将4菌株的16S rDNA序列在GenBank中进行序列比对,结果亦显示其与Bacillus subtilis的16S rDNA的序列片段的相似性均达99%以上;以相似性为基础构建系统进化树,分析表明菌株与Bacillus subtilis同源关系最近。最终得出结论为菌株OR-1、OR-2、OR-3、ON-6为枯草芽孢杆菌。     

水浮莲中-株西瓜枯萎病拮抗菌的分离、筛选及鉴定

从水浮莲(Pistia stratiotes L.)的叶中分离出1株对西瓜枯萎病有明显拮抗作用的内生细菌XJPL-YB-26,其发酵液上清在280 nm处有最大紫外吸收峰.利用软件Primer 6.0设计16S rDNA引物并对其基因组DNA进行扩增并测序得到XJPL-YB-26的部分16S rDNA序列.GenBank接收号为EU251191.经 Blastn调出与菌株16S rDNA同源的序列,并用软件MEGA 3.1按Neighbor-Joining方法构建16S rDNA系统发育树.菌株XJPL-YB-26与AB271744处于同一分支,相似性为99%,最终鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.     

芦笋老茎堆肥中嗜热细菌的分离与鉴定

利用稀释涂布法对芦笋老茎堆肥不同发酵阶段6个样品中的嗜热细菌进行分离,并采用16S rDNA序列分析方法对分离得到的菌落形态有明显区别的22株细菌进行鉴定.根据16S rDNA序列分析结果,22株细菌菌株中13株属于芽胞杆菌属(Bacillus),1株属于类芽胞杆菌属(Paenibacillus),4株属于假黄色单胞菌属(Pseudoxanthomonas),1株属于肠杆菌属(Enterobacter),1株属于副球菌属(Paracoccus),1株属于短芽胞杆菌属(Brevibacillus),菌株D-b2在GenBank数据库中未找到与其相似的已知细菌属的序列,分类地位待定.从以上鉴定结果可以看出,芦笋老茎堆肥中的优势嗜热细菌主要是芽胞杆菌(Bacillus spp.)和假黄色单胞菌(Pseudoxanthomonas spp.).     

斑点叉尾(鱼回)一株致病菌的分离鉴定及系统发育分析

从发生急性流行性传染病的斑点叉尾NFDA5肝、肾分离到一高致病性的菌株（CCF00024）,经人工感染实验证实其为该病的病原菌。对该菌的形态、生理生化及16S rDNA序列分析结果表明,其为非发酵型,严格需氧,革兰氏阴性杆菌,极生多鞭毛,对除麦芽糖和甘露糖以外的多种糖类不能利用产酸,氧化酶阴性,DNA酶、蛋白酶、脲酶、赖氨酸脱羧酶阳性,MR阴性。在以该菌16S rDNA序列（GenBank登录号AY970826）和GenBank及RDP数据库内同源性较高的细菌16S rDNA序列构建的系统发育树中,分离菌CCF00024与嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）聚在一簇,特别是与S. maltophilia M51的同源性最高,其序列相似性达99.6%,结合形态和生理生化特点将其鉴定为嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）。     

一株纤维蛋白溶解酶产生菌的鉴定及其产酶条件初步研究

从亚洲传统发酵食品--虾酱中筛选到一株产纤维蛋白溶解酶能力较强的菌株,通过形态和常规生理生化性质鉴定,发现该菌株与芽孢杆菌属细菌的特征很相近,结合16S rDNA序列分析,构建系统发育树,确定其分类地位,由中国典型培养物保藏中心定名为Bacillus sp.nov.SK006(CCTCC No.M 205071),并优化了发酵培养基组成及培养条件,本研究为该菌株的深入研究和广泛应用提供了理论依据.     

一株以甘油为底物产二羟丙酮(DHA)微生物菌种的筛选及鉴定

甘油为微生物可利用的理想碳源,从自然界筛选出21株以甘油为唯一碳源产二羟丙酮（DHA）的菌株,经初步发酵测定发酵液中DHA含量,其中菌株6-8DHA产量最高达6.4g／L。对其进行常规生理生化鉴定实验,并结合16S rDNA基因分析,比对结果表明,菌株6-8与Acinetobacter sp.相似性最高,达99．7％,在细菌分类学上属于假单胞茵目莫拉茵科不动杆菌属。将其命名为Acinetobactersp.6-8。     

一株以甘油为底物产二羟丙酮(DHA)微生物菌种的筛选及鉴定

甘油为微生物可利用的理想碳源, 从自然界筛选出21株以甘油为唯一碳源产二羟丙酮(DHA)的菌株, 经初步发酵测定发酵液中DHA含量, 其中菌株6-8 DHA产量最高达6.4 g/L。对其进行常规生理生化鉴定实验, 并结合16S rDNA基因分析, 比对结果表明, 菌株6-8与Acinetobacter sp. 相似性最高, 达99.7%, 在细菌分类学上属于假单胞菌目莫拉菌科不动杆菌属。将其命名为Acinetobacter sp.6-8。     

Rhodanobacter fulvus sp. nov., a beta-galactosidase-producing gammaproteobacterium

A taxonomic study was carried out on a bacterial strain designated as Jip2T isolated from a soil sample mixed with rotten rice straw. It was a Gram-negative, aerobic, motile, and rod-shaped bacterium. It grew well on nutrient agar medium and utilized a fairly narrow spectrum of carbon source. The G+C content of the genomic DNA was 65.3 mol%. The major ubiquinone was Q-8. The major fatty acids were branched fatty acids, especially large amounts of iso C15:0 and iso C17:1 w9c were detected in the cells grown on TSA agar for 24 h. Comparative 16S rDNA study showed a clear affiliation of this bacterium to the genus Rhodanobacter. The 16S rDNA sequence of strain Jip2T showed 96.4% sequence similarity to that of Rhodanobacter lindaniclasticus RP5575T. On the basis of phenotypic characteristics and 16S rDNA sequence analysis, strain Jip2T is clearly distinct from Rhodanobacter lindaniclasticus. We propose the name Rhodanobacter fulvus sp. nov. for strain Jip2T (=IAM 15025T=KCTC 12098T).     

一株高产木聚糖酶的枝链霉菌的分离鉴定及产酶

对1株高产木聚糖酶的链霉菌进行了鉴定并研究其木聚糖酶的生产过程及水解产物特点。分离得到1株产木聚糖酶的链霉菌Streptomyces sp.L2001,从形态学特征、培养特征和生理生化特征等方面对该菌株进行了鉴定。PCR扩增得到16S rDNA序列全长为1429bp,分析结果表明,菌株与Streptomyces rameus NBRC3782同源性达99.16%。结合传统生理生化实验结果鉴定为枝链霉菌。菌株液体发酵6d能产生842.0U/mL木聚糖酶活力。经HPLC分析酶解产物,结果显示木二糖、木三糖及木四糖含量之和高达93.5%,该酶适用于工业化生产低聚木糖。     

一株以葡萄糖为底物产2,3-丁二醇微生物菌株的筛选及鉴定

从自然界中筛选出一批以葡萄糖为底物发酵产2,3-丁二醇的菌株,经初步发酵测定发酵液中2,3-丁二醇含量,其中菌株6-7的2,3-丁二醇产量最高达49.6g/L。对其进行常规生理生化鉴定实验,并结合16SrDNA序列分析,比对结果表明,菌株6-7与Bacillus subtilis strain BIHB332相似性达99%。在细菌分类学上属于枯草芽孢杆菌属,将其命名为Bacillussubtilis6-7。其特点是属于环境友好和食品安全型菌株,因此,利用Bacillus subtilis6-7生产2,3-丁二醇具有良好的工业应用价值。     

一株番茄青枯菌拮抗菌的鉴定及抗病效果初探

从形态、生理生化、16S rDNA3个方面确定了番茄青枯菌拮抗菌株3-1-16的分类地位。光学显微镜下观察到菌体为杆状细胞,革兰氏染色均匀,并可见菌体染成蓝紫色。透射电镜进一步观察到细胞内有许多颗粒状物质,无伴胞晶体。Biolog鉴定,3-1-16与巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)具有最高相似率为98%。16S rRNA分析,3-1-16与巨大芽孢杆菌MO31同源性最高为99.4%。聚类分析显示3-1-16与3株巨大芽孢杆菌聚成一支,支持度为100%。生理生化特征及培养特征测定结果表明,菌株3-1-16鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。盆栽试验表明该菌株对番茄青枯病防病效果达到81.3%。     

一株产红色素菌株及对其红色素结构的鉴定

从土壤中分离到一株产红色素的细菌H31,根据该菌株的16S rDNA序列与GenBank中已有序列比对的结果,并结合菌落形态和常规生理生化鉴定方法对该菌株进行鉴定,结果表明:该菌在细菌分类学上属于肠杆菌科,其与黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)同源性最高,但该菌株生理生化实验中的赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶以及精氨酸双水解酶实验与报道的S. marcescens的结果不一致,为一株新的黏质沙雷氏菌S. marcescens H31。通过紫外光谱、质谱和核磁共振等方法分析,确定其产生的红色素为灵菌红素。     

1株抗根结线虫红树林放线菌的筛选与鉴定

从红树林底泥中分离筛选具有抗线虫活性的放线菌,并对活性菌株进行分类鉴定。采用稀释平板法分离放线菌,采用24孔板液体筛选模型筛选具有抗线虫活性的菌株,并对活性菌株进行形态学和生理生化特征研究,测定其16S rDNA序列并进行系统发育分析。筛选得到1株具有杀线虫活性的菌株,编号为HA11090,该菌株发酵液在稀释20倍和40倍后,抗根结线虫校正死亡率分别为70.5%和65.0%。菌株HA11090的16S rDNA序列与Saccharopolyspora hirsuta subsp.kobensis和Saccharopolyspora jiangxiensis的相似性最高,分别为99.35%和99.27%,三者在系统发育树上聚为一个分支,形态和生理生化特征分析显示,菌株HA11090与Saccharopolyspora jiangxiensis基本一致,而与S.hirsuta subsp.kobensis差异较大。鉴定菌株HA11090为Saccharopolyspora jiangxiensis,其发酵液具有较强的抗根结线虫活性,值得进一步研究。     

一株硅酸盐细菌的分离及解钾活性研究

目的利用硅酸盐细菌分离培养基,从昆明白泥山土壤样品中分离获得一株硅酸盐细菌——BN1。方法对分离获得的硅酸盐细菌——BM进行革兰染色、生理生化特征和16SrDNA测序分析,并对其解钾活性进行了初步研究。结果BN1初步鉴定为类芽胞杆菌属的菌株。结论该菌株——BN1对云母具有较强的解钾活性,为空白对照组的1．79倍。