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自从发现人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)是引起获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的病原体后,人们对HIV-1与人体相互作用的过程进行了深入研究.通过研究发现了HIV-1与机体相互作用的多种机制,例如HIV-1主要侵犯人体以CD4 T细胞为主的表达其结合表位(如CCR5和CXCR4)的免疫活性细胞[1].目前研究者在正常机体内发现多种物质与HIV-1致病有关.例如APOBEC蛋白(人体内主要为APOBEC3G),当HIV-1侵入机体后,该蛋白表达减少,这一过程在HIV-1的致病过程中发挥重要作用.通过对这些蛋白或分子的研究,进一步揭示了HIV-1的致病机制,为治疗HIV感染/AIDS提供了新思路.同时不同的HIV-1感染细胞模型的构建为AIDS的研究提供了多种工具. 相似文献
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Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)逆转录酶(RT)在抗病毒感染及AIDS治疗药物的设计中是一个重要的靶分子,并且可作为工具酶应用于逆转录PCR等分子生物学研究中。本研究将HIV-1RT基因经PCR扩增并修饰后克隆入大肠杆菌表达载体pBV220,所获重组子所表达的HIV-1RT蛋白占菌体总蛋白的8%左右,且经[~3H]dTTP掺入法证实该重组HIV-1RT具有RT聚合酶活性。用Q-Sepharose层析柱对重组HIV-1RT蛋白进行了初步纯化,所获纯化样品的RT聚合酶比活性(1.7×10~4U/mg)比纯化前的裂解上清提高612倍。 相似文献
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人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核心蛋白(p24)在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
在大肠杆菌中,利用新构建的含T7噬菌体g-10核糖体结合位点(RBS),以及λ噬菌体PR启动子的新型原核表达载体,通过表达gag-pol基因片段,获得了具有天然序列的人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核心蛋白p24(CA)的高效表达。克隆的gag-pol基因片段在其阅读框架移位区域插入了4bp碱基,其表达的病毒蛋白酶在阅读框架上与gag一致,从而实现了对gag-pol融合蛋白的有效加工,产生成熟的核心蛋白p24及其它产物。重组p24以可溶形式存在,可以被抗p24的单克隆抗体特异识别。测定的N-端7个氨基酸序列与从病毒纯化的p24完全一致,在使用硫酸铵沉淀后,采用两步离子柱层析,可将重组蛋白纯化到95%以上的纯度。ELISA分析表明,纯化的p24可以作为特异性很强的试剂而用于HIV感染的诊断及病情的预后,并可用于p24的生化及结构分析。 相似文献
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2001年12月在美国举行的第41届ICAAC年会上公布的研究结果显示,美国78%的成人人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者中存在着对一种或多种抗反转录病毒(ARV)药物耐药的病毒株。其中,对核苷类反转录酶抑制剂(NRTI)的耐药率最高,为…… 相似文献
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HIV-1B亚型gp120基因密码子优化前后免疫原性的比较 总被引:4,自引:0,他引:4
对HIV-1B亚型gp120基因按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行优化,以Westem blot方法比较其体外表达量.将优化前的野生型gp120基因和改造后的modgp120基因插入重组腺伴随病毒载体,构建了重组病毒rAAV-wtgp120和rAAV-modgp120,比较两者免疫Balb/C小鼠后的抗体和CTL应答.Western blot检测结果显示:优化后基因的体外表达量明显高于野生型基因,rAAV-modgp120与rAAV-wtgp120相比可更好地诱导Balb/C小鼠的CTL应答,但检测不到明显的抗体反应.由此得出结论,优化后gp120基因的体外表达量明显高于野生型基因,并且可以诱导更强的特异性CTL应答,但检测不到gp120抗体. 相似文献
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用RNA干扰(RNAi)技术来阻断特定基因的表达,为治疗诸如人类免疫缺陷病毒1型(HIV—1)等慢性病毒感染提供了一种新的手段。虽然,通过小干扰RNA(siRNA)以降解序列特异性的mRNA可选择性地抑制一些在HIV—1复制过程中起关键作用的病毒蛋白,但RNAi技术仍然存在着许多问题亟待解决。本文就HIV—1特异性的RNAi技术作用的潜力和持久性作一研究。 相似文献
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为阐明小鼠IgG2b-Fc对DNA疫苗免疫原性的增强作用,首先构建表达人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)CN54Gag基因的DNA疫苗及表达Gag与小鼠IgG2b-Fc融合基因的DNA疫苗,限制性酶切和DNA测序结果表明这两个疫苗均构建成功,蛋白免疫印迹结果也显示其正确表达。然后,利用上述DNA疫苗接种C57BL/6小鼠,比较两个DNA疫苗所诱导的特异性体液免疫反应和特异性细胞免疫反应。结果显示,融合表达小鼠IgG2b-Fc对特异性细胞免疫和体液免疫反应均有增强作用,但只有对特异性体液免疫反应的增强作用有统计学意义。 相似文献
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在人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者中超过25%表现各种形式的中枢神经系统(CNS)异常症状,研究表明-HIV-1可通过多条途径穿越血-脑屏障。本文侧重于研究HIV-1直接穿越脑组织毛细血管上皮细胞(BMEC)这一途径。鉴于以往研究显示,包括硫酸乙酰肝素蛋白多糖链(HSPG)在内的多种细胞表面分子在HIV-1吸附, 相似文献
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人类免疫缺陷病毒(HIV-1)整合酶抑制剂筛选及其活性测定 总被引:1,自引:0,他引:1
整合酶作用的病毒DNA整合进宿主DNA的过程是反转录病毒在宿主细胞中增殖的关键步骤.由于在正常人类细胞中不存在相似的功能蛋白,其抑制剂对人体的副作用可能很小,相对于经典AIDS治疗药物的毒副作用,整合酶抑制剂理论上要具有优势.在线性七肽库中筛选与整合酶有特异结合作用的噬菌体展示肽,选取TPSHSSR和HPERATL 2条肽,它们可以竞争性地抑制展示相应肽段的噬菌体与整合酶的结合,同时它们对整合酶的整合活性也有一定程度的抑制,半数抑制率分别为IC50=(54.56±5.18)μmol/L,IC50=(28.29±1.32)μmol/L.这些多肽可用于治疗艾滋病新药的开发应用及整合酶结构及作用机制的研究. 相似文献
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构建pMT/BiP/V5-HisA-HIVgp120真核表达载体,通过稳定转染获得稳定表达gp120蛋白的果蝇Schnei-der2(S2)细胞系,并对gp120蛋白进行大量表达和纯化。应用聚合酶链式反应技术从重组载体PVR1012-gp120中扩增出中国流行株CRF07-BCgp120全长基因后,将其插入载体pMT/BiP/V5-HisA。应用脂质体转染技术将真核表达载体和抗性筛选质粒共转染果蝇S2细胞,通过杀稻瘟菌素反复筛选,建立稳定高表达gp120蛋白的果蝇S2细胞系,并通过镍柱亲和层析和分子筛法纯化目的蛋白。用SDS-PAGE对重组蛋白的分子量和纯度进行分析,并通过Western blot和酶联免疫吸附技术(ELISA)对其进行鉴定。成功构建了gp120真核表达载体并获得了稳定转染该蛋白的果蝇S2细胞系,成功的表达了具有良好抗体反应性的gp120全长蛋白。此结果为深入研究HIV包膜蛋白gp120的生物学特性及进行HIV疫苗的研究提供了良好的物质基础。 相似文献
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本研究采用PCR方法从人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)HXB2株tat基因中扩增编码Tat蛋白N末端1-21位氨基酸缺失的突变体Tat22-101基因片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat22-101,经双酶切及测序验证后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达及Ni2+-NTA柱亲和层析纯化。纯化后的突变体融合蛋白PET32a-Tat22-101经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,其相对分子质量约为26.9kD。该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测结果表明,pET32a-Tat22-101融合蛋白不仅较好地保留其免疫原性,而且能诱导产生高滴度的针对Tat N末端区之外的Tat其他功能区表位的抗体,为进一步研究Tat生物学功能和研制新型HIV Tat疫苗奠定试验基础。 相似文献
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人类免疫缺陷病毒1型感染早期合成的Tat不仅是感染细胞中病毒复制所必需,而且感染细胞分泌的细胞外Tat可以诱导靶细胞上该病毒辅助受体的表达,促进病毒的播散,并对不同类型的未感染细胞有多种作用,在艾滋病相关疾病,如卡波济肉瘤、神经紊乱、免疫缺陷等的病理机制中起作用。 相似文献
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为了提高人禽流感病毒血凝素HA的表达量,应对流感大流行疫苗的需求,按照人的偏爱密码子将H5N1(A/Anhui/1/2005)流感病毒的HA基因进行优化改造,经全基因合成后插人到真核表达载体pDC315中,构建了真核表达质粒pDC315-Mod.HA;将此质粒和含野生HA基因的真核表达质粒pDC315-Wt.HA分别转染293T细胞,比较HA蛋白的表达量.结果表明:经间接免疫荧光实验及Western blot实验比较和鉴定,密码子优化后,HA蛋白在293T细胞中的表达水平显著提高,为流感大流行疫苗的研究打下了基础. 相似文献