钙网蛋白及其与肿瘤的关系

钙网蛋白（calreticulin,CRT）是一种普遍存在且高度保守的内质网钙结合蛋白,具有调节钙平衡、协助蛋白质的折叠和加工、参与抗原提呈、血管发生及凋亡的调节等多种生物学功能。最近研究发现,CRT与肿瘤的发生发展、诊断、预后判断以及治疗密切相关。该文介绍钙网蛋白的结构、生物学功能及其与肿瘤的关系。     

重组人钙网蛋白的克隆与原核表达

［摘要］目的: 克隆人钙网蛋白（calreticulin,CRT）并在E.coli中原核表达和纯化。方法：采用RT-PCR 法从人非小细胞肺腺癌A549细胞总RNA中克隆人钙网蛋白cDNA,构建CRT原核表达质粒（pET-15b/CRT）并转化E.coli 的Rossetta菌株。IPTG诱导后,表达蛋白在变性条件下经Ni-NTA 树脂亲和层析纯化,然后透析复性。分别用SDS-PAGE和Western blotting法鉴定CRT表达和纯化状态。结果：从A549细胞总RNA中成功获得人CRT cDNA克隆,重组质粒pET-15b/CRT构建正确。转化pET-15b/CRT的E.coli Rossetta诱导性表达重组人CRT蛋白,该蛋白可经Ni-NTA树脂亲和层析高度纯化。结论：成功建立了CRT原核表达和纯化的实验方法,该方法为后续的CRT蛋白功能研究奠定了基础。     

钙网蛋白在水产动物中的应用研究

钙网蛋白(calreticulin,CRT)不仅是一种主要存在于内质网和肌浆网的可溶性Ca2+结合蛋白,而且在温度、氧气等胁迫、病原以及寄生虫感染等情况下都对细胞起到重要的保护作用。首先解析钙网蛋白的类型、结构与分布,其次分析钙网蛋白在调节细胞内Ca2+平衡、参与机体免疫反应、影响细胞凋亡与血管形成等过程中的生理功能,最后分析钙网蛋白在鱼类、虾类及贝类中的研究。综合分析发现,钙网蛋白可能作为水产养殖中一种分子生物标志物进而反应水产动物的生理状态。     

钙网蛋白的免疫生物学活性研究进展

钙网蛋白(calreticulin,CRT)是内质网中的Ca2+结合蛋白,对维持细胞内的Ca2+稳态具有重要作用。CRT还可作为分子伴侣,帮助新合成的内质网蛋白正确折叠。除此之外,CRT还出现在细胞膜表面及细胞外环境中,并发挥重要的免疫调节作用。膜表面的CRT参与凋亡细胞的清除和抗肿瘤免疫应答,在T细胞活化早期也发挥重要作用。可溶性CRT出现在自身免疫病患者的血清中,且其浓度与疾病活动度相关。重组可溶性CRT腹腔注射可显著影响小鼠的Th1/Th2平衡。重组可溶性CRT分子不仅具有超强免疫刺激活性,还表现出很强的佐剂效应,提示可溶性CRT可能在自身免疫性疾病的发生与发展过程中发挥一定作用。可以预见,CRT分子的免疫生物学活性将在不久的将来成为该领域研究的一个热点。     

钙网蛋白研究进展

钙网蛋白研究进展陈安和（西南师范大学生命科学系,重庆６３０７１５）关键词钙网蛋白钙网蛋白（ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ）是１９７４年命名的骨骼肌肌质网膜上的钙结合蛋白。近年的研究发现,该蛋白质在非肌肉组织中含量丰富,它是内质网（ＥＲ）主要的钙结合蛋白之一...     

钙网蛋白与神经系统病变

钙网蛋白（calreticulin,CRT）是内质网中的一种多功能的分子伴侣,在协助蛋白质正确折叠和维持细胞Ca2＋稳态（Ca2＋信号）中发挥重要作用。近来的研究发现,钙网蛋白与神经系统病变包括阿尔茨海默氏病、帕金森病等有密切关系。     

钙网蛋白在内皮细胞相关疾病中的病理生理作用

心脑血管病、糖尿病和肿瘤等内皮相关疾病严重威胁人类健康。内皮结构与功能的损伤是内皮相关疾病发病机制中至关重要的环节。内质网Ca2+结合蛋白钙网蛋白(calreticulin,CRT)调节内皮细胞增殖、黏附、迁移、凋亡等过程,参与肿瘤、糖尿病、心脑血管病等内皮相关疾病的发生、发展和转归。外源性CRT对肿瘤、眼部新生血管病变、慢性愈合不良性伤口和缺血性疾病具有潜在治疗作用。本文综述钙网蛋白对内皮细胞的调节及其在内皮相关疾病中的病理生理学作用。     

周期性张应力刺激下成肌细胞钙网蛋白的表达及变化

目的：检测成肌细胞钙网蛋白（CRT）在循环拉伸应力刺激下的表达变化。方法：体外构建面颌部成肌细胞力学刺激模型。加力组以0．5赫兹的加载频率和10％细胞拉伸变形幅度对细胞进行加力培养1h,6h,12h,24h,运用实时荧光定量PCR技术跟Westem Blot技术分别检测在周期性张应力作用下成肌细胞CRT在基因水平及蛋白水平的表达变化。结果：当对细胞加力6h后,CRTmRNA及蛋白表达量开始增多,加力12h后CRTmRNA及蛋白表达量到达最多（P〈0．01）,加力0h组与加力12h组之间差异有显著的统计学意义（P〈0．01）。结论：持续的周期性张应力刺激下CRTmRNA及蛋白表达增加。     

糖蛋白折叠质量的监控机制

内质网是一种重要的真核细胞器,糖蛋白的糖基化开始于其中.在内质网中永久性折叠错误糖蛋白或幼稚型糖链糖蛋白,以及突变的糖蛋白被阻止进入高尔基体,而是选择性地被运到胞质,然后在蛋白酶体中被降解.至少两大分子伴侣家族结合蛋白（BiP）和钙联结蛋白（CNX）/钙网蛋白（CRT）参与了糖蛋白折叠的质量控制过程.     

铁皮石斛钙网蛋白基因DoCRT1的分子克隆与表达研究

该研究采用RACE克隆铁皮石斛钙网蛋白(calreticulin,CRT)基因DoCRT1,进行生物信息学分析,并借助定量PCR检测基因表达模式,为揭示该基因在铁皮石斛生长发育及逆境生理中的分子作用奠定基础。结果表明:(1)DoCRT1基因(GenBank登录号KT957551)cDNA全长1 672bp,ORF长1 275bp,编码一条由424个氨基酸组成的多肽,分子量49.05kD,等电点4.42,具有CRT蛋白保守的钙网蛋白/钙联接蛋白P结构域(205~320)和类伴刀豆球蛋白凝集素/葡聚糖酶结构域A(20~222)以及多个基序;蛋白N端含有一个信号肽(1~23)和一个跨膜区域(8~24),预测结果显示主要定位于细胞液泡、胞外,与多种植物CRT蛋白一致性很高(80%~87%)。(2)DoCRT1蛋白与OsCRT1/2、ZmCRT1亲缘关系近,聚在CRT进化树的CRT1/2分支。(3)qRT-PCR检测结果显示,DoCRT1基因转录本在石斛根中表达量较高,为叶中的2.23倍,且茎与叶中表达量无显著差异。