氨甲酰胆碱通过M2毒蕈碱受体增加豚鼠心肌细胞钠钙交换电流

本文旨在研究氨甲酰胆碱(carbachol, CCh)对豚鼠心肌的正性变力性机制。用Axon200A膜片钳放大器观察CCh 对电压钳制下的豚鼠心肌细胞L-型钙电流(ICa)和钠钙交换电流(INa/Ca)的效应。结果表明, CCh(100 μmol/L)分别使正向INa/Ca从对照组的(1.2 ± 0.1) pA/pF 增加到(2.0 ± 0.3) pA/pF,使反向 INa/Ca 从对照组的(1.3 ± 0.5) pA/pF 增加到(2.1 ± 0.8) pA/pF (P<0.01)。CCh对ICa无影响。CCh 对INa/Ca的激动作用可被阿托品和methoctramine所阻断。以上结果提示, CCh 对豚鼠心脏的正性变力作用是通过激动了钠钙交换,而且是 M2 毒蕈碱受体所介导的。     

甲状腺素对大鼠心肌细胞收缩功能及钙瞬变的影响

目的：研究甲状腺素对单个心肌细胞收缩功能及钙瞬变的影响。方法：SD大鼠60只随机分为对照组（30只）、甲状腺素组（30只）。通过给予甲状腺素喂养后,测量血流动力学指标,随后分离单个心室细胞,采用可视化动缘探测系统同步检测大鼠心肌细胞收缩和钙瞬变的变化并与对照组比较。结果：（1）甲状腺素治疗组左室收缩压（LVSP）和最大缩短和复长速率（&#177;dp／dtmax）较对照组明显提高（P〈0．05）,左室舒张末压（LVEDP）较对照组明显下降（P〈0．05）。（2）甲状腺素治疗组单个心肌细胞收缩功能指标最大收缩幅度（PTA）、最大缩短和复长速率（&#177;dL／dtmax）较对照组明显增加（P〈0．05）,钙瞬变指标fura-2荧光强度变化（△FFI）明显增强、Ca2＋离子达峰值时程（TTPCa）、舒张期Ca2＋减少50％时程（T50DCa）较对照组明显缩短（P〈0．05）。结论：甲状腺素可改善大鼠心脏功能并增强单个心肌细胞的收缩功能及钙瞬变幅度,在单细胞水平上为探讨甲状腺素治疗慢性心衰的发生机制提供了实验依据。     

大鼠肥厚心肌细胞钙电流及 Na~ /Ca~(2 )交换电流的研究(英文)

本文观察了心肌肥厚对大鼠心肌细胞Na ／Ca2 交换电流的影响。我们采用Goldblatt两肾一夹方法诱发大鼠心肌肥厚,应用全细胞膜片钳技术记录电流。结果表明：肥厚心肌细胞的Ni2 -敏感Na ／Ca2 交换电流密度大于正常细胞。在钳制电压为＋50mV时,正常细胞的外向交换电流密度为1．53±0．31pA／pF,而肥厚细胞则为2．62±0．53pA／pF（P＜0．01）;钳制电压为-100mV时,正常细胞的内向交换电流密度为0．42±0．14pA／pF,肥厚细胞达1．12±0．33pA／pF（P＜0．001）。这些结果提示,肥厚心肌细胞的Na ／Ca2 交换电流发生了改变,其意义有待进一步探讨。     

严重烫伤延长大鼠心室肌细胞动作电位时程的机制

严重烫伤引起心肌细胞动作电位时程（action potential duration,APD）延长,通过加重烫伤心肌细胞钙紊乱和诱发室性心律失常,促进烫伤心功能障碍的发生,但APD延长的机制尚不清楚。通过制作约40％体表面积（total body surface area,TBSA）Ⅲ度烫伤大鼠模型,在伤后12h大鼠心功能明显减弱时分离其心肌细胞,采用膜片钳技术观察心肌细胞APD以及动作电位复极化相关的重要离子通道电流,包括瞬间外向钾电流（transient outward K^＋ current,Ito）,L-型钙电流（L-type Ca^2＋ current,ICa-L）和内向整流钾电流（inward rectifier K^＋ current,IK1）。结果显示,烫伤后12h单个心肌细胞APD明显延长,APD50和APD90在烫伤组分别为（46．02±3．78）ms、（123．24±12．48）ms（n=19）,明显长于对照组的（23．28±4．85）ms、（72．12±3．57）ms（n=17）（P〈0．01）。烫伤引起,Ito电流密度降低,＋60 mV下烫伤组的电流密度（20．39±1．98）pA／pF（n=25）明显低于对照组的（34．15±3．78）pA／pF（n=20,P〈0．01）;烫伤组在-120至-80mV电压刺激下所产生的IK1电流密度显著低于对照组：而两组之间ICa-L电流密度、电压依赖性的激活和失活无显著性差异。结果提示,烫伤引起心肌细胞APD延长的机制与瞬间外向钾通道和内向整流钾通道功能下调有关。     

DMA增加正常大鼠心肌细胞钙瞬变和收缩

实验观察了钠氢交换或钠钙交换抑制剂 5 (N ,N 二甲基 )氨氯吡咪 (DMA)对正常和心肌肥厚大鼠分离心室肌细胞钙瞬变和细胞收缩的影响。通过负载荧光染料Fura 2 /Am ,应用离子影像分析系统 (IonImagingSystem)同步测定离体大鼠心肌细胞钙瞬变和细胞长度。结果表明 :DMA 10 μmol/L分别使钙瞬变和细胞缩短从对照组的 2 0 9.6 0± 5 4.96和 3.0 7± 0 .97μm增加到 2 38.5 0± 80 .41和 4.0 7± 1.0 2 μm (P <0 .0 5 ,n =7)。应用特异性反向钠钙交换阻断剂KB R7943可完全阻断DMA的激动作用。DMA还可使尼卡地平抑制L 型钙通道后的钙瞬变和细胞收缩增加。在肥厚心肌细胞 ,DMA表现出相同的药理作用 ,但对钙瞬变和细胞缩短的刺激作用更强。结果表明 :DMA可通过反向钠钙交换途径增加正常和肥厚大鼠心肌细胞钙瞬变和细胞收缩 ,且对肥厚心肌细胞的影响比对正常心肌细胞大。     

H_2O_2对人心房肌细胞I_(Kur)和I_(Ca,L)的浓度依赖性双向影响

本实验旨在观察活性氧（reactive oxygen species,ROS）对人心房肌细胞电生理活动特性的影响。取有心房颤动（atrial fibrillation,AF）和非AF心脏手术患者（各12例）右心耳组织,用酶消化法得到单个心房肌细胞。两组细胞（每组n=75）分别随机分为三个亚组：对照组（n=12）、H2O2组（0．1、0．2、0．5、0．75、1、2、5、10μmol／LH2O2,每个浓度n=7）和维生素C（ROS清除30）组（1gmol／L维生素C,n=7）。实验采用全细胞膜片钳方法记录电生理活动。与非AF对照组相比,AF对照组超快速延迟整流钾电流（ultrarapid delayed rectifier K^＋current,KKw）和L-型钙电流（L—type calcium current,ICaL）电流密度（pA／pF）均明显降低（6．27&#177;0．67VS3．77&#177;0．56,P〈0．05;6．31&#177;0．60 vs 3．34&#177;0．32,P〈0．05）,动作电位时程（action potential duration,APD）（ms）也明显缩短（405&#177;13 vs 354&#177;12,P〈0．05）。在非AF和AF组中,H2O2对心房肌细胞,IKw和,ICa,L的电流密度均有浓度依赖性双向影响——高抑低促。非AF组中,H2O2浓度为0．2gmol／L时有最大增强作用,而0．75Bmol／L为分界浓度,人于0．75Bmol／L时,随H2O2浓度增加IKw和,ICa,L的电流密度逐渐降低;在另一方面,0．2、1、2、5和10μmol／LH2O2孵育的心房肌细胞APD90与同组对照组相比均明显缩短（P〈0．05）,而与AF对照组相比无明显差异。在AF组中,H2O2的最大效应浓度为0．5Bmol／L,而1gmol／L为分界浓度。维生素C可以逆转H2O2的上述作用,但单独给予维生素C并不改变通道特性。H2O2诱导正常人心房肌细胞发生电生理活动特性改变与AF时心肌电重构（atrial electrical remodeling,AER）相似,显示ROS可能诱发AF;同时,H2O2又能加重AF时AER,对AF有维持作用。以上结果提示ROS清除剂可能对预防和治疗AF有重要意义。     

心房肌胞内钙浓度变化对心房颤动患者小电导钙激活钾通道电流的影响

目的：SK通道存在于心肌细胞上,其中SK2亚型主要表达在心房。SK2通道对胞内游离钙离子高度敏感,可快速将钙离子浓度的变化转换成细胞膜电位变化。本实验应用穿孔膜片钳技术记录人心肌细胞SK2电流,观察心房肌细胞SK2电流在窦性患者和心房颤动患者之间的差别,以及电极液中不同的钙浓度对两组细胞SK2电流的影响。方法：将接受体外循环手术的患者分为两组：心房颤动组和窦性心律组。以心房肌细胞为研究对象,用穿孔膜片钳技术记录人心肌细胞电流,观察窦性组与房颤组SK2通道电流的差异以及两组细胞SK2电流对电极液中钙敏感性的不同。结果：在全细胞穿孔膜片钳模式下,电极液中游离钙离子浓度为5×10-7mol/L时,记录到房颤组SK2通道电流明显大于窦性组,尤其是在超极化水平。膜电位在-130 mV时,窦性组与房颤组的SK2通道电流密度分别为（-2.92±0.35）pA/pF（n=6）,（-6.83±0.19）pA/pF（n=3,P〈0.05）。在电极液游离钙离子浓度分别为0 mol/L、5×10-7mol/L、10-6mol/L,膜电位为-130 mV时,窦性组SK2通道电流密度分别为（-1.43±0.33）pA/pF（n=7）,（-2.92±0.35）pA/pF（n=6）,（-10.11±2.15）pA/pF（n=8,P〈0.05）;房颤组SK2通道电流密度分别为（-2.17±0.40）pA/pF（n=4）（-6.83±0.19）pA/pF（n=3）（-14.47±2.89）pA/pF（n=4）（P〈0.05）。结论：人心房肌细胞SK2通道具有电压不敏感、内向整流、apamin敏感的特性。电极液中钙浓度相同的情况下,房颤组的SK2电流密度明显大于窦性组,SK2通道电流对钙离子的敏感性高于窦性组,提示SK2通道钙敏感性增加可能与心房颤动的发生发展密切相关。     

内皮素-1预处理对培养乳鼠心肌细胞低氧损伤的保护作用

实验观察了 0 0 1- 1nmol/L内皮素 1(ET 1)预处理对低氧孵育 ( 3 %O2 5 %CO2 ,12h)的培养乳鼠心肌细胞乳酸脱氢酶 (LDH)释放量、培养液上清超氧化物歧化酶 (SOD)活性以及丙二醛 (MDA)含量的影响。用Fluo 3 /AM负载培养的心肌细胞 ,在激光扫描共聚焦显微镜下监测急性低氧的心肌细胞 [Ca2 +]i 的变化和ET 1预处理对低氧所致 [Ca2 +]i 变化的影响。结果如下 :( 1)心肌细胞低氧孵育 12h后 ,培养液上清LDH活力和MDA含量较常氧对照组明显升高 ,分别为 43 3 3± 1 2 1U/Lvs 19 3 3± 1 0 3U/L和 1 71± 0 0 2nmol/Lvs 0 91± 0 0 3nmol/L (P<0 0 1) ,SOD活性为 16 93± 1 11U/ml明显低于常氧对照组的 3 3 48± 1 15U/ml (P <0 0 1) ;0 0 1- 1nmol/LET 1预处理呈浓度依赖性抑制低氧培养心肌细胞LDH释放 ,减少培养液上清MDA含量、提高SOD活性 (P <0 0 1)。 ( 2 )低氧灌流后 2 9± 1 5s (n =2 3 )心肌细胞自发性钙瞬变完全终止 ,[Ca2 +]i 升高了 10 7± 13 2 % (P <0 0 0 1) ;0 0 1- 1nmol/LET 1能明显加快心肌细胞钙瞬变的频率 (P <0 0 1) ;ET 1预处理后低氧所致钙瞬变终止的时间较单纯低氧组明显推迟 ,[Ca2 +]i过度升高被明显减轻 (P <0 0 1)。上述结果表明 ,0 0 1- 1nmol/LET 1预处理可减轻培     

神经肽Y对心室肌细胞离子通道的影响

采用全细胞膜片钳技术观察神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)对心室肌细胞离子通道的影响。结果如下：(1)NPY浓度在1．0～100nmol/L范围内剂量依赖性抑制大鼠心室肌细胞I_(Ca-L),IC_(50)值为1．86nmol/L。NPY对I_(Ca-L)的I-V曲线的最大峰值电位、激活和失活电位均无显著影响。NPY对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)增加的I_(Ca-L)有显著抑制作用。(2)NPY对人鼠心室肌细胞I_(Na/Ca)有显著抑制作用。10nmol/L NPY使前向I__(Na/Ca)由(0．27±0．11)pA/pF减小为(0．06±0．01)pA/pF;反向I__(Na/Ca)由(0．45±0．12)pA/pF降为(0．27±0．09)pA/pF(P＜0．05,n=4)。(3)NPY对大鼠心室肌细胞I_(to)有显著增强作用。10 nmol/L NPY使I_(to)由(12．5±0．70)pA/pF增加至(14．7±0．59)pA/pF(P＜0．05,n=4)。(4)10nmol/L NPY对大鼠心室肌细胞I_(Na)没有显著影响。(5)10nmol/L NPY对豚鼠心室肌细胞I_K无明显影响。研究结果证实,NPY抑制大鼠心室肌细胞I_(Ca-L)和I_(Na/Ca),增强I_(to)对I_Na和豚鼠心审肌细胞I_K没有显著作用,表明NPY对上述主要离子通道的效应与NE的效应相拮抗。     

高脂血症对大鼠心电图的影响及其作用机制

目的：探讨在高脂血症状态下,大鼠心电图的变化情况,及高胆固醇血症对心肌电生理特性影响的机制。方法：将20只Wistar大鼠随机分为空白对照组和高脂饮食组,喂养10周后,检测大鼠的血脂水平、心电图和室颤阈值,并通过全细胞膜片钳记录心室肌细胞的ICa,L;利用组织病理学方法评价对照组及高脂饮食组的大鼠动脉粥样硬化的程度。结果：高脂饮食组的大鼠血脂水平与对照组相比明显增高（P〈0．01）;在高脂饮食组的大鼠动脉血管管壁中,可见广泛分布的粥样硬化斑块。在高脂饮食组的大鼠心电图中,室颤阈值为（4．23±0．12）V,明显低于对照组（12．80±6．34）V,P〈0．05。高脂饮食组大鼠的QTe间期（94±16）ms,与对照组（67±12）ms相比明显延长,P〈0．05。高脂饮食组大鼠的心室肌细胞的ICa,L密度为（12．83±3．28）pA／pF,与对照组（9．21±2．16）pA／pF相比明显高,P〈0．05。结论：高脂饮食后,大鼠的心电图有明显变化,QTe间期延长;高胆固醇血症能明显增加大鼠心肌细胞的ICa,L的,延长复极时程,降低室颤阈值。     

腺苷抗豚鼠室性心律失常的电生理研究

实验用全细胞膜片钳技术在单个豚鼠心室肌细胞上研究了腺苷 (Ado)对正常及异丙肾上腺素 (Iso)致豚鼠心室肌细胞动作电位、迟后除极 (DAD)、L 型钙电流 (ICa.L)和短暂内向电流 (Iti)的作用。结果表明 :(1)Ado在2 0～ 10 0 μmol/L时对豚鼠心室肌细胞动作电位和ICa .L无明显直接作用 ,但却可明显降低Iso所致的动作电位时程(APD)延长和ICa .L峰值增大 ,Iso (10nmol/L)使细胞APD50 从 3 40± 2 1ms延长到 486± 2 8ms (P <0 0 1) ,APD90从 3 61± 17ms延长至 5 0 1± 2 9ms (P <0 0 1) ;ICa .L峰值从 - 6 5 3± 1 4pA/pF增大到 - 18 2 8± 2 4pA/pF (P <0 0 1) ,电流电压曲线明显左移和下移 ;Ado (5 0 μmol/L)使APD50 和APD90 降至 40 3± 19ms和 419± 2 6ms ,但并不影响动作电位其它参数 ,使ICa.L峰值降低至 - 10 2± 1 5pA/pF (P <0 0 1)。 (2 )Iso (3 0nmol/L)可诱发心室肌细胞产生DADs,其发生率为 10 0 % ;Ado (5 0 μmol/L)可完全抑制Iso引发DADs;细胞经 - 40～ +2 0mV、时程 2s的除极电压 ,Iso (3 0nmol/L)诱导出Iti,其发生率为 10 0 % ;Ado (5 0 μmol/L)可明显抑制Iso致Iti的发生 ,其发生率降为 14 3 %。研究结果提示 ,Ado对豚鼠心室肌细胞动作电位和ICa.L无明显直接作用 ,但却可显著降低Is     

尼氟灭酸通过钙库钙释放引起豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞超极化(英文)

本研究旨在观察氯离子通道阻断剂尼氟灭酸（niflumic acid,NFA）引起豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞产生超极化的机制。以豚鼠为实验动物,运用细胞内微电极和全细胞膜片钳记录技术,观察NFA和其它药物对急性分离的耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞的作用。结果显示：NFA、indanyloxyacetic acid94（LAh-94）和diSOdium4,4’-diisothiocyanatostilbene-2,2’-disulfonate（DIDS）可使低静息膜电位的细胞产生超极化,但对高静息膜电位的细胞无明显作用。低静息膜电位细胞的平均静息电位为（-42．47&#177;1．38）mV（n=24）,100μmol／LNFA、10μmol／LIAA-94和200μmol／LDIDS分别使细胞超极化至（13．7&#177;4．3）mV=9,P〈0．01）,（11．4&#177;4．2）mV（n=7,P〈0．01）和（12．3&#177;3．7）mV（n=8,P〈0．01）,这种氯离子通道阻断剂引起细胞超极化反应的效应呈浓度依赖性。NFA引起的超极化和外向电流几乎完全被100nmol／L iberiotoxin、100nmol／L charybdotoxin、10mmol／L tetraethylammonium、50μmol／LBAPTA—AM、10μmol／Lryanodine和0．1-10mmol／Lcaffeine阻断,但不能被100μmol／Lnifedipine、100μmol／LCdCI,和无Ca^2＋灌流外液阻断。结果捉示：氯离_了通道的阻断剂NFA可通过平滑肌细胞内钙库的钙释放增加细胞内钙,进而激活钙依赖的钾通道,产生耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞的超极化反应。     

胞外镁离子对SD成年大鼠心肌细胞胞内钙信号的影响

目的：研究胞外不同浓度的镁离子对SD成年大鼠心肌细胞钙瞬变的影响。方法：采用激光共聚焦显微镜系统同步配合阈上电刺激探测心肌细胞钙瞬变。结果：胞外低浓度的镁离子（0 mmol /L,0.5 mmol /L; 正常镁离子浓度为1 mmol/L）可以升高钙瞬变的峰值（P〈0.05）,但不影响钙瞬变的持续时间（以钙瞬变的半高宽表示）（P〉0.05）;胞外高浓度的镁离子（2.5 mmol /L,5 mmol /L,10 mmol /L）均可抑制钙瞬变的峰值（P〈0.05）;其中5 mmol/L和10 mmol/L的胞外镁还能延长钙瞬变的持续时间（P〈0.05）。结论：正常情况下镁对心肌细胞钙瞬变有抑制作用。     

钙调神经磷酸酶信号通路参与钙激动剂介导的心肌细胞肥大

目的在于探讨不同来源的细胞内游离钙(［Ca2+］i）对钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）依赖信号通路和心肌细胞肥大的影响。方法以原代培养的乳鼠心肌细胞为模型,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、雷尼丁（RY）和三磷酸肌醇（IP3）（浓度均为10-7mol／L）激活心肌细胞［Ca2+］i,应用钙荧光指剂Fura-2／AM动态观测心肌细胞［Ca2+］i浓度,同时检测心肌细胞CaN活性及蛋白表达。用氚-亮氨酸（3H-Leu）掺入量测定心肌细胞蛋白质合成速率。结果发现AngⅡ、RY和IP3明显增加心肌细胞［Ca2+］i浓度、CaN活性及蛋白表达并提高3H-Leu的掺入量,与对照组心肌细胞相比差异显著（P＜0．01）。结论激活心肌细胞［Ca2+］i可明显提高心肌细胞蛋白合成速率,心肌细胞CaN活性及蛋白表达似与细胞［Ca2+］i变化有明显关系而与其来源无关,表明CaN信号通路在心肌细胞生长中发挥重要作用。     

慢性低氧对豚鼠右室心肌细胞钙、钾电流的影响

采用全细胞膜片箝技术,分别记录并比较正常对照组与慢性低氧组豚鼠单个右室心肌细胞的膜电容、L型钙电流和延迟整流钾电流峰值和电流-电压关系曲线,以探讨慢性低氧对豚鼠右室心肌细胞L型钙电流和延迟整流钾电流的影响。结果表明,上述两组细胞膜电容分别为（155±13．2）pF、（179±14,8）pF,低氧组显著大于正常对照组（P＜0．01）;L型钙电流峰值分别为（1．07±0．21）nA和（0．99±0．17）nA,两组之间无显著差异;在-20mV至＋20mV,慢性低氧组L型钙电流密度较正常对照组显著下降（P＜0．05）。在＋月mV至＋60mV之间,慢性低氧组豚鼠右室心肌细胞延迟整流钾电流幅度均小于正常对照组;在-20mV至＋60mV之间,慢性低氧组豚鼠右室心肌细胞延迟整流钾电流密度明显低于正常对照组。可见慢性低氧能使豚鼠右室心肌细胞膜电容增加,L型钙电流幅度不变,但L型钙电流密度下降;同时慢性低氧降低豚鼠右室心肌细胞延迟整流钾电流幅度和密度。     

蝎毒耐热蛋白对大鼠海马神经元钠通道的抑制作用

应用全细胞膜片钳技术观察蝎毒耐热蛋白（scorpion venom heat resistant protein,SVHRP）对急性分离大鼠海马神经元电压依赖性钠通道的影响。结果表明,急性分离大鼠海马神经元产生的河豚毒素（tetrodotoxin,TTX）敏感的电压依赖性钠电流被SVHRP浓度依赖性地抑制,半数抑制浓度为（0．0034±0．0004）μg／mL,Hill常数为0．4361±0．0318;SVHRP可使钠通道稳态激活曲线向电压的正方向移动,正常TTX敏感的钠通道的半数激活电压（V1/2）为（-34．38±0．62）mV（n=16）,给予0．1μg／mL的SVHRP后V1/2为（-23．96±0．41）mV（n=8,P〈0．05）,斜坡因子（κ）由正常的4．52±0．52变为3．73±0．08（n=8,P〈0．05）。SVHRP亦能改变电压依赖性钠通道的稳态失活曲线,使其向电位的负方向移动,SVHRP处理前钠通道半数失活电压（V1/2）为（-32．60±1．52）mV,κ为6．73±0．51（n=16）;0．1μg／mL的SVHRP处理后V1/2变为（-50．69±2．55）mV（n=8,P〈0．01）,κ为5．49±0．72（n=8,P〈0．05）。结果提示,SVHRP能抑制电压依赖性钠电流,改变钠通道的动力学特性,抑制其激活,促进其失活,从而影响神经元的兴奋性,这可能是其抗癫痫的机制之一。     

Daxx过表达对氧化应激诱导的肝肿瘤细胞凋亡的影响

死亡结构域相关蛋白Daxx可以敏化多种肿瘤细胞的凋亡过程,但对于肝肿瘤细胞株HepG2的影响未见报道．为了研究Daxx增加肝HepG2细胞对药物敏感性的影响及机制,为开发药物新的药理作用提供理论依据,分别转染pEGFP-C1和pEGFP-C1-Daxx这两个载体到HepG2细胞．实验分组如下：（1）正常对照组（未转染细胞组）;（2）pEGFP-C1空载体转染组（HepG2/GFP细胞）;（3）pEGFP-C1-Daxx表达载体转染组（nepG2/GFP-Daxx细胞）．筛选稳定细胞株,用逆转录聚合酶链反应检测mRNA的表达;用过氧化氢孵育24h诱导细胞凋亡,采用MTT法和流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测蛋白质的表达．经G418筛选稳定的细胞运用RT-PCR技术分析其mRNA,结果显示,转染绿色荧光蛋白Daxx表达载体的细胞Daxx的mRNA明显上调：用荧光显微镜观察到Daxx蛋白主要定位于细胞核．用过氧化氢诱导HepG2细胞凋亡,观察到过氧化氢呈浓度依赖性地抑制HepG2细胞活性．正常对照细胞、HepG2／GFP、HepG2／GFP-Daxx 3组细胞的IC50值分别是0．72、0．76、0．49mmol／L．并且运用流式细胞仪检测到HepG2／GFP-Daxx组细胞凋亡率明显高于转染空载体质粒组与未转染组（（42．9&#177;8．42）vs（27．3&#177;6．38）or（28．5&#177;4．71））．提示HepG2/GFP-Daxx细胞对过氧化氢的反应性较未转染细胞和HepG2/GFP敏感．还运用Western-blot检测到活化的caspase3在Daxx转染组细胞表达最强,达到（204．66&#177;19．68）％,而未转染和HepG2/GFP组细胞分别是（100&#177;3．1）％、（107．39&#177;20．1）％,进一步说明了Daxx可以增加HepG2细胞对于过氧化氢的敏感性．同时,观察到过氧化氢处理24h后,Daxx转染组细胞磷酸化的JNK表达明显高于空载体转染组和未转染细胞组．上述结果表明：a．Daxx可以增加肝HepG2细胞对过氧化氢诱导的细胞凋亡敏感性;b．Daxx蛋白敏化过氧化氢诱导的HepG2细胞凋亡可能与协同增加JNK活性有关．     

氨甲酰胆碱增加大鼠心室肌细胞收缩机制的初步研究

目的:本文研究非选择性M受体激动剂氨甲酰胆碱(Cch)对心肌细胞收缩的作用,并同时观察L-型钙流,探讨其机制.方法:以分离大鼠的单个心室肌细胞为对象,采用膜片钳和单细胞收缩测量技术,在35℃恒温,细胞外钙离子浓度1.8 mmol/L,0.2 Hz,1.0 Hz刺激下测量细胞收缩幅度和ICa(L)、INa/Ca.结果:①大鼠心肌细胞收缩与刺激频率呈负相关;②选择△L0.2 Hz/△L1.0 Hz≥1.25(n=6)的细胞给予1.0 Hz的刺激,100 μmol/L Cch增加大鼠心室肌细胞收缩28%.③ Cch作用能被非选择性M受体阻滞剂阿托品阻滞,选择性M1受体激动剂MCN-A-343 100 μmol/L对细胞收缩无影响.④ 100 μmol/L Cch对ICa(L)无影响,但增加从 10 mV复极到-40 mV所产生的晚期尾电流,提示INa/Ca加大.结论:Cch能加强大鼠心室肌细胞收缩,它的作用由M2受体介导,其机制可能是通过加强INa/Ca,增加肌质网(SR)内的钙内容和钙释放,导致细胞收缩加强,而非通过L-型钙流.     

环加氧酶-2抑制剂尼美舒利通过改善内皮功能和增加NO含量对抗大鼠心肌氧化应激损伤

本文旨在研究冠状动脉内皮和NO在选择性环加氧酶2（cyclooxygenase2,COX-2）抑制剂尼美舒利（nimesulide）对抗心肌氧化损伤中的作用。离体大鼠心脏行Langendorff灌流,给予H2O2（140Bmol／L）观察心脏收缩功能。用U-46619灌流心脏,使冠状动脉预收缩后,观察冠状动脉对内皮依赖性舒张因子5-HT和内皮非依赖性舒张因子硝普钠（sodiumnitroprusside,SNP）的反应。结果显示：（1）与空白对照组（100％）相比,H202灌流20min后,左心室发展压[left ventriculardevelo pedpressure,LVDP,（54．8±4．0）％],和心室内压最大变化速率【±dp／dtmax（50．8±3．1）％和（46．2±2．9）％]明显降低。H2O2灌流前尼美舒利（5μmol/L）预处理10min,能够显著抑制H2O2引起的LVDP和μdp/dtmax下降[（79．9±2．8）％,（80．3±2．6）％和（81．4±2．6）％,P〈0．0l]。（2）与空白对照组相比,H2O2灌流后,5-HT和SNP引起内皮依赖性和内皮非依赖性血管舒张功能均明显下降;而尼美舒利预处理10min能明显对抗内皮依赖性血管舒张功能的下降[（-22．2±4．2）％vsH2O2组（-6．0±2．5）％,P〈0．0l],但对其内皮非依赖性血管舒张功能的下降没有明显作用[（-2．0±1．8）％vsH202组（-7．0±3．5）％,P〉0．05]。（3）一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）抑制剂L-NAME能够部分取消尼美舒利预处理对H20,应激心脏心功能指标的改善作用ILVDP和±dp/dtmax分别为（60．2±2．1）％,（63．9±2．4）％和（63．1±2．9）％,P〈0．01]。同时尼美舒利预处理10min能使H202应激心肌NO含量增加[（2．63±0．40）vs（1．36±0．23）nmol／gprotein,P〈0．051,而L-NAME抑制此作用。（4）选择性COX-1抑制剂吡罗昔康（piroxicam）预处理不能抑制H202引起的LVDP和±dp/dtmax下降,但促进左心室舒张末压（1eftventricular end diastolicpressure,LVEDP）升高;吡罗昔康对H202引起的内皮依赖性和内皮非依赖性血管舒张功能下降无显著作用。以上结果提示,选择性COX-2抑制剂尼美舒利能够对抗大鼠离体心肌氧化应激损伤,其机制可能是通过改善内皮依赖性血管舒张功能和增加心肌NO含量起作用。     

持续癫痫样放电导致海马神经元钙离子动力学变化的研究

目的：研究低镁介质致痫的培养海马神经元癫痫模型中神经元内游离钙离子（[Ca^2＋]i）的时空分布及其动力学改变,以探讨钙离子在癫痫发病过程中的作用。方法：联合应用共聚焦激光扫描显微镜和膜片钳,运用较高时间分辨率动态观察培养海马神经元癫痫模型[Ca^2＋]i和电生理变化,以及化学门控钙离子通道阻滞剂的影响。结果：致痫后海马神经元胞浆和核内游离钙离子迅速上升到（612±65）nmol／L和（620±69）nmol／L水平,NMDA受体阻断剂MK-801（10μmol／L）和非NMDA受体阻断剂NBQX（10μmol／L）可使[Ca^2＋]i的升高明显减少;升高的[Ca^2＋]i恢复有明显的延迟现象,90min和150min癫痫样放电后[Ca^2＋]i恢复的时间分别为（114．8±5．2）和（135．0±22．7）（P〈0．05）。结论：持续的癫痫样放电可导致海马神经元细胞内钙超载,这个效应可被MK-801阻断,化学门控钙离子通道也参与了细胞外Ca^2＋内流的过程。