从白腐菌中筛选漆酶高产菌株的初步研究

从中国分离的149株木腐菌中,有30株具有漆酶活性。在添加了阿魏酸的液体培养基中,漆酶产量高(每升培养液中漆酶含量在10000单位以上)的菌株有9个:游离细胞培养的彩绒革盖菌Coriolus versicolor G30,相邻小孔菌Microporus affinis G07,血红密孔菌Pycnoporus sanguineus W006,W006-2,W3008,G05和香菇Lentinus edodes G18,以及固定细胞培养的鲑贝革盖菌Coriolus consors 98563和干酪菌Tyromyces sp. 98420。彩绒革盖菌、相邻小孔菌和血红密孔菌具有重要的生物工程研究价值。     

彩绒革盖菌CV—8漆酶和多酚氧化酶活性

彩绒革盖菌（Ｃｏｒｉｌｕｓｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）是一种具有木质素降解能力的白腐菌,其降解木素的能力主要取决于木质素过氧化物酶、漆酶、多酚氧化酶和愈创木酚氧化酶的活力高低,所以研究其活力和分泌情况对木质素的生物降解、生物制浆和环境保护具有十分重要的意义。国外已有彩绒革盖菌漆酶的报道［１,２］,但主要集中在漆酶对木质素作用后所造成的木质素结构上的变化,有关漆酶和多酚氧化酶的活性分析报道较少［３］;国内有关的研究报道更少［４,５］,至今未见彩绒革盖菌漆酶和多酚氧化酶的研究报道。本文主要测定了彩绒革盖菌…     

彩绒革盖菌CV-8胞外漆酶的诱导、纯化及部分性质研究

为探讨彩绒革盖菌(Coriolus versicolor)漆酶的生产条件和性质,对其进行了硫酸铵盐析、半透膜透析、DEAE-纤维素离子交换、Sephadex G100柱层析纯化,粗酶液被纯化36.1倍,比活力10180u/mg,回收率44.6%。凝胶过滤法测定酶的分子量为62kDa。研究了漆酶的产酶曲线及酶作用最适条件。结果表明在该培养条件下,彩绒革盖菌第11d达产酶高峰,峰值酶活为398u/ml,酶作用的最适pH值为4.6,最适温度为25℃,Mg2 、Mn2 、Cu2 对漆酶有激活作用,而Ag 、Fe3 和Cl-则抑制漆酶活性。以邻联甲苯胺为底物的表观Km值为892×10-3mol/L。该菌可作为木质素降解和环保工业漆酶生产菌种。     

不同真菌漆酶的性质研究

为了更好开发利用漆酶,用邻联甲苯胺法比较分析了彩绒革盖菌、毛栓菌和多孔菌在液体培养时的产酶曲线、酶作用的最适pH值、最适酶解温度及无机离子对酶活的影响。结果表明,不同漆酶产酶曲线不同,彩绒革盖菌和多孔菌,第9d达产酶高峰,峰值活力分别达395.6u/ml和412.2u/ml;毛栓菌,第11d达到产酶高峰,峰值本科活较不同真菌漆酶的性质研究高达554.6u/ml。漆酶性质有明显差别,最适酶解温度不同,彩绀革盖菌和多孔菌漆酶最适酶解温度为25℃;毛栓菌为30℃;最适酶解pH值有差异,彩绒革盖菌漆酶最适酶解,pH值为4.5,毛栓菌为4.0,多孔菌为4.2;不同离子对酶活的影响不同;K^、Zn^2 、对彩绒革盖菌所产漆酶有激活作用;K^ 、Zn^2 、Cu^2 对毛栓菌所产漆酶有激活作用;Mn^2 、Mg^2 对多孔菌所产漆酶有激活作用;Ag^ 、Fe^3 对三种菌所产漆本科均有明显抑制作用。     

高酶活菌株的筛选及漆酶特性

通过Bavendamn氏反应和液体发酵实验筛选出漆酶高产菌株 ,并对其产酶条件和酶活性进行了研究。结果表明 71株实验真菌中有 64株Bavendamn氏反应呈阳性 ,且阳性菌株都具有漆酶活性 ;不同菌株产酶培养基最适碳源、氮源不同 ,采绒革盖菌以淀粉为碳源、干酪素为氮源 ,毛栓菌以麦草粉为碳源、硫酸铵为氮源 ,有利于酶的分泌 ;不同来源漆酶性质不尽相同 ,采绒革盖菌漆酶最适酶解温度为 2 5℃ ,最适酶解pH值为4.6,毛栓菌则分别为 3 0℃和 pH 4.0 ;K+ ,Zn2 + 等对 2种漆酶均有激活作用 ,Ag+ 则能明显抑制漆酶活性。     

碳源和氮源对彩绒革盖菌液体发酵合成漆酶的影响

研究了碳源、氮源对彩绒革盖菌液体发酵合成漆酶的影响。结果表明,在所选的几种碳、氮源中,麸皮为试验菌株合成漆酶的较好碳源;酵母浸膏、酒石酸铵、蛋白胨均是比较理想的氮源。不同的碳氮比对彩绒革盖菌漆酶的产量有着显著的影响,高碳高氮是其生产漆酶的最佳条件。在适宜的培养条件下该菌株能合成高活力的漆酶,其酶活力可达298 U/mL以上,产酶周期为6~7 d。     

血红密孔菌高产漆酶菌株的筛选及其对烟梗的生物降解

白腐菌是目前已知的唯一能将木质素彻底降解的微生物,而漆酶在木质素分解过程中起着重要的作用,被广泛应用于农作物秸秆或甘蔗渣等多种类型生物质的生物预处理和生物降解。本研究利用白腐菌产漆酶发酵培养基对30株血红密孔菌Pycnoporus sanguineus菌株进行筛选,得到了多株漆酶高产菌株,并研究了血红密孔菌发酵粗酶液和菌丝对烟梗的生物降解条件。研究结果表明:血红密孔菌及其产生的漆酶表现出了对烟梗木质素较强的生物降解能力。在漆酶浓度为40U/mL、温度30℃、pH4.5的条件下处理24h,烟梗中木质素的降解率可达到50.4%,纤维素和半纤维素的降解率分别为17.5%和17.3%;漆酶浓度为5U/mL、温度30℃、pH4.5的条件下处理48h,木质素降解率可达到65.1%。血红密孔菌菌丝也表现出对烟梗较好的生物降解效果,接种培养7d后烟梗中木质素降解率可达30%以上,21d后木质素的降解率可达79.1%,而纤维素和半纤维素的降解率仅为20%和12%左右。本研究不但为生物质材料的生物预处理和生物降解提供了优质的白腐菌及漆酶资源,还为通过烟梗的生物预处理提高烟草梗丝和卷烟品质提供了重要参数,具有一定的应用前景。     

彩绒革盖菌在猪粪堆肥中应用的初步研究

在以猪粪为原料的静态条垛堆肥的堆体试验中添加了彩绒革盖菌,研究其对堆肥发酵的影响。研究表明彩绒革盖菌在堆肥二次发酵时期有利于堆体温度的提升和保温,说明了在进入堆肥后期彩绒革盖菌对其中剩余的木质素等成分有很好的分解能力,有利于堆肥的腐熟和养分的释放,初步表明彩绒革盖菌是一株理想的堆肥发酵菌株。     

彩绒革盖菌固体发酵生产木质素酶工艺优化研究*

采用均匀设计U15(5^8)和双温度培养法进行彩绒革盖菌固体发酵生产木质素酶,对漆酶、愈创木酚酶、多酚氧化酶的活力进行回归分析。结果表明：应用双温度培养法进行彩绒革盖菌固体发酵生产木质素酶时,在自然补给氧气,培养基pH自然(约6．5),并保持环境湿度约60％的条件下,20d是适宜的发酵周期;玉米浆、麸皮、(NH4)2SO4、水分适宜作为固体培养基的成分;少量的Tween-80有利于木质素酶的生产。     

碳素和氮素对Coriolus versicolor胞外酶分泌的影响

采用单因子相互比较法研究了不同碳素和氮素对彩绒革盖菌胞外漆酶,愈创木酚氧化酶,多酚氧化酶,锰过氧化物酶等木素降解酶分泌的影响,结果淀粉作碳源,干酪素作氮源有利于漆酶的分泌,麦芽粉作碳源,酵母膏作氮源有利于愈创木酚氧化酶和多酚氧化酶的分泌,淀粉作碳源,玉米粉作氮源有利于锰过氧化物酶的分泌。     

彩绒革盖菌CV—8漆酶活性的初步研究

木质素是一种高度复杂的不定形的芳香族化合物,是仅次于纤维素的第二大再生有机资源,木质素的微生物降解及其有关酶类在制浆造纸工业和环境保护方面具有较大潜力。木质素的生物降解酶主要有木素过氧化物酶、漆酶、锰过氧化物酶和多酚氧化酶等。国外该方面的研究已有不少报道［1－5］,但多集中在黄抱原毛平革菌（Phanerochaetechrysosporium）木素过氧化物酶和锰过氧化物酶方面的研究;Leatham和Stahmam曾研究了香菇（Lentinusedodes）的漆酶特性[6];国内有关研究报道较少[7,8],至今未见彩绒革盖菌漆酶研究的报道。我们就此做了些探讨…     

碳源和氮源对彩绒革盖菌Coriolus versicolor木质纤维素酶和木质素酥分泌

研究了彩绒革盖菌在不同硬源和氮源培养基中生长时,对纤维素酶、革纤雄素酶、本质素酶（漆酶、多酚氧化酶、愈创木酚氧化酶）分泌的影响。表明不同碳源和氮源对酶类失发泌影响很大,富含淀粉的物质能明显促进本质素酶的分泌,而专一性底物（纤维素和半纤维素）对纤维素酶和半纤维素酶有诱导作用,麸皮也能话导半纤维素酶的产生。     

天然介体在产漆酶真菌氧化蒽和芘中的重要作用(英文)

【目的】研究氧化还原介体在产漆酶真菌氧化蒽和芘的作用。【方法】通过非变性电泳和酶活力分析。【结果】发现血红密孔菌Z-1和木蹄层孔菌Z-5只产漆酶,其最大酶产量分别为11.90 U/mL和4.83 U/mL,不产木质素过氧化酶和锰过氧化物酶。木蹄层孔菌Z-5的胞外液尽管具有较低的漆酶活性,但是氧化了74.3%的蒽和12.4%的芘,高于血红密孔菌Z-1对蒽和芘的氧化率,提示天然介体可能存在于真菌胞外液中并且影响了漆酶对多环芳烃的氧化。实验进一步表明,木蹄层孔菌Z-5灭活和不灭活的超滤液以及灭活的胞外液对纯漆酶氧化多环芳烃的促进作用均大于血红密孔菌Z-1,说明木蹄层孔菌Z-5的天然介体比血红密孔菌Z-1能够更为有效地促进多环芳烃氧化。【结论】氧化还原结体在产漆酶真菌降解底物过程中发挥了重要作用,这也解释了木蹄层孔菌Z-5胞外液尽管漆酶活性不高,但是具有较大多环芳烃氧化率的原因。     

天然介体在产漆酶真菌氧化蒽和芘中的重要作用（英文稿）

【目的】研究了氧化还原介体在产漆酶真菌氧化蒽和芘的作用。【方法】通过非变性电泳和酶活力分析。【结果】发现血红密孔菌Z-1和木蹄层孔菌Z-5只产漆酶,其最大酶产量分别为11.90 U/mL和4.83 U/mL,不产木质素过氧化酶和锰过氧化物酶。木蹄层孔菌Z-5的胞外液尽管具有较低的漆酶活性,但是氧化了74.3%的蒽和12.4%的芘,高于血红密孔菌Z-1对蒽和芘的氧化率,提示天然介体可能存在于真菌胞外液中并且影响了漆酶对多环芳烃的氧化。实验进一步表明,木蹄层孔菌Z-5灭活和不灭活的超滤液以及灭活的胞外液对纯漆酶氧化多环芳烃的促进作用均大于血红密孔菌Z-1,说明木蹄层孔菌Z-5的天然介体比血红密孔菌Z-1能够更为有效地促进多环芳烃氧化。【结论】氧化还原结体在产漆酶真菌降解底物过程中发挥了重要作用,这也解释了木蹄层孔菌Z-5胞外液尽管漆酶活性不高,但是具有较大多环芳烃氧化率的原因。     

彩绒革盖菌漆酶及多酚氧化酶活性研究

测定了彩绒革盖菌在ＰＤＹ液体培养基中的漆酶和多酚氧化酶活性。在３０℃,１１０ｒ／ｍｉｎ,恒温振荡培养条件下,漆酶第９ｄ达产酶高峰,最高酶活３９５．６ｕ;多酚氧化酶第１４ｄ达产酶高峰,峰值５４９．０ｕ;酶作用的最适酸碱度为：漆酶ｐＨ４．６,多酚氧化酶ｐＨ５．０;最适作用温度漆酶为２５℃,多酚氧化酶为３０℃;Ｋ＾＋、Ｚｎ＾２＋等离子对漆酶有激活作用,Ｍｎ＾２＋、Ｂａ＾２＋、Ｍｇ＾２＋等离子对多酚氧化酶     

彩绒革盖菌愈创木酚氧化酶活性研究

本文测定了彩绒革盖菌在PDY液体培养基中的愈创木酚氧化酶活性。在30℃,110 r/min,恒温振荡培养条件下,第16天达产酶高峰,酶活性218.0 u;酶作用的最适pH为4.0;最适温度30℃;Ba2+、Mg2+、Cu2+等离子对愈创木酚氧化酶有激活作用,Ag+离子对酶活性有明显的抑制作用。     

血红密孔菌(Pycnoporussanguineus)漆酶基因的克隆与序列分析

为克隆血红密孔菌 (Pycnoporussanguineus)漆酶基因 ,根据真菌漆酶氨基酸序列保守区设计了 1对简并引物 .以血红密孔菌基因组DNA为模板 ,PCR扩增出长 12 2 7bp的漆酶基因片段 .以此序列为基础 ,通过 5′及 3′RACE技术克隆出漆酶全长cDNA序列 ,序列长为 190 2bp ,其 5′端和 3′端非编码区长分别为 5 1bp和 2 97bp ,开放阅读框长 15 5 4bp ,编码 5 18个氨基酸的蛋白 .该蛋白具有 4个铜离子结合区域 ,预测其相对分子量为 5 6 313 2 ,等电点为 5 5 9,其氨基酸序列与Pycnoporuscinnabarinus漆酶 (lcc3 2 )的同源性最高 ,为 96 % .以该cDNA编码区的两端序列为引物 ,PCR扩增得到漆酶的长度为 2 15 4bp的全长DNA序列 ,序列中包括 10个内含子序列 ,长为 5 2～ 70bp     

彩绒革盖菌多酚氧化酶活性研究

本文测定了彩绒革盖菌在PDY液体培养基中的多酚氧化酶活性。在30℃,110 r／min,恒温振荡培养条件下,多酚氧化酶第14天达产酶高峰,最高酶活549.Ou;酶作用的最适酸碱度为pH 5.0;最适作用温度30℃;Mn2+、Ba2+、Mg2+等离子对多酚氧化酶有激活作用,Ag+、Fe3+等离子对酶活则有明显的抑制作用。     

层孔菌产漆酶的摇瓶最适培养条件研究

筛选到一株高产漆酶的层孔菌W－1,对其兴体产漆酶的培养条件进行了优化,确定了最适的碳源、氮源,并用正交试验确定了培养基中碳源和氮源的浓度。在最优化的培养条件下,培养7d后,W－1产生的漆酶活力可以达到7．1U／mL。采用补料的方法,可以得到大量的漆酶粗酶液。     

防霉防菌技术信息摘要

<正>木材防腐防霉效果检测1、木材防腐效果检测依照GB/T 13942.1-2009标准进行。此标准适用于在实验室条件下,检测木腐菌对木材的浸染而引起的木材质量损失,以评定木材的耐腐等级。供试菌种:针叶树材:绵腐卧孔菌(Poria placenta)或密黏褶菌(Gloeophyllum trabeum);阔叶树材:采绒革盖菌(Coriolus versicolor)或密黏褶菌(Gloeophyllum trabeum)。温度(28±2)℃,湿度:75%~85%,时间:12周。评定标准: